尿液中四氢大麻酸检测方案(液质联用仪)

SSL-CA20-466Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-536 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LCMS-8045 测定尿液中的A9-四氢大麻酸含量 LCMSMS-536 摘要：本文参考 《GB/T 37272-2018尿液中△9-四氢大麻酸的测定液相色谱-串联质谱法》，使用岛津LCMS-8045三重四极杆液质联用仪，建立了尿液中△9-四氢大麻酸的分析方法。尿液中添加内示后，在碱性条件下水解，然后在酸性条件下用有机溶剂萃取，离心取上清液，吹干后定容待测。以保留时间和离子对相对丰度比为定性依据；空白样品加入内标和系列浓度标准样品，处理后，制作校准曲线，内标法定量检测△9-四氢大麻酸含量。结果表明：A9-四氢大麻酸在样品中的定量限低于 10 ng/mL， 满足标准要求；空白样品添加A9-四氢大麻酸和内标后处理，在10-1000 ng/mL的线性范围内，各标点浓度准确度分别在 85.8-107.9%之间，R为0.9991；残留考察结果表明 ULOQ加标样品进样后无明显系统残留；空白样品添加不同浓度△9-四氢大麻酸后进行处理，检测结果满足标准关于定性和定量结果的要求。该方法灵敏度和准确度高，适合尿液中的△9-四氢大麻酸检测。 近些年来，大麻的滥用日益成为禁毒工作面临的严峻考验之一。△9-四氢大麻酚(THC) 是大麻的主要成分之一，也是其中最主要的精神活性成分，其对人体中枢神经系统有极强的刺激作用，对运动机能的影响可持续数个小时甚至数天。A9-四氢大麻酸 (THC-COOH)是△9-四氢大麻酚在人体内的主要代谢产物，通过检测尿液中的△9-四氢大麻酸可为判断被检者是 否吸食大麻提供重要的判案依据。 本文参照《GB/T37272-2018尿液中A9-四氢大麻酸的测定液相色谱-串联质谱法》，使用岛津LCMS-8045三重四极杆液质联用仪，建立了尿液中9-四氢大麻酸的分析方法。该方法灵敏度和准确度高，适合尿液中9-四氢大麻酸的检测。 系统控制器： CBM-40自动进样器：SIL-40CX3输液泵： LC-40BX3质谱仪：LCMS-8045 柱温温： CTO-40S 色谱工作站：LabSolutions Ver. 5.99 SP2 1.2分析条件 液相色谱条件： 色谱柱： Shim-pack GIST C18， 50 mm×2.1 mm l.D.， 2 um(岛津(上海)实验器材有限公司， P/N： 227-30001-02) 流动相：A-20mM 乙酸铵水溶液；B-乙腈 流速：0.20 mL/min 柱温：25℃ 进样量：5uL 质谱条件： 分析仪器：LCMS-8045 加热模块温度：300℃ 离子源： ESI DL温度：250℃ 雾化气流速：3.0L/min 离子源温度：400℃ 加热气流速：10.0L/min 扫描模式：多反应监测(MRM) 干燥气流速：10.0L/min MRM 参数：见表1 表1 MRM 参数 序号 化合物名称 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE Q3Pre Bias(V) 1 343.10 352.20 299.30* 16.0 21.0 14.0 A9-四氢大麻酸 245.10 26.0 28.0 11.0 2 A9-四氢大麻酸-d9 308.20 10.0 22.0 15.0 *定量离子对 1.3样品前处理 参照《GB/T 37272-2018 尿液中9-四氢大麻酸的测定液相色谱-串联质谱法》中“7.1.1样品提取”部分，精密量取1 mL待测尿液，加入内标后，加入1mL的1 mol/L 氢氧化钠溶液调 pH至13，80℃水浴中水解30min，冷却后加入1mL 的1 mol/L 盐酸溶液调pH至7-8，再加入100 uL冰乙酸，调pH至4-5，加入3mL正己烷：乙酸乙酯(9：1)，涡旋，离心，取上清液，60℃水浴氮气吹干，残留物中加入200 uL乙： 20 mmol/L乙酸铵溶液(9：1)定容，上机分析。 结果讨论 2.1专属性和灵敏度 空白样品和空白加标10 ng/mL样品(方法定量限浓度)的 MRM 色谱图如图1所示，空白样品无干扰。目标组分该浓度色谱峰 S/N 远大于10，满足灵敏度要求。 图1 空白样品和10 ng/mL加标样品 MRM色谱图 2.2校准曲线 空白样品中添加△9-四氢大麻酸，处理后得浓度分别为 10、20、50、100、500、1000 ng/mL 的样品溶液，内标法建立校准曲线如图2所示。 图2校准曲线 2.3残留考察 ULOQ加标样品进样后，空白样品与10 ng/mL 样品 (LLOQ)色谱图如图3所示，△9-四氢大麻酸保留时间处无明显色谱峰。 图4 残留考察 2.4重复性考察 对不同浓度的基质加标样品分别连续分析6次，计算保留时间和峰面积的 RSD. 结果见表2，保留时间 RSD均不高于0.13%，峰面积RSD 均不高于9.05%. 表2保留时间和面积RSD 名称 进样浓度(ng/mL) 保留时间 RSD(%) 峰面积 RSD) (%) 基质加标样品 10 0.11 9.05 50 0.13 3.82 500 0.06 1.46 2.5平行样考察 空白样品中添加不同浓度的△9-四氢大麻酸后进行前处理，各平行制备两份，上机测定。 参照标准规定，以保留时间(与标曲样品保留时间平均值相对偏差不高于2.5%)和离子对相对丰度比(范围由标曲样品离子丰度比平均值确定，本文中离子丰度比为20~50%，要求最大允许相对偏差范围为25%)为定性依据，定性结果如表3所示。保留时间以及离子丰度比相对偏差均未超出规定范围，符合要求。 表3 定性结果 No. 样品 保留时间 保留时间相对 离子丰度比 离子丰度比相对 (min) 偏差(%) 偏差(%) 1 标曲样品 2.143 一 27.00 一 2 SA1-平行1 2.144 0.05 26.73 1.00 3 SA1-平行2 2.140 0.14 25.77 4.56 4 SA2-平行1 2.146 0.14 27.08 0.30 5 SA2-平行2 2.145 0.09 26.50 1.85 参照标准规定，各待测样品均记录2份平行处理样品中目标物的含量，按公式RD=(C1-C2/C平均)*100%计算相对相差，结果应不超过20%，结果如表4所示，实际样品的双平行处理样相对相差均不高于20%，符合要求。 表4 定量结果及相对相差 N0. 样品 含量 (ng/mL) 双样相对 平行1 平行2 平均值 相差(%) SA1 14.62 13.77 14.19 3.03 SA2 128.73 143.16 135.95 5.30 结论 本文参考《GB/T 37272-2018尿液中A9-四氢大麻酸的测定液相色谱-串联质谱法》，使用岛津LCMS-8045三重四极杆液质联用仪，建立了尿液中△9-四氢大麻酸的分析方法。尿液中添加内标后，在碱性条件下水解，然后在酸性条件下用有机溶剂萃取，离心取上清液，吹干后定容待测。以保留时间和离子对相对丰度比为定性依据；空白样品加入内标和系列浓度标准样品，处理后，制作校准曲线，内标法定量检测△9-四氢大麻酸含量。结果表明：A9-四氢大麻酸在样品中的定量限低于 10 ng/mL， 满足标准要求；空白样品添加9-四氢大麻酸和内标后处理，在10-1000 ng/mL 的线性范围内，各标点浓度准确度分别在85.8-107.9%之间，R为0.9991；残留考察结果表明 ULOQ 加标样品进样后无明显系统残留；空白样品添加不同浓度△9-四氢大麻酸后进行处理，检测结果满足标准关于定性和定量结果的要求。该方法灵敏度和准确度高，适合尿液中的^9-四氢大麻酸检测。 岛津应用云 尿液中添加内标后，在碱性条件下水解，然后在酸性条件下用有机溶剂萃取，离心取上清液，吹干后定容待测。以保留时间和离子对相对丰度比为定性依据；空白样品加入内标和系列浓度标准样品，处理后，制作校准曲线，内标法定量检测Δ9-四氢大麻酸含量。结果表明：Δ9-四氢大麻酸在样品中的定量限低于10   ng/mL，满足标准要求；空白样品添加Δ9-四氢大麻酸和内标后处理，在10-1000   ng/mL的线性范围内，各标点浓度准确度分别在85.8-107.9%之间，R为0.9991；残留考察结果表明ULOQ加标样品进样后无明显系统残留；空白样品添加不同浓度Δ9-四氢大麻酸后进行处理，检测结果满足标准关于定性和定量结果的要求。该方法灵敏度和准确度高，适合尿液中的Δ9-四氢大麻酸检测。