大蒜油食品中有害物质-苯并（a）芘检测方案(液相色谱仪)

浙江福立分析仪器股份有限公司应用中心 组分[苯并芘]：曲线方程： Wi =1.9546E-013*Ai 食品中苯并(a)芘的测定 一、检测方法： 依据国家标准： GB 5009.27-2016食品安全国家标准食品中苯并(a)芘的测定。 二、方法原理 试样经过有机溶剂提取，分子印迹小柱净化，浓缩至干，乙腈溶解，反相液相色谱分离，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。 三、试剂和材料 3.1试剂 3.1.1乙腈：色谱纯 3.1.2正己烷：色谱纯 3.1.3二氯甲烷：色谱纯 3.1.4苯并(a)： 100 ug/ mL 有证标准物质 3.2材料与仪器 3.2.1高效液相色谱仪：福立 LC5090 高效液相色谱仪，配备 LC5090 在线脱气机、LC5090 二元高压输液泵、LC5090 自动进样器、LC5090 柱温箱、RF-20A荧光检测器。 3.2.2色谱柱： Sunniest C18柱， 4.60 mm*250 mm， 粒径为5.0 u.m。 3.2.3分析天平：感量为 0.1mg. 3.2.44苯并(a)芘分子印迹柱：500mg，6mL 3.2.5 MultiVap-10定量平行浓缩仪。 3.2.6固相萃取装置。 3.2.77涡旋振荡器。 四、标准品制备 4.1苯并(a)芘标准储备溶液(100ug/mL)：购买有证标准物质，浓度为100ug/mL. 4.2苯并(a)芘标准使用溶液(1ug/mL)：吸取100 uL 苯并(a)芘标准储备液(100 ug/mL)，用乙腈定容至10mL。避光保存在0℃-5℃的冰箱中，保存期1个月。 4.3标准曲线绘制：吸取苯并(a)芘标准使用溶液(1 ug/mL)以乙腈稀释， 配成浓度为0.5，，1.0，5.0，10.0， 20.0 ng/ mL 的苯并(a)芘标准系列溶液。 五、样品制备 5.1样品的提取 称取 0.8g(精确到0.001g)试样，加入10mL正己烷，涡旋混合 0.5min，待净化。 5.2样品的净化 采用苯并(a)芘分子印迹柱，依次用5mL二氯甲烷及 5mL 正己烷活化柱子，将待净化液转移至柱子，待液面降至柱床时，用6mL 正己烷淋洗柱子，弃去流出液。用6mL二氯甲烷洗脱并收集净化液，将净化液在40℃下氮吹干，准确吸取 0.8mL乙腈复溶，过滤0.45微米滤膜后供液相色谱测定。 六、分析结果 6.1 5.0ng/ mL 苯并(a)芘标准溶液典型谱图及结果 6.2 5.0ng/mL 苯并(a)芘标准溶液六针重复性谱图及结果 峰序 组分名 保留时间 保留时间 面积 面积 峰高 峰高 平均值 RSD 平均值 RSD 平均值 RSD [min] [%] uAU*s [%] [uAUJ [%] 苯并芘 14.708 0.043 515864 0.455 29659 1.114 6.3 标准曲线的绘制 分别进样浓度为0.5，1.0，5.0，10.0，20.0 ng/ mL 的苯并(a)标标准溶液各20 uL， 进行 HPLC分析。然后以峰面积为纵坐标，以含量为横坐标，绘制标准曲线。 6.3.1苯并(a)芘标准曲线方程及相关系数 校正因子： f0=0， fl=1.9546E-013相关系数： r~2=0.99998 6.4 最低检出限： 0.5ng/mL 苯并(a)芘标准溶液七针重复性谱图 6.5 样品谱图及结果 6.5.1大蒜油中苯并(a)芘的典型谱图及结果 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 1 Iminl uAUl luAU*s [ug/kg] 苯并芘 14.712 2236 34495 0.3371 2236 34495 0.3371 分析结果表 峰序 组分名 保留时间 峰高 峰面积 含量 lmin| luAUl uAU*s [ug/kg] 1 苯并芘 14.718 2210 34098 0.3332 注：(1)大蒜油样品中苯并(a)芘的平均含量为 0.34pg/kg. (2)在重复性条件下获得两次独立测试结果的绝对差值为0.01，为算术平均值的2.9%，符合小于算术平均值20%的要求。 6.5.2大蒜油加标典型谱图及回收率结果 注：大蒜油样品中加标苯并(a)芘 10pg/kg 七、实验结果 方法验证结论：：苯并(a)芘的检出限、精密度、准确度结果汇总： 方法验证汇总表 化合物 检出限/ug/kg 保留时间 RSD (%) 峰面积 RSD(%) 标准曲线线 性相关系数 样品中含量/ug/kg 加标回收率/% 苯并(a)芘 0.03 0.043 0.455 0.99998 0.34 90.3~92.6 由以上实验结果可知，本方法完全可以达到国标方法要求。 1.试剂与材料1.1试剂：1.1.1乙腈：色谱纯1.1.2 正己烷：色谱纯1.1.3二氯甲烷：色谱纯1.1.4 苯并（a）芘：100μg/ mL有证标准物质1.2材料：1.2.1高效液相色谱仪：福立LC5090高效液相色谱仪，配备LC5090在线脱气机、LC5090二元高压输液泵、LC5090自动进样器、LC5090柱温箱、RF-20A荧光检测器。1.2.2 色谱柱：Sunniest C18柱，4.60 mm * 250 mm，粒径为5.0 µm。1.2.3 分析天平：感量为 0.1mg。1.2.4 苯并（a）芘分子印迹柱：500mg，6mL1.2.5 MultiVap-10定量平行浓缩仪。1.2.6 固相萃取装置。1.2.7 涡旋振荡器。5.0ng/ mL苯并（a）芘标准溶液典型谱图 5.0ng/ mL苯并（a）芘标准溶液六针重复性谱图及结果大蒜油样品中苯并（a）芘