蔬菜中甲醛检测方案(液相色谱仪)

文件号： FLYQ-AD-FA-01浙江福立分析仪器股份有限公司应用中心 蔬菜中甲醛含量的测定高效液相色谱法 一、检测方法： 依据国家标准：蔬菜中甲醛含量的测定高效液相色谱法 (NY/T 3292-2018)3)。 二、方法提要 试料中的甲醛经水提取，在酸性条件下与衍生剂2，4-二硝基苯苯反应生成2，4-二硝基苯腙，用二氯甲烷萃取、浓缩后，注入高效液相色谱仪，355nm 波长处测定，外标法定量。 三、试剂和材料 3.1 乙青 (CH3CN)：液相色谱纯。 3.2二氯甲烷 (CH2CI2)：液相色谱纯。 3.3邻苯二甲酸氢钾溶液(0.01mol/L)：称取2.04g邻苯二甲酸氢钾，用水溶解并定容至1000mL。3.4 2，4-二硝基苯肼 (DNPH)：纯度≥99.0%。 3.5 2，4-二硝基苯肼溶液 (0.4g/L)：称取(3.4)2，4-二硝基苯肼0.040g，加入乙腈溶解，并定容至100mL。 3.6甲醛标准溶液(100ug/mL)：冷藏避光条件下保存。 3.7水：纯净水。 四、仪器和装置 4.1高效液相色谱仪：福立 LC5090 高效液相色谱仪，配配备 LC5090 在线脱气机、LC5090二元高压输液泵、LC5090自动进样器、LC5090 柱温箱、LC5090 双波长-紫外检测器。 4.2色谱柱： Sunniest C18 色谱柱，4.60 mm*250 mm， 粒径为5.0 um. 4.3一次性注射器。 4.4针头过滤器：0.45 um 有机滤膜。 4.5微孔滤膜 0.45 um. 4.6超声清洗仪。 4.7水浴锅。 4.8分液漏斗：250mL。 4.9浓缩装置：莱伯泰科平行浓缩仪 MultiVap-10。 4.10一般实验室常用仪器。 五、实验 5.1样品制备 5.1.1试样处理：白萝卜样品取可食部分，将其切碎，粉碎机粉碎成匀浆，过玻璃纤维滤膜。 5.1.2提取：称取约1g试样，精确至0.01g， 置于10mL容量瓶中，加入8mL水，超声提取30min 后取出，冷却，加水至刻度，摇匀，用滤纸过滤，弃去初滤液，取续滤液备用。 5.1.3衍生：移取5mL 滤液(5.1.2) ，依次加入10 mL 邻苯二甲酸氢钾溶液(3.3)和5mLDNPH 衍生液(3.5)，振荡摇匀，50℃±5℃水浴锅反应60 min， 取出冷却至室温。 5.1.4萃取净化：将衍生反应液(5.1.3)转移至250mL分液漏斗中，加入20mL二氯甲烷，振荡萃取，静置分层后收集下层有机相，再加入15mL二氯甲烷，1重复提取2次，合并3次有机相，40℃平行浓缩仪蒸发至约1mL， 转移至5mL容量瓶中，用少量乙腈洗涤，合并到5mL容量瓶中并定容，混匀后过微孔滤膜((4.5)，待测。 5.2标准曲线的制备 分别移取5uL、10uL、25uL、50uL、100 uL甲醛标准储备液：(3.6) (相当于0.5 ug、1.0 ug、2.5 ug、5.0 ug、10.0 ug) 各加入5mL水，其他步骤同5.1.3~5.1.4，得到甲醛的浓度分别为0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L系列标准溶液。 5.3分析结果 5.3.11甲醛标准溶液典型谱图及结果(0.5mg/L) 5.3.2甲醛标准溶液六针重复性谱图及结果(0.5mg/L) 120 号 [min] 组分名 平均时间[min] 时间 RSD% 平均面积mAU*s1 面积RSD% 平均峰高[mAU1 峰高 RSD% 甲醛-DNPH 10.005 0.013 181861.1 0.284 16257.0 0.205 5.3.3标准曲线 标准曲线的绘制：分别进样浓度为 0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.0mg/L、2.0 mg/L 的标准系列各10 uL， 进行 HPLC 分析。然后以峰面积为纵坐标，以目标物的浓度为横坐标，绘制标准曲线。 5.3.4检出限 [min] 5.3.5样品典型谱图及结果 [min] 组分名 保留时间[min] 扣除空白峰面积「uAU*s1 扣除空白含量[mg/kg] 扣除空白含量平均值[mg/kg] 甲醛-DNPH 10.011 11484.8 0.08665 0.09721 10.010 12622.2 0.10777 平行测定两次，扣除空白含量测得甲醛测DNPH含量平均值为 0.0972mg/kg 5.3.6空白谱图 HdNG- 组分名 保留时间[min] 峰面积[uAU*s] 峰高[uAU1 甲醛-DNPH 9.982 20008.5 1781.3 5.3.7样品加标典型谱图及回收率 六、实验结果 方法验证结论：甲醛的精密度、线性相关系数、检出限及回收率汇总如下： 方法评价 组分名 保留时间/min 检出限mg/kg 定量限 mg/kg 峰面积RSD% 线性相关系数 加标回收率% 扣除空白含量 平均值[mg/kg] 甲醛-DNPH 10.004 0.035 0.14 0.28 0.999 83.81~106.77 0.0972 由以上实验结果可知，采用福立 LC5090 测定蔬菜中甲醛的含量，方法稳定可靠，目标物线性范围良好，灵敏度较高，有很好的重现性，能够对样品进行准确定性定量。 本方案运用高效液相仪准确测定蔬菜中甲醛含量，试料中的甲醛经水提取，在酸性条件下与衍生剂2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，用二氯甲烷萃取、浓缩后，注入高效液相色谱仪，355nm波长处测定，外标法定量。本方案中样品扣除空白后平均两次甲醛－DNPH为0.0972mg/kg,方法检出限为0.035mg/kg。方案部分谱图：图1.甲醛标准衍生溶液典型谱图（0.5 mg/L）图2.甲醛标准衍生溶液重复性谱图（0.5 mg/L）图3.白萝卜样品测定谱图