核酸类药物中分子量和定量性能检测方案(液质联用仪)

Application No.C215NewsLCMS、UFgrating、iRefTOF、Nexera、Shim-pack Scepter、及 LabSolutions Insight Explore 是岛津制作所株式会社在日本和其他国家的商标。岛津SHIMADZUhttp：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439400-650-0439 ApplicationNews LC-MS 使用四杆飞行时间质谱仪 LCMSTM-9030确认核酸类药物的分子量和定量性能 |概述 寡核酸疗法是指合成的寡核苷酸通过与引起各种疾病的靶基因或靶蛋白结合而发挥其药效。截至现在，共有8种核酸医药品获得批准，其中大部分链长为20个左右碱基。本文中为您介绍使用 Q-TOF 型质谱仪 LCMS-9030 进行分析的事例。核酸类药物使用了20个碱基的2'-MOE修饰寡核苷酸。通过精密质谱分析，分子量确认误差仅为3mDa (0.05 ppm)。在使用LCMS-9030 的 MRM 模式绘制标准曲线时，证实在1~1000ng/mL范围内具有线性。 N.Kato |核酸类药物的分析方法 一直以来，核酸类药物的结构是通过质谱分析、NMR、UV光谱进行确认的，但在近年来，串级质谱具有出色的特异性和通用性，并且可以对原型药物和代谢产物进行同时测定受到了广泛关注。 在20个碱基下，核酸类药物的分子量达到6000以上，因此，一般使用四极杆飞行时间(Q-TOF)型质谱仪等的高精度质谱仪。另一方面，定量分析一般使用动态范围较大的三重四极型质谱仪(TQ-MS)。 Q-TOF型质谱仪 LCMSTM-9030 LC-QTOF-MS LC-QTOF-MS是高效液相色谱和四极杆质谱仪串联飞行时间质谱仪 (TOF)联用的高效液相色谱质谱仪。 本公司首款四极杆飞行时间质谱仪LCMS-9030继承了LCMS-8000 系列 TQ 型LC-MS 性高速性能和高离子聚焦能力，融合了新开发的TOF 技术。该产品搭载了本公司独自研发的高强度细栅电极 UFgratingTM， 理想的反射型 iRefTOFTM 和高精度温度控制系统，可始终保持稳定的质谱精度，获取兼顾灵敏度和分辨率的数据。 样品 序列：5'-mG-mC*-mC*-mU*-mC*-dA-dG-dT-dC*-dT-dG-dC*- dT-dT-dC*-mG-mC*-mA-mC*-mC*-3' (m) 2'-0-(2-甲氧基乙基)核苷(2-MOE) (*)C和U的5位甲基体 (d)2'-脱氧核苷 Monoisotopic mass： 6431.7239 1分析条件 HPLC 和 MS的分析条件如表1所示。寡核苷酸的反相分离一般使用离子对试剂，胺类试剂主要使用 TEA*等。本文中使用了可进行高灵敏度检测的 HFIP*和 DIPEA*流动相。 表1分析条件 [HPLC的条件] (NexeraTM) 色谱柱 ：Shim-pack ScepterTM C18 (2.0×75，1.9 um) 流动相 ： A) 50 mmol/L HFIP 与 10 mmol/L DIPEA B)乙腈 梯度程序 ：B5%(0-0.5 min) -15%(0.5-6 min) 流速 ：0.2mL/min 柱温 ：50℃ 进样量 ：5 pL [MS 的条件](LCMS-9030) 离子源 ：6负模式 接口电压 ： -3kV 采集模式 ：全扫描(m/z 500-3000) MRM (803.4626 > 94.9358) 雾化气流量 ：3.0L/min 干燥气流量 ： 10.0L/min 加热气流量 10.0L/min DL温度 250°C 加热模块温度 ：400℃ 接口温度 ：350℃ *1三乙胺 *2 1，1，1，3，3，3-六氟-2-丙醇 *3N，N-二异丙基乙胺 使用多电荷分析软件进行解卷积 图1所示为根据 scan 模式的数据提取的质谱。在质谱中检测到了 m/z1071.6、918.4、803.5等的多电荷离子。针对上述多电荷离子，使用 LabSolutions Insight ExploreM软件的选项“ReSpect”算法进行了解卷积。 n/z 图1核酸类药物的质谱 图2所示为分子量计算结果。如解卷积谱所示，证实单同位素质量为6431.72。其质谱误差为 3 mDa (0.05 ppm)。 图2解卷积谱 和三重四极杆质谱仪一样， LCMS-9030 也可以使用 MRM模式进行高灵敏度定量。前体离子使用8电荷离子m/z803.4626、产物离子使用 m/z 94.9358(PSO，)作为监控离子。图3所示为MRM模式下具有代表性的色谱图。 图3核酸类药物的MRM色谱图 标准曲线 图4所示为标准曲线。在1~1000 ng/mL的范围内绘制了标准曲线。相关系数(R)为 0.996。 面积 图4标准曲线 总结 使用Q-TOF 型质谱仪LCMS-9030 进行精密质谱分析时，分子量误差仅为0.05 ppm。另外，可以得到在线性范围在1~1000ng/mL标准曲线。 岛津应用云 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； ( *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ) ( 如有变动，恕不另行通知。 ) ( 第一版发行日：2020年6月 ) 寡核酸疗法是指合成的寡核苷酸通过与引起各种疾病的靶基因或靶蛋白结合而发挥其药效。截至现在，共有8种核酸医药品获得批准，其中大部分链长为20个左右碱基。本文中为您介绍使用Q-TOF型质谱仪LCMS-9030进行分析的事例。核酸类药物使用了20个碱基的2'-MOE修饰寡核苷酸。通过精密质谱分析，分子量确认误差仅为3 mDa（0.05 ppm）。在使用LCMS-9030的MRM模式绘制标准曲线时，证实在1~1000 ng/mL范围内具有线性。