参考农业部1025号公告-18-2008 动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法,本方法适用于猪肉、猪肝、牛肉等动物源性食品中沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗、氯丙那林等β-受体激动剂的检测。
动物源性食品中β-受体激动剂的提取与检测 背景 自2011年3月15日“瘦肉精”事件曝光后,政府加紧对瘦肉精这种非法添加物的管控。瘦肉精是一类药物的统称,因其食用后可导致急性中毒、代谢紊乱等症状,中国农业部已禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用。但是,一些不法商家链而走险,违法添加瘦肉精,使得消费者深受其害,寻找一种快速高效检测瘦肉精的方法成为目前亟待解决的问题。 适用范围 参考农业部1025号公告-18-2008动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法,本方法适用于猪肉、猪肝、牛肉等动物源性食品中沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗、氯丙那林等β-受体激动剂的检测。 实验步骤 1、样品酶解和提取: 2g样品加入8mL 乙酸铵缓冲液,充分混匀后加入 50 pL β-盐酸葡萄糖醛苷酸酶-芳基硫酸酯酶,超声15 min, 37℃酶解16h, 酶解后放置至室温,涡旋混匀,10000 rpm 离心10 min, 转移上清液于另一50 mL离心管内,加入 0.1 mol/L 高氯酸溶液 5 mL,涡旋混匀,用高氯酸调节pH至1.0±0.2,10000 rpm 离心 10 min,将上清液转移于另一 50 mL离心管内,用10 mol/L NaOH 溶液调节 pH至9.5±0.2,加入乙酸乙酯15 mL,涡旋混匀,并振荡10 min, 5000 rpm 离心5 min, 取出上层有机相至另一 50 mL离心管内,,下层水相中再加入10mL叔丁基甲醚,涡旋混匀,并振荡10 min, 5000 rpm 离心5 min, 合并有机相,50℃氮气吹干,用2%甲酸水溶液5mL 溶解,备用。 2、净化处理: SPE 柱活化: SelectCore MCX 60mg/3mL小柱依次用甲醇、水、2%甲酸水溶液各3 mL 进行活化; 上样:取全部备用液过柱子; 淋洗:依次用2%甲酸水溶液、甲醇各3 mL 进行淋洗,再减压抽干; 洗脱:使用2.5 mL 3%氨水甲醇溶液洗脱,洗脱液在50℃下用氮气吹干,甲醇-0.1%甲酸水溶液复溶后离心取上清液上机。 3、液相色谱条件 色谱柱: ChromCore TM C18 3 um, 2.1×100mm 流动相:A:0.1%甲酸水;流动相B:乙腈,梯度洗脱步骤如下表所示: 时间 (min) A% B% 流速(mL/min) 0.00 90 10 0.400 1.00 80 20 0.400 4.00 75 25 0.400 5.00 5 95 0.400 7.00 5 95 0.400 7.10 90 10 0.400 10.00 90 10 0.400 柱温::30°C 进样量:2uL 4、质谱条件 离子源:电喷雾离子源(Electrospray ionization, ESI) 正离子扫描监测方式:多反应监测 (Multiple Reaction Monitoring, MRM) 电喷雾电压:4000V 干燥气: N22((11L/min, 300℃) 雾化气压力:45 psi 实验谱图及加标回收率结果 图1:10ng/mL4种β-受体激动剂标准溶液的多重反应监测(MRM)色谱图 图2:空白样品里的4种β-受体激动剂的多重反应监测(MRM)色谱图 图3:添加量为1.0 ug/kg 的4种β-受体激动剂的多重反应监测(MRM)色谱图 样品加标回收率实验结果(添加水平为 1.0 pg/kg) 峰序号 保留时间(min) 化合物 (中文) 化合物(英文) 加标量ug/kg) 平均回收率% 1 1.130 沙丁胺醇 Salbutamol 1.0 96.5% 2 3.646 氯丙那林 Clorprenaline 1.0 98.4% 3 3.850 莱克多巴胺 Ractompamine 1.0 101.2% 4 4.497 克伦特罗 Clebuterol 1.0 97.3% 纳谱分析NanoChrom纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone: E-mail: customerservice@nanochrom.com Web: www.nanochrom.com 峰序号保留时间(min)化合物(中文)化合物(英文)加标量(μg/kg)平均回收率%11.130沙丁胺醇Salbutamol1.096.5%23.646氯丙那林Clorprenaline1.098.4%33.850莱克多巴胺Ractompamine1.0101.2%44.497克伦特罗Clebuterol1.097.3%
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