猪肉、猪肝、牛肉中沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗、氯丙那林等β-受体激动剂检测方案

动物源性食品中β-受体激动剂的提取与检测 背景 自2011年3月15日“瘦肉精”事件曝光后，政府加紧对瘦肉精这种非法添加物的管控。瘦肉精是一类药物的统称，因其食用后可导致急性中毒、代谢紊乱等症状，中国农业部已禁止瘦肉精在饲料和畜牧生产中使用。但是，一些不法商家链而走险，违法添加瘦肉精，使得消费者深受其害，寻找一种快速高效检测瘦肉精的方法成为目前亟待解决的问题。 适用范围 参考农业部1025号公告-18-2008动物源性食品中β-受体激动剂残留检测液相色谱-串联质谱法，本方法适用于猪肉、猪肝、牛肉等动物源性食品中沙丁胺醇、莱克多巴胺、克伦特罗、氯丙那林等β-受体激动剂的检测。 实验步骤 1、样品酶解和提取： 2g样品加入8mL 乙酸铵缓冲液，充分混匀后加入 50 pL β-盐酸葡萄糖醛苷酸酶-芳基硫酸酯酶，超声15 min， 37℃酶解16h， 酶解后放置至室温，涡旋混匀，10000 rpm 离心10 min， 转移上清液于另一50 mL离心管内，加入 0.1 mol/L 高氯酸溶液 5 mL，涡旋混匀，用高氯酸调节pH至1.0±0.2，10000 rpm 离心 10 min，将上清液转移于另一 50 mL离心管内，用10 mol/L NaOH 溶液调节 pH至9.5±0.2，加入乙酸乙酯15 mL，涡旋混匀，并振荡10 min， 5000 rpm 离心5 min， 取出上层有机相至另一 50 mL离心管内，，下层水相中再加入10mL叔丁基甲醚，涡旋混匀，并振荡10 min， 5000 rpm 离心5 min， 合并有机相，50℃氮气吹干，用2%甲酸水溶液5mL 溶解，备用。 2、净化处理： SPE 柱活化： SelectCore MCX 60mg/3mL小柱依次用甲醇、水、2%甲酸水溶液各3 mL 进行活化； 上样：取全部备用液过柱子； 淋洗：依次用2%甲酸水溶液、甲醇各3 mL 进行淋洗，再减压抽干； 洗脱：使用2.5 mL 3%氨水甲醇溶液洗脱，洗脱液在50℃下用氮气吹干，甲醇-0.1%甲酸水溶液复溶后离心取上清液上机。 3、液相色谱条件 色谱柱： ChromCore TM C18 3 um， 2.1×100mm 流动相：A：0.1%甲酸水；流动相B：乙腈，梯度洗脱步骤如下表所示： 时间 (min) A% B% 流速(mL/min) 0.00 90 10 0.400 1.00 80 20 0.400 4.00 75 25 0.400 5.00 5 95 0.400 7.00 5 95 0.400 7.10 90 10 0.400 10.00 90 10 0.400 柱温：：30°C 进样量：2uL 4、质谱条件 离子源：电喷雾离子源(Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描监测方式：多反应监测 (Multiple Reaction Monitoring， MRM) 电喷雾电压：4000V 干燥气： N22((11L/min， 300℃) 雾化气压力：45 psi 实验谱图及加标回收率结果 图1：10ng/mL4种β-受体激动剂标准溶液的多重反应监测(MRM)色谱图 图2：空白样品里的4种β-受体激动剂的多重反应监测(MRM)色谱图 图3：添加量为1.0 ug/kg 的4种β-受体激动剂的多重反应监测(MRM)色谱图 样品加标回收率实验结果(添加水平为 1.0 pg/kg) 峰序号 保留时间(min) 化合物 (中文) 化合物(英文) 加标量ug/kg) 平均回收率% 1 1.130 沙丁胺醇 Salbutamol 1.0 96.5% 2 3.646 氯丙那林 Clorprenaline 1.0 98.4% 3 3.850 莱克多巴胺 Ractompamine 1.0 101.2% 4 4.497 克伦特罗 Clebuterol 1.0 97.3% 纳谱分析NanoChrom纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com 峰序号保留时间（min）化合物（中文）化合物（英文）加标量（μg/kg）平均回收率%11.130沙丁胺醇Salbutamol1.096.5%23.646氯丙那林Clorprenaline1.098.4%33.850莱克多巴胺Ractompamine1.0101.2%44.497克伦特罗Clebuterol1.097.3%