果汁和酸奶中纽甜检测方案

果汁和酸奶中纽甜的检测 背景 纽甜是一种新型功能性甜味剂，系阿斯巴甜的衍生物，甜度约为蔗糖的8000倍~13000倍，蔗糖的40倍以上，是一种强力甜味剂，甜味纯正，甜味协和，稳定性好，价格低廉，纽甜作为甜味调节剂广泛应用于乳饮料、糕点、调味品等各类食品中。研究表明，过量食用甜味剂会对人体健康造成危害，因此国家食品添加剂使用标准也对其作出了严格规定。而由于绝大多数食品基质复杂，， 前处理过程去除不充分，不但会影响色谱分离度，而且极易堵塞色谱柱，缩短色谱柱的寿命。因此国标方法 GB 5009.247-2016食品中纽甜的测定规定了固相萃取-高效液相色谱法测定食品中的纽甜含量。 纽甜结构式 适用范围 本方法(参考GB 5009.247-2016)，适用于食品中纽甜含量的测定。 实验步骤 试剂准备 混合提取液：分别吸取 0.8mL 的甲酸和2.5 mL的三乙胺，加水定容至1000mL 的容量瓶中， pH约4.5； 0.1%磷酸水溶液：吸取1mL的磷酸，加水定容到1000mL 的容量瓶中。 液相色谱仪器条件 Column：ChromCore C18， 5 umDimension：4.6×250 mm Mobile Phase： A)ACN B)H2O：H3PO4=999：1(v/v) Gradient： t(min) A B 0 32 68 13 32 68 14 90 10 17 90 10 17.5 32 68 21 32 68 Flow Rate： 1.0 mL/min Temperature： 30°C Injection： 20 uL Detection： UV218 nm 果汁样品处理 果汁提取 称取10 mL试样于50 mL 容量瓶中，加入30 mL混合提取液，超声15 min 后再用混合提取液定容至刻度线，若溶液浑浊，以不低于4000 r/min 离心10 min 后，过滤后待净化。 果汁净化 SPE 柱： SelectCore C18固相萃取柱(500 mg/6mL) 活化：依次用5mL的甲醇和水活化； 上样：加入10mL上清液； 淋洗：用5mL的混合提取溶液进行淋洗； 洗脱：用5mL甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，在40℃下用氮气吹干，用2mL 混合提取溶液复溶后，上机检测。 图1：5 ug/mL 纽甜对照品溶液色谱图 10.00 11.25 12.50图2：果汁空白基质色谱图 图3：添加水平1mg/kg 的果汁基质色谱图 酸奶样品处理酸奶提取 称取 10 g 试样于 50 mL容量瓶中，加入30 mL混合提取液，涡旋震荡 10 min，超声30 min 后再用混合提取液定容至刻度线，若溶液浑浊，，以不低于4000 r/min 离心10 min后，过滤后待净化。 酸奶净化 SPE柱： SelectCore HLB 固相萃取柱(150 mg/6mL) 活化：依次用5mL的甲醇和水活化； 上样：加入10 mL 上清液； 淋洗：用5mL的混合提取溶液进行淋洗； 洗脱：用5mL甲醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，在40℃下用氮气吹干，用2mL 混合提取溶液复溶后，上机检测。 10 -10- 0.02 1.25 2.50 3.75 5.00 6.25 7.50 8.75 10.00 11.25 12.50 13.75 15.00 16.25 17.50 18.75 20.00 21.02 图5：添加水平1 mg/kg 的酸奶基质色谱图 样品加标回收率实验结果 样品名称 化合物(中文) 加标量(mg/kg) 平均回收率% 果汁 纽甜 1 90.79% 酸奶 纽甜 1 92.64% 实验讨论 a. 我们在做酸奶基质样品的时候，发现过 C18小柱特别慢，考虑到都是疏水反相保留模式，因此我们改用HLB小柱，不仅回收率良好，而且且速要比 C18小柱快3~5倍(见视频)，因此，推荐复杂基质样品纽甜测定的时候，选择我们公司单分散 HLB 固相萃取柱。 b. 国标规定液相色谱的流动相应选择辛烷磺酸钠的离子对试剂，我们在实际示析过程中发现离子对试剂的确增加了纽甜的保留，但是时间久了柱压容易升高，而且每天配制辛烷磺酸钠的浓度微小差异导致保留时间有差异，因此我们降低了有机相比例，并且改成0.1%磷酸水溶液，纽甜的保留时间也和之前用离子对试剂的保留时间一样，峰型良好，分离度符合要求，日内和日间的保留时间和峰面积的精密度和重复性RSD 也在1%以内，特别是柱压较平稳，没有明显升高。因此我们将流动相的水相改成0.1%磷酸水溶液。 实验结论 由实验数据可得，果汁样品的前处理可以选择纳谱分析的 SelectCore C18 500mg/6mL固相萃取柱，酸奶样品的前处理可以选择纳谱分析的 SelectCore HLB 150mg/6mL 固相萃取柱。分析柱选择纳谱分析的ChromCore C18 5um， 4.6×250 mm， 峰型良好，分离度符合要求，符合检测标准。 纳谱分析NanoChrom纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com 样品名称化合物（中文）加标量（mg/kg）平均回收率%果汁纽甜190.79%酸奶纽甜192.64%