动物组织中盐酸克伦特罗的测定检测方案(其它色谱仪及分离设备)

动物组织中盐酸克伦特罗的测定 适用范围 本标准规定了测定动物组织中盐酸克伦特罗的气相色谱-质谱法（GC-MS）（本实验样品为鸡肝）。 参考标准《NY/T 468-2006 动物组织中盐酸克伦特罗的测定 气相色谱-质谱法》 溶液的配置 30mmol/L盐酸：用蒸馏水稀释3mL 1mol/L盐酸溶液至100mL即成。 0.1mol/L盐酸：用蒸馏水稀释10mL 1mol/L盐酸溶液至100mL即成。 4%氨水甲醇：用甲醇稀释4mL氨水至100mL。 2.5mol/L氢氧化钠：准确称取5g氢氧化钠，用水溶解并定容至50mL。 10%碳酸钠溶液：称取10g无水碳酸钠，溶解于90mL蒸馏水中。 标准储备溶液：准确称取1.0mg盐酸克伦特罗标准品，用甲醇溶解并定容至10mL，配制成100μg/mL标准储备溶液，标准储备溶液避光于0~4ºC保存。 标准工作溶液：准确移取标准储备液25μL用甲醇定容至10mL，得到0.25μg/mL混合标准工作溶液，标准工作溶液避光于0~4ºC保存。 提取步骤 准确称取5g试样（精确至0.01g）于50 mL离心管中，加入15mL乙酸乙酯，再加入3mL 10%碳酸钠溶液，加入匀质子涡旋混匀2min，以5000r/min离心3min，吸取上层有机溶剂于50 mL离心管中，在残渣中再次加入10mL乙酸乙酯涡旋混匀1min，以5000r/min离心3min，吸取有机溶剂合并提取液。在提取液中加入5mL 0.1mol/L的盐酸溶液，涡旋混匀30s, 以5000r/min离心3min，吸取下层萃取液，重复同样步骤萃取一次，合并两次萃取液，用2.5mol/L氢氧化钠调节pH至5.2（±0.2）。 净化步骤 SPE柱：月旭Welchrom® P-SCX小柱，规格：500mg/6mL。 活化：5mL甲醇，5mL水，5mL 30mmol/L盐酸； 上样：将萃取液全部上样，弃去； 淋洗：5mL水，5mL甲醇，弃去并压干； 洗脱：5mL 4%氨水甲醇，收集并压干。 衍生 将洗脱液于50℃下氮吹至干，在衍生瓶中加入甲苯100μL，双三甲基硅烷三氟乙酸胺（BSTFA）100μL，充分涡旋混匀后，置80℃烘箱中，反应1h。冷却至室温后加入300μL甲苯，混匀，转入进样小瓶，上机测定。 注意事项 加标水平：5g样品中加入100μL标准工作液，因此加标水平为0.005mg/kg，最终机度数为 0.05μg/mL。 色谱条件 7.1气相色谱条件 色谱柱 WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm 进样口温度 220℃ 升温程序 70℃，保持0.6min，以25℃/min升温至200℃，保持6min，以25℃/min升温至280℃，保持5min。 载气 高纯氦气（纯度>99.999%） 进样方式 不分流进样 恒流模式 0.9mL/min 进样量 1μL 7.2质谱条件 电离方式 电子轰击电离源（EI） 电离能量 70eV 传输线温度 280℃ 离子源温度 230℃ 四极杆温度 150℃ 监测方式 克伦特罗：86/212/262/277 溶剂延迟 8min 色谱图或者加标回收率结果 图1. 盐酸克伦特罗0.05μg/mL图谱 表1、出峰情况 物质 保留时间 类型 峰宽 面积 开始时间 结束时间 克伦特罗 12.673 M 0.043 18922 12.62 12.772 图2. 鸡肝样品图谱 图3. 鸡肝样品加标0.005mg/kg图谱 表2、加标回收率表 物质 加标水平 平均回收率 RSD值（n=2） 克伦特罗 0.005mg/kg 95.57% 2.74% 8、相关产品信息 货号 名称 规格 00523-20006 SPE小柱 Welchrom® P-SCX,500mg/6mL,30pk 00824-31001 固相萃取装置 Welch 固相萃取装置，12位方缸 00821-32291 盖子+垫片 Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 03904-22001 气相色谱柱 WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm 00837-05006 50mL螺口尖底离心管 Welchrom® 离心管 一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包 00826-C337P025 盐酸克伦特罗标准品 A2S, CAS No.:21898-19-1,25mg 一、适用范围本标准规定了测定动物组织中yan酸克伦特罗的气相色谱-质谱法（GC-MS）（本实验样品为鸡肝）。参考标准《NY/T 468-2006 动物组织中yan酸克伦特罗的测定 气相色谱-质谱法》 二、提取步骤准确称取5g试样（j确至0.01g）于50 mL离心管中，加入15mL乙酸乙酯，再加入3mL 10%碳酸钠溶液，加入匀质子涡旋混匀2min，以5000r/min离心3min，吸取上层有机溶剂于50 mL离心管中，在残渣中再次加入10mL乙酸乙酯涡旋混匀1min，以5000r/min离心3min，吸取有机溶剂合并提取液。在提取液中加入5mL 0.1mol/L的盐酸溶液，涡旋混匀30s, 以5000r/min离心3min，吸取下层萃取液，重复同样步骤萃取一次，合并两次萃取液，用2.5mol/L氢氧化钠调节pH至5.2（±0.2）。 三、净化步骤SPE柱：月旭Welchrom® P-SCX小柱，规格：500mg/6mL;活化：5mL甲醇，5mL水，5mL 30mmol/L盐酸；上样：将萃取液全部上样，弃去；淋洗：5mL水，5mL甲醇，弃去并压干；洗脱：5mL 4%氨水甲醇，收集并压干。 四、衍生将洗脱液于50℃下氮吹至干，在衍生瓶中加入甲苯100μL，双三甲基硅烷三fu乙酸胺（BSTFA）100μL，充分涡旋混匀后，置80℃烘箱中，反应1h。冷却至室温后加入300μL甲苯，混匀，转入进样小瓶，上机测定。 五、色谱条件- 气相色谱条件色谱柱：WM-5MS, 30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：220℃；升温程序：70℃，保持0.6min，以25℃/min升温至200℃，保持6min，以25℃/min升温至280℃，保持5min；载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；进样方式：不分流进样；恒流模式：0.9mL/min；进样量：1μL。 - 质谱条件电离方式：电子轰击电离源（EI）；电离能量：70eV；传输线温度：280℃；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；监测方式：克伦特罗：86/212/262/277；溶剂延迟：8min；六、色谱图或者加标回收率结果