肉制品中瘦肉精检测方案

welch welch 肉及肉制品中瘦肉精的测定 1、适用范围 适用于肉及肉制品中瘦肉精的检测。 2、提取步骤 称取2g已捣碎的样品于50ml离心管中，加入8ml乙酸钠缓冲液，充分混匀，再加50mLβ-葡萄糖醛甙酶/ 芳基硫酸酯酶，混匀后，37度环境下酶解12h。添加100匹L的10ng/mL内标工作液于待测样品中，加盖置于水平振荡器上振荡15min， 离心10min(5000r/min )， 取4mL上清液加高氯酸调节pH值到1土0.3。5000r/min离心10min后，将全部上清夜转移到50ml的离心管中，用10mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值到11。加入10mL饱和氯化钠溶液和10ml异丙醇-乙酸乙酯(6/4)混合溶液，充分提取，在5000r/min下离心10min。转移全部有机相，在40℃水浴下用氮气将其吹干。加入5mL乙酸钠缓冲液，超声混匀，使残渣充分溶解后备用。将阳离子交换固相萃取小柱连接到真空过柱装置，然后将上述残渣溶液上柱，依次用5mL水、5mL的2%甲酸水溶液和5mL甲醇洗涤柱子并彻底抽干，最后用5mL的5%氨水甲醇溶液洗脱柱子上的待测成分。洗脱液在40℃水浴下氮气吹干。准确加入1ml的0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95/5)，超声混匀。用0.22微孔滤膜过滤，上LC-MS/MS进行分析。 3、SPE净化步骤净化 SPE柱： Welchrom P-SCX， 60mg/3mL a活化：依次加入5mL 甲醇和5mL水，流出液弃去； b上样：将提取液加入 Welchrom P-SCX柱中，流出液弃去； c淋洗：依依用5mL水，5mL 2%甲酸水溶液和5mL甲醇淋洗，淋洗液弃去； d洗脱：6mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液； e 重新溶解：50°C下氮气吹干洗脱液，准确定容至 1mL后用 LC-MS/MS 进行分析。 4、a色谱条件 色谱柱：UltimateXB-C18，1.8Hm，100mm×2.1mm 流动相：0.1%甲酸水溶液+0.1%甲酸乙腈溶液，梯度洗脱 流速： 0.25ml/min 进样量：5以L 柱主温：30C b质谱条件 离子源： ESI+ 离子喷雾电压：3.0kV 脱溶剂气：氮气，流速500L/h温度400℃ 碰撞气： Ar 0.27ml/min 分辨率：Q1(单位)Q3(单位) 扫描模式： MRM定性离子对277.3>203.1；277.3>259.3 定量离子对(m/z)277.3>203.1 5.谱图或者加标回收率结果 图1：盐酸克伦特罗 LC-MS/MS 谱图 表1：：加标回收率测定结果 样品名称 原始含量(ng/g) 加标含量(ng/g) 检测量(ng/g) 回收率(%) 猪肉1 —— 8 7.2 90.0 猪肉2 一 8 7.4 92.5 猪肉3 8 6.9 86.3 Fax：86-21-50276769 Web： www.welchmat.com. 月旭色谱柱·：——超“月”极限“旭”写辉煌Add： Edison Road， Building A，Zhangjiang Hi-Tech Park， Pudong Shanghai China