甘草中形态汞检测方案(等离子体质谱)

SSL-CA14-637Excellence in Science Excellence in ScienceICPMS-048 上海市徐汇区宜州路180号华鑫天地二期C801栋 咨询电话：021-34193996http：//www.shimadzu.com.cn HPLC-ICP-MS 测定中药材甘草中的形态汞 ICPMS-048 摘要：参考《2015版中国药典》中《2322汞和砷元素形态及其价态测定法》，建立了一种测定中药材甘草中形态汞的高效液相色谱电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)。样品经过处理后，采用高效液相色谱 LC-20Ai对不同形态汞进行分离，电感耦合等离子体质谱 ICPMS-2030检测进行定量分析。线性范围在 1~20 ng/mL 范围内回归系数大于0.9998，方法定量26~37 ug/kg， 适用于中药材中形态汞的分析。 关键词：中国药典形态汞中药甘草 HPLC-ICP-MS 汞是自然界中常见的有毒致癌性元素之一，汞的生物毒性不仅与其含量有关，更大程度上还与其存在形态有关。不同形态的汞化合物性质往往不同，毒性差异很大。 常见的汞化合物有：无机汞(Hg?*)、甲基汞(MeHg)、乙基汞(EtHg)等。其中，有机汞的毒性大于无机汞，尤其是有机汞中的甲基汞毒性最大，同时甲基汞和乙基汞均是脂溶性的，容易被生物体所吸收，所造成的生物体危害尤为突出。 由于汞的毒性、致癌性、迁移性质和生物效应均取决于它的化学形态，并且各汞形态随着所处环境的不同处于动态互变之中，所以测定总汞含量无法准确表示出汞的暴露水平。因此，对汞的各种存在形态分别进行分析测定十分必要。 本文参考2015版中国药典《2322 汞和砷元素形态及其价态测定法》，采用岛津高效液相色谱 LC-20Ai 与电感耦合等离子体质谱仪 ICPMS-2030 联用对中药甘草进行汞形态分析。 实验部分 1.1对照品 无机汞采用常规元素标液，甲基汞和乙基汞购于国家标准物质中心。 1.2实验检材 市售中药甘草 1.3仪器 本实验使用岛津高效液相色谱仪 LC-20Ai 与电感耦合等离子体质谱仪 ICPMS-2030 联用系统。具体配置为LC-20Ai 输液泵， DGU-20A，在线脱气机， SIL-20AC 自动进样器， CTO-20AC柱温箱， CBM-20A系统控制器，ICPMS-2030 电感耦合等离子体质谱仪， LabSolutions ICPMS Version 1.02 工作站； AY-120电子天平(日本岛津公司)。 1.4试剂 胰蛋白酶购于 Sigma-Aldrich。EDTA、乙酸铵及L-半胱氨酸购于国药集团。 结果与讨论 2.1对照品溶液配制 精密吸取对照品储备溶液适量，加8%甲醇制成每1mL含各0.5 ng、1 ng、5 ng、10 ng、20 ng(均以汞计)系列浓度的溶液，摇匀，即得。 2.2样品的处理方法 精确称取粉碎后的甘草样品1g，加入人工肠液10mL，置37℃水浴中超声处理适当时间，摇匀，取适量，静置约24小时，吸取1mL中层溶液，用微孔滤膜(10 um)滤过，精密量取续滤液1mL， 用0.125 mol/L 盐酸溶液稀释至10mL，摇匀，即得。同法制备加标溶液及空白溶液。 2.3色谱条件 色谱柱： GL Sciences Intertsil ODS-3 5 um， 柱温：30℃ 洗脱程序：等度洗脱 流速：0.8mL/min 2.4质谱条件 等离子体参数： 高频功率：1.20kW 雾化室温度：0℃ 辅助助流速：1.10L/min 高频频率：27.12MHz 矩管类型： Mini 碰撞池参数： 雾化室：旋流 碰撞气种类：He 采样深度：5.0mm 碰撞气流速：6.0mL/min 等离子体气流速：8.0L/min 池电压：-21V 载气流速：0.70L/min 能量过滤器电压：7.0V 雾化器类型：同轴 2.5方法学考察 2.5.1专属性考察 对空白进行考察，排除系统干扰，并且考察汞混合标液中三种形态汞的分离度，以确保实际样品分析过程中造成假阳性检出。内即可完成样品的测定。 图11三种形态汞色谱图 2.5.2线性关系考察 按“2.1对照品溶液的配置”项下规定进行标准曲线系列浓度的配制，记录各成分的峰面，以浓度(浓度均以Hg计)与峰面积比值做线性回归绘制标准曲线，结果如下所示。 图2年甲基汞校准曲线 r=0.99980 图33乙基汞校准曲线r=0.99981 2.5.3样品测试结果及回收率考察 对某市售中药甘草破壁粉碎取样，按“2.2样品的处理方法”进行处理后进 HPLC-ICP-MS分析，对处理后样品进行一定浓度加标后进 HPLC-ICP-MS分析，考察回收率。结果如下： 表1甘草测试结果及回收率(%) 名称 测定结果 加标浓度 测定浓度 回收率(%) (ug/L) (pg/L) (ug/L) 无机汞 ND 1.00 0.949 94.9 甲基汞 ND 1.00 0.969 96.9 乙基汞 ND 1.00 0.975 97.5 ND：未检出 2.5.4检出限考察 对浓度为 1 ng/mL 样品溶液考察3种形态汞的信噪比，折算信噪比 S/N=3 时检出限以及 S/N=10定量限，根据样品处理过程分别计算方法检出限和方法定量限。结果如下： Time (s) 图6基线考察 表2灵敏度考察结果 名称 仪器检出限 方法检出限 仪器定量限 方法定量限 (ng/mL) (ug/g) (ng/mL) (ug/kg) 无机汞 0.08 8.40 0.28 28 甲基汞 0.08 7.80 0.26 26 乙基汞 0.11 11.1 0.37 37 结论 参考《2015版中国药典》中《2322汞和砷元素形态及其价态测定法》，建立一种中草药甘草中形态汞的高效效相色谱电感耦合等离子体质谱联用法。该方法灵敏度高，方法定量限26~37 ug/kg， 适用于中药材中形态汞的分析。 ( 岛津全球应用技术开发支持中心 ) 建立了一种测定中药材甘草中形态汞的高效液相色谱电感耦合等离子体质谱法（HPLC-ICP-MS）。样品经过处理后，采用高效液相色谱LC-20Ai对不同形态汞进行分离，电感耦合等离子体质谱ICPMS-2030检测进行定量分析。线性范围在1~20 ng/mL范围内回归系数大于0.9998，方法定量26~37 μg/kg，适用于中药材中形态汞的分析。