五味子中五味子甲素检测方案(毛细管电泳仪)

PTCA(PARTB：CHEM. ANAL.)理化检验-化学分册2007年第43急 理化检验-化学分册刘海兴等：毛细管电泳法测定五味子中五味子甲素 毛细管电泳法测定五味子中五味子甲素 刘海兴，刘凤芹?，韩立坤，李丽敏，万丽梅，陈云法 (1.潍坊学院化学系，潍坊261061； 2.石家庄经济学院实验中心，石家庄050031) 要：采用毛细管电泳法，以15 mmol·L-1磷酸氢二钠、15mmol·L-服砂和20%乙醇的缓冲溶液作为运行电解质溶液，获得了五味子甲素与五味子中其余成分的有效分离，且峰形较好。测得五味子甲素线性回归方程为y=-0.72+24.9r、相关系数为0.998；线性范围为0.03~0.37 g·L-1。测得的五味子中五味子甲素质量分数为1.18%，相对标准偏差为 2.63%(n=6)；平均回收率为99.6%。 关键词：毛细管电泳；五味子甲素；五味子 中图分类号：C657.37 文献标识码：A 文章编号：1001-4020(2007)09-0749-02 Determination of Deoxyschizandrin A in Schisandra Chinensis byCapillary Electrophoresis LIU Hai-xing'， LIU Feng-qin?， HAN Li-kun'， LI Li-min， WAN Li-mei， Chen Yun-fal (1. Dept. of Chemistry， Wei fang College， Weifang 261061， China；2. Shijiazhuang University of Economics， Experiment Center， Shijiazhuang 050031， China) Abstract： Deoxyschizandrin A and other components in schisandra chinensis were effectively separated bycapillary electrophoresis using a buffer solution， composed of 15 mmol·L-Naz HPO， 15 mmol· L- Na B. Oand ethanol in one-fifth of the total volume， as moving electrolyte solution. Clear and finely shaped peaks wereobtained as shown in the electrophoregram. Linear regression equation for the determination of deoxyschizandrin Awas obtained as follows： y=-0. 72+24. 9 x (x is the concentration of Deoxyschizandrin A in g·L-1)corresponding to linearity range of determination from 0.03 to 0.37 g.L. Correlation coefficient of the regressionequation was 0.998. A sample of schisandra chinensis was analyzed by the proposed method for its content ofdeoxyschizandrin A with 6 determinations. The result obtained was 1. 18% with RSD of 2.63%. Test for recoverywas performed and average recovery of 99. 6% was obtained. Keywords： Capillary electrophoresis； Deoxyschizandrin A； Schisandra chinensis 五味子有敛肺、滋肾、生津、涩精等功能，是常用中药之一；其乙醇提取物可用于治肺虚、喘咳、梦遗、滑精、久泻久痢等，并且适量五味子对中枢神经和呼吸系统有兴奋作用。 五味子中五味子甲素的测定方法有薄层色谱法(TLC)i2，高效液相色谱法(HPLC)3]。于于毛细管电泳法(CE)具有高效、快速、微量的特点，在药物分析中得到了广泛应用4-6]。有机溶剂经常添加于 ( 收稿日期：2006-03-17 ) ( 作者简介：刘海兴(1963一)，男，河北抚宁人，副教授，博士，研究方向为生物及药物分析。 ) 缓冲溶液中，用于改善分离选择性7-10]。本文建立了毛细管区带电泳快速、准角地测定五味子中五味子甲素含量的方法。 1试验部分 1.1 仪器与试剂 CL1030高效毛细管电泳仪；毛细管(75 um内径，60 cm 总长，51 cm 有效长度)； pHS-3D型精密pH计。 试剂均为分析纯，水为双蒸馏水。 1.2 试验方法 试验前，毛细管依次用0.1mol·L-铬酸、重 蒸馏水、0.1mol·L-氢氧化钾、重蒸馏水各冲洗5 min，然后再用缓冲溶液冲洗4 min。在每两次运行之间，毛细管仅用缓冲溶液冲洗4 min。三次运行之后，毛细管需用上面的方法清洗一回。 运行电压为16 kV，紫外检测波长为 214 nm，试验温度为26℃，重力进样时间为 5 s。 1.3 样品制备 首先将五味子研碎，称取五味子粉末1.22 g.放入索氏提取器中，加入50%(体积分数)乙醇80 mL，索氏提取1.5 h。趁热过滤，然后用50%(体积分数)乙醇定容至50 mL得样品溶液。 2 结果与讨论 2.1 磷酸盐和硼砂体系对五味子甲素保留时间的影响 直接选择磷酸氢二钠和硼砂体系作为电解质溶液，在总浓度为30 mmol·L'的情况下，改变两者的相对含量，试验结果表明：五味子甲素的保留时间变化不大，这是由于缓冲溶液浓度和pH值变化微小所致。同时发现磷酸氢二钠和硼砂浓度分别为15 mmol·L-时五味子甲素峰形相对较好。 2.2 有机溶剂对五味子甲素保留时间的影响 在15 mmol·L-磷酸氢二钠和15 mmol·L-硼砂的溶液中，选择乙醇作为有机改性剂，考查其对五味子甲素保留时间的影响。试验结果表明：随着乙醇浓度的增加，五味子甲素的保留时间逐渐增大。当乙醇为20%(体积分数)时，五味子甲素的谱峰较锐且重现性较好，五味子甲素和五味子中其它组分能够较好地分离。乙醇的加入对改善本试验样品的分离起着较大作用。选择乙醇为20%(体积分数)的缓冲溶液用于样品测定。 2.3 标准曲线绘制 称取五味子甲素3.70 mg 溶于 95%乙醇10 mL得五味子甲素标准溶液。分别移取标准溶液0.2mL于小烧杯中，分别加加95%乙醇0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.4mL，混合均匀，立即放人待测小管中。在15mmol·L-磷酸氢二钠、15 mmol·L-硼砂和20%(体积分数)乙醇的缓冲溶液条件下运行。每种溶液分别运行3次，取平均值。以峰面积校正值为纵坐标(mV·s-)，质量浓度为横坐标(g·L-)绘制标准曲线。五味子甲素的线性回归方程为 y=-0.72+24.9x，相关系数为0.998，线性范围为0.03~0.37g·L. 2.4 样品分析 按试验方法，测定五味子中五味子甲素的含量。将测得的峰面积校正值代入回归方程中，计算出样品溶液中五味子甲素浓度，五味子中五味子甲素的质量分数为1.18%，相对标准偏差为2.63%(n=6)。 2.5 回收率 取标准溶液0.4 mL，加五五味子样品溶液(稀释五倍后溶液)0.4mL，混合均匀后测定6次，测得平均回收率为99.6%。 ( 参考文献： ) ( [1 ] 江苏新医学院编.中药大词典(上册)[M].上海：上海 科学技术出版社，1977：386-389. ) ( 2 王珂，童玉懿，宋万志.北五味子有效成分的薄层光密 度法测定[J].药学学报，1990，25(1)：49-53. ) ( [3] 刘燕，王宝琴.更年安及五味子中五味子甲素、乙素的 HPLC 测定[].中草药，199 2 ，14(9)：12-13. ) ( [4] Liu Haixing， Shi Yuhua， Wang Dexian， e t al. MECC determination of o leanolic acid and ursolic acid isomers in ligustrum lucidum ait [J] . J of Pharmaceutical and Biochemistry Analysis， 2003，32：479-485. ) ( [5] LIU Haixing， YANG Gengliang， WANG Dexian， etal. Determination of dissociation constants o f c o mpli-cated compounds by capillary zone electrophoresis [J].Chinese J of Chemistry， 2001，19(7)：675-680. ) ( [6] Z hao Jingxiang， Y a ng Gengliang， Li u Hai x ing， et al.Determination of andrographolide， d eoxyandrographol-ide and neoandrographolide in the Chinese h erb a n-drographis paniculata by MECC [J]. Phytochemical Analysis， 2002，13：222-227. ) ( [7] Wang Dexian， Yang Gengliang， H u Zh i de， et al. M i- cella electrophoresis capillary chromatography of psor-alen and isopsoralen [J] . Electrophoresis， 1999，20 (9)：1891-1899. ) ( [8] Sandra F urlanetto， Serena Orlandini， Gabriella Masso- lini， et al. O ptimisation and va l idation of cap i llary electrophoresis method for the simultaneous d etermi-nation of diazepam and otilonium bromide J]. The An- alyst，2001，126(10)：1700-1706. ) ( 97 Taibi G， Schiavo MR， Calanni Rindina P， et al. Mi- cellar electrokinetic chromatography of polyamines andmonoacetylpolyamines [J]. J of C hromatography A ， 2001，921(2)：323-329. ) ( [10] S huhui Liu， X uan T i an， X i ngguo Chen， et al. Se p a-ration and d etermination of p odophyllum li g nans by micellar electrokinetic chromatography[J]. J of Chro-matography A， 2001，928(1)：109-115. ) O China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net