中药枳壳中柚皮素检测方案(毛细管电泳仪)

PTCA(PARTB：CHEM.ANAL.)理化检验-化学分册2008年 第44卷4 毛细管电泳法测定中药枳壳中辛弗林和柚皮素 刘海兴. (1.潍坊学院化学化工系，潍坊261061； 2.青岛科技大学化学学院，青岛266071) 摘 要：采用毛细管电泳法测定了枳壳中辛弗林和柚皮素的含量。在30 mmol·L硼砂缓冲溶液(pH10.0)的条件下，实现了被测组分的有效分离。测得枳壳中辛弗林含量为0.7242mgg，相对标准偏差为5.9%(n=5)；柚皮素的含量为0.9047mg g，相对标准偏差为3.8%(n=5)。辛弗林和柚皮素的平均回收率分别为89.1%和99.6%。 关键词：毛细管电泳；枳壳；辛弗林；柚皮素 中图分类号：0657.1 文献标识码：A 文章编号：1001-4020(2008)04-0332-02 Capillary Electrophoretic Determination of Synephrine andNaringenin in Trifoliate Orange LIU Haixing (1. Dept. of Chem.and Chem. Engineering， Weifang College， Weifang 261061， China； 2. College of Chemistry， Qingdao University of Science and Technology， Qingdao 266071， China) Abstract ： Capillary electrophoresis was applied to the determination of synephrine and naringenin in trifoliateorange. Effective separation of synephrine and naringenin was achieved in 30 mmol ·Lsodium tetraborate solutionof p H 10.0. Contents of synephrine and naringenin found in a typical sample of trifoliate orange were 0.724 2 mg·gwith RSD's (n=5) 5.9% and 0.904 7 mg gwith RSD's (n=5) 3.8 % respectively. Average values ofrecovery found by this method were 89.1 % for synephrine and 99.6% for naringenin. Key words ： Capillary electrophoresis； Trifoliate orange； Synephrine； Naringenin 枳壳为芸香科植物酸橙未成熟的果实，具有理气宽中、行滞消胀的功效，主治肠肋气滞、胀满疼痛和胃下垂等症状。辛弗林具有升高血压、抗休克、提高新陈代谢等作用，临床上用于治疗支气管哮喘及手术和麻醉时低血压、虚脱及休克等。柚皮素具有抗菌、抗炎、抗癌、解痉和利胆作用。枳壳中辛弗林含量的测定方法有薄层扫描法、高效液相色谱法2，而柚皮素的测定方法未见报道。毛细管电泳是近年发展起来的分离分析技术，以其快速、高效、微量、灵敏度高等特点，在化学、生命科学和药学等领域均有广泛的应用，尤其适合于药物化学成分的分析3-6]。本试验用毛细管电泳法测定中药积壳中辛弗林和柚皮素含量。 ( 收稿日期：2006-12-15 ) ( 作者简介：刘海兴(1963-)，男，河北抚宁人，副教授，博士，主 要研究方向为生物及药物分析。 ) 试验部分 1.1 仪器与试剂 CL1030 高效毛细管电泳仪；毛细管(75um，60 cm X51 cm) ；pHS-3C酸度计。 辛弗林、柚皮素(纯度99%)，试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。 1.2 试验条件 紫外检测波长为254nm，运行电压为20kV，试验温度为18 ℃，重力进样时间为8s(7.5 cm 高度差) 1.3 试验方法 试验前，毛细管依次用0.5mol·L盐酸、水、0.5 mol·L氢氧化钠、水各冲洗8 min，然后再用30mmol·L硼砂缓冲溶液冲洗 8 min 。在两次运行之间，毛细管仅用30mmol·L-硼砂缓冲溶液冲 洗 4 min。3次运行之后，重复清洗。 1.4 样品制备 将枳壳样品研成粉末，称取枳壳粉末0.0978g，加入95%乙醇5mL，冷浸时间24h，过滤并洗涤得5.4mL枳壳样品溶液。 2 结果与讨论 2.1 缓冲溶液的浓度对辛弗林和柚皮素迁移行为的影响 按试验条件考察硼砂浓度对辛弗林和柚皮素迁移行为的影响。试验结果表明：随着硼砂浓度的增加，辛弗林迁移时间基本保持不变，而柚皮素的迁移时间略有增加，同时辛弗林与电渗流峰出现时间(5 min)完全相同。试验选择硼砂溶液的浓度为30 mmo1·L 2.2 缓冲溶液的pH值对辛弗林和柚皮素迁移行为的影响 试验结果表明：随着缓冲溶液pH值的增大，辛弗林与电渗峰逐渐拉开，表明辛弗林开始解离(图1)。在pH10.0时已非常明显，并且辛弗林和柚皮素的峰形也较好，出峰时间不长，与样品中其它成分得到了有效地分离。试验选择30 mmol·L-硼砂缓冲溶液的pH为10.0。 图1 缓冲溶液的pH值对辛弗林和柚皮素迁移时间的影响 Fig. l Effect of pH values of buffer sol hon the migration timeof synephrine and naringenin 2.3 标准曲线 按试验方法对辛弗林和柚皮素标准系列溶液进行测定，各个标准溶液分别运行3次。以峰面积y为纵坐标，浓度x为横坐标，绘制标准曲线，测得辛弗林和柚皮素的线性范围分别为1~0.0625gL，1.75~0.0273g·L；线性回归方程分别为v=18.74+476746.71 x，y=-18 260.98 +1377750x，相关系数分别为0.998，0.999 。 2.4 样品分析结果 按试验方法用pH10.0的30mmol ·L硼砂 缓冲溶液运行枳壳样品溶液，枳壳样品溶液电泳谱图见图2. 图2 枳壳样品溶液电泳谱图 Fig.2Electrophorogram of sample solution of trifoliate orange 将试验测得的峰面积代入线性回归方程中，算出辛弗林、柚皮素对应的浓度，再换算成样品中辛弗林和柚皮素的质量浓度。枳壳中辛弗林、柚皮素的质量浓度分别为0.724 2，0.9047 mgg相对标准偏差(n=5)分别为5.9%，3.8%。 同时在枳壳样品溶液中加入0.6 mg辛弗林和0.3mg柚皮素标准按试验方法运行3次，测得辛弗林和柚皮素的平均回收率分别为89.1%和99.6%。 ( 参考文献： ) ( [1] 王国荣，张育中，胡世林.薄层扫描法测定酸橙积实(积 壳)中辛弗林和N-甲基胳胺的含量[J].药物分析杂 志，1 9 94，14(4)：48-50. ) ( 21 曾仪，陈小红，肖鸣，等. HPLC法测定枳壳、枳实中 辛弗林和N-甲基胳胺的含量[J].中国中药杂志， 1997 ，22(6) ： 362-363. ) ( [3] Wang Dexian， Yang Gengliang， E nglhardt H，e t al.Separation by c a pillary z o ne electrophoresis of th e ac- tive anthraquinone components of the Chinese herb po-lygonum m ultiflorum t hunb [J ]. Chromatographia，2001 ， 53(3/4)：185-189. ) ( [4] Liu Haixing， Sh i Yuhua， Wang Dexian， et a l.MECC determination of oleanolic acid and ursolic acid i s omers in ligustrum l ucidum ait [J ]. J of Pharmaceutical andBiochemistry Analysis， 2003 ，32：479-485. ) ( [5] LIU H aixing， YANG Gengliang， WANGDexian， et al. Determination o f dissociation constants ofcompli- cated compounds by capillary zone electrophoresis[J].Chinese J of Chemistry，2001，19(7) ： 675-680. ) ( [6] Zhao Jingxiang， Y a ng Ge n gliang， Liu Hai x ing， et al.Determination of a ndrographolide， deoxyandrograp hol- ide and n eoandrographolide i n t h e Chinese herb an - drographis paniculata by MECC[J]. Ph y tochemical a- nalysis ， 2002 ，13：222-227. ) ··OChina Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net