红细胞中Ca的形态分析检测方案(毛细管电泳仪)

第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集湖北·武汉2006年11月 CE-ICP-AES 联用技术用于红细胞中 Ca的形态分析 许秋梅'，：李险峰，康艳辉，，邓必阳*1.2 (1.广西师范大学化学化工学院，桂林541004；2.桂林工学院材料与化学工程系，桂林 541004) 摘 要：本文介绍了毛细管电泳-电感耦合等离子体原子发射光谱联用技术应用于大白鼠红细胞中钙元素的形态分析，并对游离态的钙进行了表征。其迁移时间的相对标准偏差小于8%。样品加标回收率为93%~108%、 关键词：毛细管电泳；电感耦合等离子体原子发射光谱法；红细胞；；钙；形态分析 1前言 钙是人体所必需的元素，它在维持人体健康及正常生理功能方面起着重要作用"。钙元素是血液和各种体液的必需组分，是生理活性元素。每一元素呈现不同的生物效应，而效应的强弱依赖于特定器官或体液中该元素的浓度及其存在形态。因此研究生理活性元素的存在形态对阐明其生物功能和作用机理甚为重要，并引起国内外学者的高度重视。本文首次采用毛细管电泳-电感耦合等离子体原子发射光谱(capillary electrophoresis inductively coupled plasma atomicemission spectromeiry，简称 CE-ICP-AES)联用的方法对大白鼠红细胞中的钙元素进行了形态分析。 2实验部分 2.1仪器及工作条件 Optima 2000DV 全谱直读电感耦合等离子体原子发射光谱仪(美国 PerkinElmer 公司)；ACS2000 高压电源(北京彩陆科学仪器公司)； TGL-16G-A 台式高速冷冻离心机(上海仪器厂)。BC-3000全自动血液细胞分析仪(深圳迈端生物医疗电子股份有限公司)。自装毛细管电泳仪和毛细管电泳进样装置。工作条件(略) 2.2样品的处理 大白鼠体重150 g，年龄60天(桂林医学院提供)，断颈取血。血样流入内装抗凝剂肝素钠的离心管中(1mL血液采用20个单位的肝素钠即可抗凝)，混合均匀后，静置2h，除去上层的血浆及白细胞。收集于PBS中， 经3000 r/min轴速离心5 min后， 所得红细胞用PBS在相同离心条件下清洗3次。取此红细胞用SDS破溶，分成二份(红细胞浓度为2.24×10"个/L)其中一份为样品溶液，另一份加入适量CaClz溶液， 使Ca 浓度为5 pg/mL。 2.3样品的引入 以 0.04 Mpa 的力气压力将样品溶液引入 CE 毛细管中，注入样品的体积由注射时间、毛细管长度、样品溶液的性质决定，内径100 pm，长120 cm 的毛细管，进样10 s，注入体积大约0.9pL. ( 基金项目：国 家 自然科学基金资助(No.20565001)；广西科学基金资助 (No.0639029) ) ( *通讯联系人 ) 3结果与讨论 3.1红细胞中Ca的形态分析 在图1中，对样品1进行电泳，Ca 的分离条件为：以0.04mol/LTris-HCl为电泳缓冲液， pH7.40；电泳电压20KV(样品出口端为负极)，载气流速 0.8mol/L。从图1可以看出， Ca 在红细胞中主要以7种化学形态存在，分别用L1(迁移时间为178s)、L2(迁移时间为353s)、L3(迁移时间为407s)、L4(迁移时间为499s)、L5(迁移时间为518s)、L6(迁移时间为773s)、L7(迁移时间为969s)表示。 图1红细胞中钙的形态分析 3.2红细胞包Ca2+表征 在第二份样品中加入钙标准溶液后进行电泳，如图2所示，分离条件与第一份样品一样。在图2中，迁移时间为747s处峰高明显增强，此峰对应图1中L6， 说明在图1中L6为Ca *。 Speciation Analysis of Calcium in Red Blood Cellby Capillary Electrophoresis Inductively Coupled PlasmaAtomic Emission Spectrometry Xu Qiu-mei'， Li Xian-feng’， Kang Yan-hui， Deng Bi-yang (1.College of Chemistry and Chemical Engineering， Guangxi Normal University， Guilin 541004；2.Department of Material and chemical Engineering， Guilin University of Technology， Guilin 541004) China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net