积实和积壳中橙皮试和袖皮贰检测方案(毛细管电泳仪)

研究简报—生命科学仪器 2004第2卷/第5期 36万方数据 毛细管电泳法快速测定枳实和枳壳中的橙皮甙和柚皮甙 吕元琦1.2，王月伶2，袁倬斌*2 (1.德州学院化学系，德州253023；2.中国科学院研究生院应用化学研究所，北京100039) 枳实(Frucus Aurantii Immaturus )和枳壳(FrucusAurantii)为芸香科植物酸橙(Citrus aurantium L.) 及其栽培变种的干燥幼果与未成熟果实。枳实始载于《神农本草经》，枳壳始载于《开宝本草》，李时珍《本草纲目》将两者总称为枳，幼小的果实称为枳实，未成熟的果实称为枳壳。枳实有破气消积、化痰散痞之功效，是消化、化痰止咳处方中的常用药材。枳壳性微寒，味苦、辛、酸；入肺、脾、大肠经。具有理气宽中，行滞消胀之功效，主治肠肋气滞、胀满疼痛、痰饮内停及胃下垂、脱肛和子宫脱垂等症状，均为历版中国药典所收载。柚皮甙和橙皮甙是枳实和枳壳的主要活性成分，橙皮甙具有抗菌、抗病毒的作用，柚皮甙具有抗菌、消炎和抗病毒的作用，这两种物质含量的高低直接影响枳实和枳壳的药效。因此，测定枳实和枳壳中的橙皮甙和柚皮甙具有极为重要的意义。目前，测定枳实和枳壳及其药物制品中橙皮甙和柚 图1 分析物的结构图 Fig.1 Structures of analytes 皮甙的方法主要有高效液相色谱法11~3]和薄层色谱-分光光度法{4)。薄层色谱-分光光度法操作繁琐，不利于快速分析。高效液相色谱法虽然具有较好的选择性，可以同时测定多种有效成分，但分析时间长，有机溶剂消耗量大，操作费时、繁琐，色谱柱寿命短。由于样品成分复杂，有时要用到梯度洗脱，就更增加了操作的复杂性。和以上两种方法相比，毛细管电泳法具有快速、高效、分辨率高、样品和试剂消耗量少、毛细管柱清洗容易和柱寿命长等优点，近年来在中药成分分析中备受关注吗。本文通过研究缓冲溶液酸度和浓度、工作电压、有机溶剂、SDS浓度和B-CD浓度的影响，利用我们自行研制由北京彩陆科学仪器有限公司生产的ACS2000毛细管电泳仪建立了一种毛细管电泳法快速测定枳实和枳壳中橙皮甙和柚皮甙(结构见图1)的方法。在优化的条件下：缓冲溶液， pH9.0 的20mmol/L硼砂-磷酸二氢钠-10%(v/v) 乙醇；工作电压，16kV； 进样时间： 8s(10cm)。橙皮甙和柚皮甙2种物质在5min内实现了良好分离，橙皮甙和柚皮甙峰面积(pAU·sec)和浓度(pg/mL)分别在6~500 p g/mL和5~500 p g/mL范围内成良好线性，线性方程和线性相关系数分别为y(uAU ·sec)=161.07x(ug/mL)+139.93 (r=0.9996)和y(uAU ·sec)=202.84x(u g/mL)+198.93(r=0.9998)。通过连续5次注射含有橙皮甙和柚皮甙均为20 pg/mL的标准混合溶液计算了重现性。橙皮甙和柚皮甙两种物质迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.82%、1.16%和2.95%、3.08%。利用3倍噪音法得到2种物质的检出限分别为：橙皮甙，1.2p.g/mL；柚皮甙，1.5pg/mL。该方法被用于实际样品分析得到令人满意的结果，通过向样品提取液中加入一定量的橙皮甙和柚皮甙测定回收率考察了该方法的准确性。分别将 50pg/mL的橙皮甙和柚皮甙加入枳实和枳壳的提取液中，5次测定橙皮甙和柚皮甙在枳实和枳壳中的回收率分别 ( *联系人：袁倬斌，中国科学院研究生院应用化学研究所。地址：北京市玉泉路19号甲，邮编：100039 ) ( 本工作得到“十五”科技攻关重大项目(2001BA210A04-7)；国家自然科学基金(20175025)；国家自然科学基金分析化学重点 基金(20 235010) ；电分析学学国家重点实验室基金及“九五”科技攻关重点项目(96-A23-01-06)的资助，特此致谢。 ) 为 93.6%~103.1%、97.4%~103.8%和6%~101.9%、98.4%~103.6%。 95. ( 参考文献 ) ( [1] 李秀玲，李龙，肖红斌，等.反相高效液相色谱法去定定实、 枳壳中橙皮甙和柚皮甙的含量.色谱，2002，20(6)：585- 586. ) ( [2] 彭维.枳实和枳壳中保健有效成分的含量分析.广西轻工 ) ( 业，1996，(1)：29-35. ) ( [3] 吴万征.不同产地枳壳中柚皮苷与微量元素的含量测定.中 药材，2003，26(5)： 332-333. ) ( 4] 杨书斌，王琦，张典瑞，等.中国中药杂志，1994，19(6)： 359. ) ( 5] Wang C Y， Huang H Y， Kuo K L， et a l. Analysis of Puerariae radix and its medicinal preparations by capillary electrophoresis. J Chromatogr. A， 1998，802：225-231. ) Fast Determination of Hesperidin and Naringin in Fructus Aurantii1mmaturusand Fructus Aurantii by Capillary Electrophoresis Yuanqi Lul2， Yueling Wang’， Zhuobin Yuan?* (1.Department of Chemistry， Dezhou College， Dezhou， 253023； 2. Institute of Applied Chemistry， Graduate School of Chinese Academy of Sciences， Beijing 100039) Abstract：tAA method was developed to quickly determine hesperidin and naringin in Fructus Aurantii Immaturus and Fructus Aurantiiby capillary electrophoresis. Through the investigation of the effects of buffer pH and concentration， applied voltage， organic solvent， SDSconcentration and B-CD， the analytical conditions were optimized. Under the optimized conditions， the two analytes were well separatedin 5 min. A good linear relationship between the peak area and concentration was found in the 6-500 p g/mL and 5-500 p.g/mLconcentration range for hesperidin and naringin， respectively. The relative standard deviation based on migration time and peak area were0.82%、1.16% and 2.95%、3.08% for hesperidin and naringin， respectively. The detection limits based on three time noise were 1.2p. g/mL and 1.5 p g/mL for hesperidin and naringin， respectively. The method was verified by real sample analysis and runningstandard addition and recovery experiments with satisfactory results. Keywords Capillary Electrophoresis； Fructus Aurantii Immaturus； Fructus Aurantii； Hesperidin； Naringin