化学药中阿奇霉素片含量的检测方案

I系列分光光度法测定阿奇霉素片的含量 【摘要】  目的：建立I系列紫外可见分光光度法准确快速测定阿奇霉素片的含量。方法：参考 (​http:​/​​/​www.studa.net​/​​)阿奇霉素片溶出度的测定方法，以乙醇和0.1 mol/L盐酸为溶剂，75→100硫酸溶液为显色剂，在室温显色30 min，然后于482 nm波长处测定显色后溶液的吸收度，与显色后的标准品溶液相比较计算 (​http:​/​​/​www.studa.net​/​pc​/​​)阿奇霉素片的含量，并与微生物测定方法相比较。结果：阿奇霉素在7.5～52.5 μg/mL的浓度范围内吸收度A和浓度C之间成线性相关，回归方程A=0.0201C-0.1059，r=0.9999；回收率（99.7±0.31）%，RSD=0.3 %，样品测定结果与微生物方法相一致。结论：本方法简便、准确，适用于阿奇霉素片的含量控制。 【关键词】  阿奇霉素；分光光度法；含量；测定 阿奇霉素（Azithromycin）为15元环大环内酯类抗生素，抗菌谱与红霉素相类似，对化脓性链球菌、肺炎链球菌以及流感杆菌有杀菌作用，对部分葡萄球菌属具有抑菌作用，临床主要用于呼吸道、皮肤软组织感染和沙眼衣原体引起的尿道炎和宫颈炎等感染性疾病的治疗 (​http:​/​​/​www.studa.net​/​Medicine​/​​)［1］。片剂为阿奇霉素常见的剂型，笔者参考阿奇霉素片溶出度的测定方法，并参考同类药物罗红霉素胶囊的测定方法，建立了用分光光度法快速检测阿奇霉素片含量的方法，现将结果报道如下。 　　1  仪器与试药 　　1.1  仪器 I5紫外可见分光光度计（济南海能仪器股份有限公司）；分析天平 　1.2  试药     阿奇霉素原料（含量95.3%，批号：20060607）为山东齐鲁制药有限公司惠赠，阿奇霉素对照品（952 u/mg）购自中国药品生物制品检定所，阿奇霉素片（河南辅仁堂制药有限公司，批号：20060703、20060905、20061014）购自药店，其他试剂均为分析纯。 　　2  方法与结果 　　2.1  溶液的配制 　　2.1.1  对照品贮备液的配制  　　精密称取105 ℃干燥至恒重的阿奇霉素对照品75.0 mg，置于100 mL容量瓶中，加乙醇适量（每2 mg阿奇霉素加乙醇1 mL）溶解，并加0.1 mol/L盐酸定容，作为贮备液。 　　2.1.2  对照品溶液的配制  　　精密量取该贮备液16.7 mL置于25 mL容量瓶中，加0.1 mol/L盐酸适量摇匀并定容，作为对照品溶液。 　　2.1.3  供试品溶液的配制  　　取本品10片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于阿奇霉素25.0 mg）置于50 mL容量瓶中，加乙醇适量（每2 mg阿奇霉素加乙醇1 mL）溶解，然后再加0.1 mol/L盐酸摇匀并定容。过滤，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。 　　2.1.4  空白辅料溶液的配制  　　按照处方比例配制不含有主药的空白辅料，按照“2.1.3”供试品溶液的配制方法配制空白辅料溶液。 　　2.2  含量测定方法     精密量取对照品和供试品溶液各5 mL分别置于50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L盐酸摇匀并定容，制成每1 mL含阿奇霉素50 μg的溶液。再次精密量取该溶液各5 mL分别置于10 mL容量瓶中，加硫酸溶液（75→100）5 mL摇匀，于室温静置30 min。     取上述显色后的溶液，以0.1 mol/L盐酸为空白，照分光光度法(附录Ⅳ A)［4］，在482 nm的波长处测定吸收度，计算阿奇霉素的含量。 　　2.3  测定波长的选择     取“2.2”项下显色后的对照品溶液，以0.1 mol/L盐酸为空白，在400～550 nm的波长范围内扫描。阿奇霉素在482 nm的波长处有最大吸收。同时取“2.1.4”空白辅料溶液同法操作，药物特征波长处辅料无吸收，不影响阿奇霉素的测定。故根据其波长特征，选用482 nm作为测定波长，紫外扫描图谱见图1。 　　2.4  标准曲线的绘制     分别精密量取“2.1.1”对照品贮备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL置于50 mL容量瓶中，再加0.1 mol/L盐酸定容到刻度，制成每毫升含阿奇霉素分别为15.0、30.0、45.0、60.0、75.0、90.0、105.0 μg的溶液；再分别精密量取该溶液5 mL置于10 mL容量瓶中，加硫酸溶液（75→100）5 mL，摇匀，制成含阿奇霉素分别为7.5、15.0、22.5、30.0、37.5、45.0、52.5 μg的溶液，静置30 min。以0.1 mol/L盐酸为空白，在482 nm的波长处测定吸收度，并以吸收度A对相应的浓度C进行线性回归，得回归方程。阿奇霉素在7.5～52.5 μg/mL浓度范围内，回归方程为A=0.0201C－0.1059，r=0.9999，n＝7，线性关系良好。 　　2.5  溶液稳定性试验     取“2.4”项下系列浓度的阿奇霉素显色溶液，在37 ℃水浴中放置分别于15.0 min、30.0 min、1.0 h、1.5 h、2.0 h取样，在482 nm的波长处重复测定，结果在37 ℃水浴放置2.0 h，溶液吸收度变化小于1.0 %；在室温放置的样品于30.0 min、1.0 h、1.5 h、2.0 h、4.0 h取样测定吸收度，溶液吸收度变化小于1.0%。 　　2.6  回收率试验     精密称定阿奇霉素对照品适量，按阿奇霉素片的制备方法制成高、中、低三个浓度的阿奇霉素片的模拟片剂，然后按照“2.1”项下的方法配制溶液和“2.2”项下的方法进行含量测定，每个样品测定2次，取平均值，计算 (​http:​/​​/​www.studa.net​/​pc​/​​)回收率，结果见表1。 表1  阿奇霉素回收率试验测定结果（略） 　　2.7  精密度试验     取上述制备的片剂，按照“2.1”项下的方法配制溶液，每个浓度5份样品，然后按照“2.2”项下的方法测定含量。连续测定5 d，计算日内和日间精密度。结果日内的RSD＝0.7%，日间的RSD＝1.8%，表明测定结果之间变异较小，方法的精密度良好。 　　2.8  样品含量测定     取市售阿奇霉素片三批，按照“2.2”项下的含量测定方法和2010版《中国 (​http:​/​​/​www.studa.net​/​china​/​​)药典》的微生物效价方法分别测定，计算样品的标示量，比较两种测定方法结果的一致性。结果三批阿奇霉素样品的标示量均在98.0%～103.0%范围内，符合药典规定. 　　3  讨论     分光光度法测定阿奇霉素片中阿奇霉素的含量和用药典规定的微生物效价法测定的结果比较一致，但是分光光度法更加简便、快速、准确，更适用于生产部门的中间体控制和卫生监督部门的快速检验分析。     用硫酸显色时，硫酸的用量、浓度和温度等会影响反应的结果，本文参考 (​http:​/​​/​www.studa.net​/​​)阿奇霉素片溶出度的测定方法，选用75→100的硫酸溶液显色，并且使溶液的温度平衡到室温后测定，最大限度的减小了反应成品溶液之间的差异，有助于维持结果的一致性。     　　硫酸显色反应时，能够放出大量的热量，所以为了保持样品之间的一致性，需要注意硫酸的加入速度应比较缓慢，使热量能够均匀地逐渐散发出去，相互之间尽量保持一致。 　 PAGE - 1 -