多维片中维生素C含量检测方案(分子荧光光谱)

天津港东科技发展股份有限公司TIANJIN GANGDONG SCI.&TECH.DEVELOPMENT CO.，LTD FL-018 荧光分光光度法在多维片中维生素C含量测定上的应用 天津港东科技发展股份有限公司 应用分析部 摘要： 荧光分光光度法是对荧光物质进行定性和定量的有效方法。目前国家标准对于测定多维片中维生素C含量的方法以荧光分光光度法为主。 本文以多维片为例，依据国家标准GB5413.18-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》，应用港东F-380型荧光分光光度计对多维片中维生素C的含量进行测定。结果证明此方法操作简便，线性良好是测定多维片中维生素C含量的理想方法。 关键词：荧光分光光度法维生素C抗坏血酸多维片 一、原理： 维生素C(抗坏血酸)在活性炭存在下氧化成脱氢抗坏血酸，，它与邻苯二胺 (OPDA)反应生成荧光物质(喹唔啉)，用荧光分光光度计测定其荧光强度，其荧光强度与维生素C的浓度成正比。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物不与邻苯二胺(OPDA)反应，以此排除试样中荧光杂质产生的干扰。 二、实验条件： 1、仪器及附件： 天津港东 F-380 型荧光分光光度计 荧光石英比色皿 2、分析条件： 激发波长：350nm 发射波长：430nm 3、药品： 淀粉酶、偏磷酸、乙酸、活性炭、盐酸、亚铁氰化钾、结晶乙酸钠、硼酸、令邻苯二胺、维生素C标准品。 4、其它： ( 真：022-83711608 ) 邮传网 分析天平(0.0001g)、烤箱、水浴锅、80~200目筛子、研钵、抽滤装置、称量纸、药勺、量筒、容量瓶、具塞三角瓶、漏斗、滤纸、移液管、具塞比色管、烧杯、擦镜纸、玻璃棒、胶头滴管等。 三、样品及标准样品处理 1、样品前处理 样品前处理步骤如下图所示： 备注：样品称样量依据其本身维生素C含量(约2mg)而定。淀粉酶活力为 1.5U/mg，根据活力单位大小调节用量。 话：022-83711190 邮传网 2、样品待测液制备 样品经前处理后还需进行进一步的处理才可以上机进行检测。 > 样品待测液制备步骤如下图所示： 3、标准样品待测液制备 精密称取 0.050g维生素C标准品，用偏磷酸-乙酸溶液A溶解并定容至50mL，再准确吸取 10.0mL该溶液用偏磷酸-乙酸溶液A 稀释并定容至100mL， 配制成 100ug/mL 的标准溶液。 准确吸取经过处理的VC标准溶液(10ug/mL) 0.5mL、1.0mL、八 1.5mL、2.0mL分别置于10mL试管中，补水至2.0mL， 配制成 VC标准样品工作液。再分别加入5mL 邻苯二胺(OPDA)溶液，摇匀避光静置60min，即配制成VC标准样品待测液。 话：022-83711190 真：022-83711608 邮传网址：www.tjgd.com 标准样品待测液制备步骤如下图所示： 邮传网 四、测定结果 应用港东 F-380 型荧光分光光度计的“波长扫描”模块扫描不同浓度的标准维生素C待测液发射谱图并叠加，建立VC标准浓度和荧光强度的工作曲线。 以下为港东 F-380 型荧光分光光度计测定维生素C含量的发射谱图和计算样品中维生素C含量的计算公式。 >波长扫描测试谱图： nm >VC标准工作曲线 计算公式： 式中：X-―试样中维生素C的含量，单位为毫克每百克(mg/100g)； V—一—试样的定容体积，单位为毫升(mL)； 话：022-83711190 真：022-83711608 邮传网 c——由标准曲线查得的试样测定液中维生素C的质量浓度，单位为微克每毫升(ug/mL)； m——试样的质量，单位为克(g)； f——试样稀释倍数。 五、结论 采用荧光分光光度法测定多维片中维生素C含量，操作简单，方法准确，是一种理想的方法。 由于维生素C本身易光解而且在测定过程中需要对每-种样品进行样品的背景扣除，因此，此实验对仪器的功能要求更高。港东 F-380 型荧光分光光度计率先在硬件上采用了激发侧挡光快门的设置，从而避免了样品被强光的直接照射；软件上采用了独特的双背景扣除功能，，自动计算维生素C浓度，使整个实验操作简便，结果重现性良好。 邮传网 编：电 址：天津市华苑产业园区鑫茂科技技G座EF单元层话：子邮箱： info@tjgd.com址： www.tjgd.com        本方案给出了分子荧光光度法测定多维片中维生素C的原理和方法，以及应用荧光分光光度计进行定量分析的方法和基本操作。