生物药品药物研发检测

单克隆抗体 (mAb) 型药物代表了发展迅速的一类生物药物，对这类药物需要进行深入表征，以便获得临床试验和后续上市的批准。鉴于单克隆抗体具有分子量大及存在翻译后修饰（糖基化）的特征，精确质量数测定是单克隆抗体分析表征中最具挑战性的步骤。这些特性也使得修饰位置的测定更加复杂。 ?为了应对抗体质量数测定相关的挑战，人们使用了大量补充方法。可以用 PNGase F 处理抗体去除 N-糖链，后用 IdeS 等蛋白酶酶解获得抗体片段，也可还原单克隆抗体，以生成轻链和重链，随后进行质量数测定。这些技术可以各种组合加以应用。样品前处理可能费时费力，而且重现性不佳。本应用简报展示了如何使用 Agilent AssayMAP Bravo 的自动化功能简化这些方法，减少引入人为误差的可能性，提高重现性，并实现更长的无人值守时间。

反相色谱(RP) 肽图分析是生物治疗药物分析中最主要的技术，可为生物制药产品提供全面的表征。当与质谱仪(MS) 联用时，能实现对蛋白质及其变异体的鉴定，确定翻译后修饰(PTM) 及其位点，并确认蛋白质序列。然而，由于蛋白质裂解物固有的复杂性，使得利用色谱进行肽图分析非常具有挑战性。因此，许多组织都致力于开发稳定、可靠的肽图分析方法。通常而言，肽图分析受到灵敏度低、峰形差及需要较长分离时间来达到所需分离度的影响。 近年来，人们应用超高效液相色谱(UHPLC) 以克服这些挑战，与常规HPLC 相比，UHPLC 经证实具有超高分离度、更高的灵敏度，且可大大缩短分析时间。UHPLC 技术可更详尽地表征蛋白生物治疗药物，其通过加快流速、缩小粒径及缩短柱长，可在更短的分析时间内实现更高的分离性能。但是，这种类型的分离对压力要求越来越高，不能在常规的400 和600 bar 高效液相色谱仪上进行操作，严重地限制了其应用范围。 为了解除这种限制，安捷伦引入一种2.7 μm AdvanceBio 肽图分析色谱柱以弥补生物治疗药物表征中的关键缺陷，可在常规液相色谱系统压力下，实现快速而高效的肽图分析。采用表面多孔色谱填料，AdvanceBio 肽图分析色谱柱可在很短的分析时间和低系统压力下大大改善肽图分析，同时保持很高的峰性能和分析效率。本研究采用AdvanceBio 肽图分析色谱柱，在较短的分析时间内对一种单克隆抗体(mAb) 胰蛋白酶消化物进行LC/MS 肽图分析。此外还将AdvanceBio 色谱柱及方法与一种亚2 μm 非安捷伦UHPLC 肽图分析色谱柱进行性能比较。

肽谱分析是表征生物治疗性蛋白质的一种常用分析技术。首先用一种或两种蛋白酶将蛋白质酶解成小分子肽。肽混合物通常采用反相色谱法分离，然后通过紫外或质谱检测器进行检测。质谱可以提供肽的质量数据，从而大大扩充肽谱分析的信息含量。由于增加了质量分离模式，可以轻松鉴定出共流出的多肽，同时也可以大幅缩短梯度时长。此外，串联质谱可以将肽碎裂为更小的片段，并为肽的氨基酸序列以及糖基化、磷酸化、氧化和脱酰氨基化等翻译后修饰(PTM) 提供证据。 本应用简报介绍了如何使用新型表面多孔肽谱分析色谱柱配合 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统对一种 IgG (1) 治疗性单克隆抗体 (mAb) 进行肽谱分析。结合 MS/MS 分析，肽谱分析色谱柱独特的分离能力可以最大限度提高分离度和效率，可确保实现可靠灵敏的肽鉴定，而且只需 15 分钟的运行即可实现高序列覆盖。6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统可为肽鉴定提供出色的质量准确度和灵敏度，而 MS/MS 功能则有助于更可靠地确定被修饰肽的鉴定结果。此外，本文还探讨了通过 IgG (1) 肽谱分析梯度和 LC/MS/MS 参数的优化，实现稳定、快速、可靠的 mAb 肽谱分析。

在您由生物药物发现转向生物药物开发之时，您希望尽可能少出意外。扩大生产不应使风险也相应升高。安捷伦提供的测量工具可让您对于了解生物分子在整个开发过程中的确切状态满怀信心。我们的解决方案提供稳定可靠的分析方法，能确保对生物药物的透彻表征以及向质量控制的顺利转移。

监测生物药物的电荷异质性对于生产安全有效的药物至关重要，因为电荷分布的改变可能会引起不良免疫反应。本应用简报展示了对利妥昔单抗创新药物及其生物仿制药的电荷异构体的分析。电荷异构体在峰型模式方面表现出相似性，但是创新药物与生物仿制药的单峰的强度则存在明显差异。从 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱仪转换为 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱仪，所获得的分析结果相当。结果还表明保留时间具有优异的一致性，最大偏差小于 0.5%。两种系统在保留时间和峰面积方面获得了高精度的结果。

我们根据以下三个特性选择了Chromeleon变色龙色 谱数据系统：（1）Cobra向导积分工具；（2）包含在处理方法内 的系统适应性测试（SST）；（3）色谱仪运行的实时MiniPlot缩 略图像。对我们而言，最省事的是使用软件的SST特色功能。 但我想说，对于我们的客户而言，最大益处是报告。所有东西 都在一份报告中，点击鼠标可将报告转换成几种不同的查看 风格

使用大曹三耀PC HILIC S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色谱柱可完成左卡尼汀中间体及成品的保留，在紫外检测条件下获得较好峰形结果，能够与死时间附近的杂质峰取得良好分离；同时，在NQAD检测器上，能够获得中间体的拆分结果（该流动相条件由于有机酸盐的掩盖作用，无法平移至紫外检测器进行分析）。

三氟乙酸常用于多肽的合成、纯化过程，多肽药物中三氟乙酸含量是一项重要的监测指标。本文建立了离子色谱法测定合成多肽药物中三氟乙酸残留含量的方法，获得了满意的结果。本法还可同时测定合成多肽药物中乙酸根、氯离子、磷酸根、硫酸根等无机阴离子。

Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 系统的硬件和软件功能有助于显著提高对高达 30000 m/z 生物分子的测量。该方法所需的总分析时间非常短，适 用于分析大量样品。

本文采用全二维气相色谱/飞行时间质谱（GCxGC/TOF MS），通过对色谱条件的优化，分析了松针挥发油化学成分。相比于传统的一维色谱，突显了全二维气相色谱的高分辨率、高灵敏度、高峰容量等对一些复杂的挥发油成分分析的独特优势。

流变测定和偏振光显微镜同步法可在加热运行中研究晶体的熔融特性，探究冷却运行中是否发生再结晶，获得复合和挤出的适用工艺参数。

在医药行业药物研发的整个过程中，开发和验证快速而又不损失灵敏度的生物分析方法是很关键的。离子抑制效应是最常遇到的问题，它能导致较差的回收率和精确度，以及增加仪器维护成本和时间。对于生物样品的分析，离子抑制是无法彻底避免的，但是应该尽可能地降低。安捷伦 Bond Elut Plexa PCX 的吸附剂表面有一层羟基界面，而其他品牌的产品对应的是酰胺残基。酰胺残基的存在会增加固相萃取吸附剂与生物样品中内源性物质的相互反用，会直接导致离子抑制效应。凭借吸附剂表面的羟基基团，Bond Elut Plexa PCX 降低了吸附剂与生物样品中内源性物质的相互反应，从而提高了分析灵敏度。下面的实验数据清晰地证明，具有单层分散聚合物的 Bond Elut Plexa PCX 降低了离子抑制效应，提高了灵敏度。

在之前的应用中，介绍了 Agilent Cary 60 紫外-可见分光光度计中远程光纤漫反射的用法和优势。颜色软件的加入能帮助我们的大脑对色感进行定量。这种软件能够根据各种几何坐标和照明系统，将色感或视觉转换为数字。使用标准设备以标准观测角进行“目视比色法”的这种思想，早在 1920 年左右就成为了颜色测量规范方法。第一个标准颜色系统由 CIE （国际照明委员会）在 1931 年左右确定。CIE 系统可以看作所有颜色测量系统的核心。然而，对每一位画家来说，他们对颜色的使用是由个人喜好、文化背景和可用的材料决定的。因此，我们需要通过先进的便携仪器来解读艺术品，并找到艺术品的最佳保护方法。

从老鼠腹水中纯化而来的单克隆抗体往往含有一些异构体。即使在SDS-PAGE 电泳分析中只显 从老鼠腹水中纯化而来的单克隆抗体往往含有一些异构体。即使在SDS-PAGE 电泳分析中只显示一条带，但当使用等电聚焦电泳时却可以观察到多条带的存在。 TSKgel CM-STAT是一款适合于分析抗体异构体的高分辨率、非多孔、弱阳离子交换色谱柱。在本数据中介绍了使用TSKgel CM-STAT 色谱柱进行鼠腹水由来的单克隆抗体异构体分析的应用。同时，我们将通过TSKgel CM-STAT色谱柱分离获得的不同组分进一步使用等电聚焦电泳进行了鉴定。 结果表明，TSKgel CM-STAT色谱柱确实适合于异构体的分析，并且可以适用于毫克级别的微量、高分离度的样品制备。