血浆样品中药物化合物检测方案(液相色谱仪)

安捷伦 Bond Elut Plexa PCX- 阳离子交换固相萃取柱降低离子抑制效应，提高液质对于生物样品的分析灵敏度 应用简报 小分子药物与仿制药 作者 前言 Mike Chang Lake Forest， CA 92630 在医药行业药物研发的整个过程中，开发和验证快速而又不损失灵敏度的生物分析方法是很关键的。离子抑制效应是最常遇到的问题，它能导致较差的回收率和精确度，以及增加仪器维护成本和时间。对于生物样品的分析，离子抑制是无法彻底避免的，但是应该尽可能地降低。 USA 安捷伦 Bond Elut Plexa PCX 的吸附剂表面有一层羟基界面，而其他品牌的产品对应的是是胺残基。酰胺残基的存在会增加固相萃取吸附剂与生物样品中内源性物质的相互反用，会直接导致离子抑制效应。凭借吸附剂表面的羟基基团， Bond Elut Plexa PCX 降低了吸附剂与生物样品中内源性物质的相互反应，从而提高了分析灵敏度。下面的实验数据清晰地证明，具有单层分散聚合物的 Bond Elut Plexa PCX 降低了离子抑制效应，提高了灵敏度。 Agilent Technologies 试验材料和方法 实验设计 固相萃取试剂和溶液 2%磷酸加20pL磷酸至1mL水中2%甲酸加 20pL甲酸 1 mL 水中甲醇试剂纯或更高50：50甲醇：乙腈1mL甲醇和1mL乙腈混合含5%氨水的 50：50甲醇：乙腈加50uL的稀氨水至1 mL 50：50 甲醇：乙腈溶液中 为了进行离子抑制的比较，用注射泵以每分钟20微升的速度将药物化合物勿液(浓度为50 ng/mL)连续注入液质。对空白血浆样品进行注射进样。空白血浆分别用安捷伦 Bond Elut Plexa PCX 和两个竞争对手品牌的固相萃取柱处理。选择184→184的MS 离子对来监测脂质化合物。 液相色谱分析条件 固相萃取方法 色谱柱 安捷伦 Poroshell 120 EC-C18， 2.1×5.0 mm， 2.7 um (p/n 699775-902) 所有的样品都用同样的固相萃取方法进行处理 液质联用仪 Agilent 1260 Infinity LC/MS A 0.1%甲酸容液 B 0.1%甲酸的甲醇溶液 流速 0.4mL/min 进样体积 10pL 梯度 时间 (min) %B 0 10 4.0 90 10 10 温度 样品(25C)，色谱柱(室温) 离子源 喷射流技术 ESI 干燥气温度 350°℃ 干燥气流速 10 L/min 雾化气压力 35psi 鞘流气温度 400°C 鞘流气流速 12 L/min 毛细管电压 4000 V 空白血浆进样 注射泵：药物混合溶液连续进样 (药物浓度为 50 ng/mL， 流速为 20 pL/min) 图1.离子抑制效应比较分析实验示意图 1.利用血浆样品基质中添加不同浓度的药物化合物建立校正曲线和检测回收率。 用经过固相萃取处理过的空白血浆进行离子抑制比较分析 醋丁洛尔 9.40 1.71 337.2→116.1 20 128 雷尼替丁 8.20 0.27 315.2→176.1 12 92 纳多洛尔 9.67 0.81 310.2→254.1 12 92 阿替洛尔 9.60 0.16 267.2→190.1 12 92 普萘洛尔 9.42 3.48 260.2→116.2 16 92 普鲁卡因胺 9.32 0.88 236.2→120.1 16 92 美托洛尔(内标) 9.70 1.90 268.2→116.2 16 92 图3.用184→ 184m/z监测空白血浆样品中的脂质化合物 图4.9个浓度水平下(0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、50和100 ng/mL)的6个阻断剂的校正曲线 表2.安捷伦Bond Elut Plexa PCX数据汇总 pKa log P (ng/mL) (ng/mL) 回收率 % RSD 回收率 % RSD 回收率 % RSD 线性相关系数， R? 阿替洛尔 9.60 0.16 0.05 0.1 109.0 1.2 95.6 2.3 95.5 3.3 0.997 纳多洛尔 9.67 0.81 0.01 0.05 110.8 1.4 120.7 1.5 95.4 1.6 0.998 醋丁洛尔 9.40 1.71 0.01 0.1 113.9 0.9 108.6 2.0 98.7 2.4 0.999 普萘洛尔 9.42 3.48 0.05 0.1 120.2 1.1 103.5 2.7 93.6 2.5 0.999 普鲁卡因胺 9.32 0.88 0.05 0.1 93.0 2.1 104.5 1.8 96.9 3.9 1 雷尼替丁 8.20 0.27 0.05 0.1 90.7 1.9 96.4 2.7 91.1 3.9 1 结论 与其他品牌的固相萃取产品相比，安捷伦 Bond Elut Plexa PCX固相萃取柱降低了离子抑制效应，实现了更高的分析灵敏度。灵敏度的改善带来了低检测限 (LOD 0.01-0.05 ng/mL)和定量限(LOQ0.05-0.5 ng/mL)。此外，还获得了优异的线性度(R?≥0.995)、回收率以及精密度(%RSD)。 更多信息 这些数据代表典型的结果。更多有关产品和服务的信息，请浏览我们的网站 www.agilent.com/chem/cn www.agilent.com/chem/cn 安捷伦不对本文可能存在的错误或由于提供、展示或使用本文所造成的间接损失承担任何责任。 本文中的信息、描述和性能指标如有有改，恕不另行通知。 @安捷伦科技(中国)有限公司，2013 2013年12月1日，中国印刷 5990-8400CHCN Agilent Technologies 前言在医药行业药物研发的整个过程中，开发和验证快速而又不损失灵敏度的生物分析方法是很关键的。离子抑制效应是最常遇到的问题，它能导致较差的回收率和精确度，以及增加仪器维护成本和时间。对于生物样品的分析，离子抑制是无法彻底避免的，但是应该尽可能地降低。安捷伦 Bond Elut Plexa PCX 的吸附剂表面有一层羟基界面，而其他品牌的产品对应的是酰胺残基。酰胺残基的存在会增加固相萃取吸附剂与生物样品中内源性物质的相互反用，会直接导致离子抑制效应。凭借吸附剂表面的羟基基团，Bond Elut Plexa PCX 降低了吸附剂与生物样品中内源性物质的相互反应，从而提高了分析灵敏度。下面的实验数据清晰地证明，具有单层分散聚合物的 Bond Elut Plexa PCX 降低了离子抑制效应，提高了灵敏度。结论与其他品牌的固相萃取产品相比，安捷伦 Bond Elut Plexa PCX固相萃取柱降低了离子抑制效应，实现了更高的分析灵敏度。灵敏度的改善带来了低检测限 (LOD 0.01 – 0.05 ng/mL) 和定量限 (LOQ 0.05 – 0.5 ng/mL)。此外，还获得了优异的线性度 (R2 ≥0.995)、回收率以及精密度 (% RSD)。