GC-MS/MS法检测回收溶剂中6种亚硝胺类遗传毒性杂质

本文利用岛津三重四极杆气相色谱质谱联用仪GCMS-TQ8040 NX，建立了回收溶剂中6种亚硝胺类遗传毒性杂质的检测方法。6种亚硝胺在1~200 ng/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数均在0.999以上。取浓度为1 ng/mL的标准溶液连续进样6针，6种亚硝胺峰面积重复性均在5%以下。加标实验中，以10 ng/g与20 ng/g为加标浓度，四种回收溶剂6种亚硝胺平均回收率在97.43%~108.87%之间。该方法灵敏度高、重复性好，可以为监控药物生产中使用的回收溶剂中的亚硝胺类遗传毒性杂质提供可靠的检测方法。SSL-CA23-179Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-268 GC-MS/MS 法检测回收溶剂中6种亚硝胺 类遗传毒性杂质 GCMSMS-268 摘要：本文利用三重四极杆气相色谱质谱联用仪，建立了回收溶剂中6种亚 硝 胺类遗传毒 性 杂质的检测方法。6种亚硝胺在 1~200 ng/mL 浓度范围内线性关系良好，相关系数均在 0.999 以上。取浓度为1ng/mL的标准溶 液连续进样6针，6种亚硝胺峰面积重复性均在5%以下。加标实验 中 ，以10 ng/g 与 20 ng/g 为加标浓度，四 种回收溶剂6种亚硝胺平均回收率在97.43%~108.87% 之间。该方法灵敏度高、重复性好，可以为监控药物生 产 中使用的回收溶剂中的亚硝胺类遗传毒性杂质提供可靠的检测方法。 关键词： GC-MS/MS [回 收溶剂 亚 硝胺 遗传毒性杂质 技术特点： 必一次进 样 ，，可以同时检测6种亚硝胺类遗传毒性杂质。 *实现了药物生产使用的回收溶剂中亚硝胺类遗传毒性杂质的检测。 近年来化药中检出亚硝胺类遗传毒性杂质的新闻 屡有报道。经过调查发现，在酸性条件下，胺类化合物 与亚硝酸盐可反应产 生 亚硝胺。 药品中的 亚硝 胺可能源于药物生产各个环节，，可 能是原料、中间体、催化剂等物料在合成中的副反应产 生 ，也可能是源自使用了受污染的溶剂。根据FDA与 EMA 的指 导 原则，药 品 生产过程中使用的有机溶剂是 亚硝胺杂质的潜在根源之一。因此对药物生产中使用有 机溶剂 中 亚硝胺类遗传毒性杂质的种类、含量测定和成 因分析，已成为 制 药行业关注的重 点 。 本文使用岛津三重 四 极杆气相色谱质谱联用仪 GCMS-TQ8040 NX， 建立了回收溶剂中6种 亚 硝胺类遗 传毒性杂质的检测方法。该方法灵敏 度 高、重复性好，可以为监控药物生产中使用的回收溶剂中的亚硝胺类遗 传毒性杂质提供可靠的检测方法 。 1.1仪器 GCMS-TQ8040 NX 气质联用仪 1.2分析条件 色 色 谱 柱 SH-Rtx-Wax， 30 m×0.25mm×0.50um 柱温程 序 60℃ (0.5 min)_15℃/min_150℃ _20℃ /min_240℃ (2min) 进样口温度 250°℃ 离子化方式 EI 流速控制方式 ：：小 恒线速度 离子源温度 艾： 230℃ 线 速 度 51.6 cm/s 接口温度 230℃ 进样方 式 ：：不分流进样 检测器电压 ： 调谐电压+0.8 kV 进 样 量 lpL 采 集 模式 ： MRM， 离子信息见表1 1.3样品前处理 吸取 100 mg回收溶剂(根据不同溶剂的密度吸取相应体积)，加入色谱纯级二氯甲烷混合使总体 积 为1mL，将此样品溶液上机检 测 。 ■结果与讨论 2.16种亚硝胺类遗传毒性杂质质量色谱图 NDI P A ND P A N DBA 图 16种亚硝胺 标 准溶液质 量 色谱图(1ng/mL) 表1化合物 信 息 No. 化合物名简写 化合物英文名 CAS 号 保留时间 W(min) 定量离子 (m/z) 定性离子 (m/z) 1 NDMA N-Nitrosodimethylamine 62-75-9 4.909 74.00>44.10 74.00>42.10 2 NDEA N-Nitrosodiethylamine 55-18-5 5.654 102.00>85.10 102.00>44.10 3 NEIPA N-Nitrosoethylisopropylamine 16339-04-1 5.977 116.00>99.10 116.00>44.10 4 NDIPA N-Nitrosodiisopropylamine 601-77-4 6.227 130.00>88.10 130.00>42.10 5 NDPA N-Nitrosodipropylamine 621-64-7 6.894 130.00>113.20 130.00>43.10 6 NDBA N-Nitrosodibutylamine 924-16-3 8.296 158.00>141.20 158.00>99.10 2.2校准曲线和检出限 分别配制1、2、4、10、20、40、100、200 ng/mL的混合标准溶液，进样1uL，以浓度为横坐标，峰面 积为纵坐标做校准曲线，校准曲线如图3所示。根据曲线最低浓度点数据，，以3倍信噪比计算仪器检出限，10倍信噪比计算仪器定量限，6种物质的线性相关系数、检出限如表2所 示 。 Area 图 226种亚 硝 胺校准曲线 表2校准曲线相关系数、定量限与检出限 NO. 化合物名称 相关系数((R) 定量限(ng/mL) 检出限(ng/mL) 1 NDMA 0.9998 0.47 0.14 2 NDEA 0.9997 0.21 0.06 3 NEIPA 0.9996 0.07 0.02 4 NDIPA 0.9997 0.34 0.10 5 NDPA 0.9996 0.10 0.03 6 NDBA 0.9997 0.70 0.21 2.3重复性实验 取浓度为 1ng/mL 标 准溶液，连续进样6次，考 察仪器的重复性，测定结果见表3。 表3重复性结果 NO. 化合物名称 峰面积 1 峰面积 2 峰面积 3 峰面积 4 峰面积 5 峰面积 6 RSD (%) 1 NDMA 6029 5888 6502 6333 6564 6525 4.51 2 NDEA 11163 11399 10385 11203 10554 11708 4.57 3 NEIPA 20309 20674 21366 21718 22235 22470 3.97 4 NDIPA 9424 9542 9594 9587 10089 10267 3.50 5 NDPA 4875 4683 4837 4934 5117 5248 4.11 6 NDBA 2192 2173 2249 2251 2224 2432 4.12 2.4加标回收率 对乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷、乙酸异丙酯四种回收溶剂进行检 测 ，四种溶剂均未检出这6种亚硝胺类物质。对这4种回收溶剂 进 行两个浓度水平的加标实验，回收率结果如表4与 表5所示。 图3乙酸乙酯回 收 溶剂加标质量色谱图(加标10ng/g) 表4 回收溶剂 加标 实验结果 (加 标 10ng/g) No. 化合物名称 平均回收率% 乙酸乙酯 正己烷 二氯甲烷 乙酸异丙酯 1 NDMA 107.36 98.61 104.20 103.10 2 NDEA 103.25 106.71 106.80 97.43 3 NEIPA 104.48 107.76 108.49 101.03 4 NDIPA 107.44 108.62 106.82 99.17 5 NDPA 99.65 106.68 107.89 101.29 6 NDBA 103.44 108.30 105.71 108.87 表5回 收 溶剂加标实验结果(加标20ng/g) NO. 化合物名称 平均回收率% 乙酸乙酯 正己烷 二氯甲烷 乙酸异丙酯 1 NDMA 101.28 101.76 99.73 101.18 2 NDEA 101.24 104.15 102.04 103.96 3 NEIPA 101.68 103.58 101.98 98.60 4 NDIPA 103.46 105.56 100.87 99.51 5 NDPA 103.88 105.41 104.36 99.51 6 NDBA 104.44 105.83 103.37 101.75 结论 本文利用岛津三重四极杆气相色谱质谱联用仪 GCMS-TQ8040 NX， 建立 了 回收溶剂中6种亚硝胺类遗传毒性 杂质的检测方法。6种亚硝胺在 1~200 ng/mL 浓度范 围 内线性关系良好，相关系数均在 0.999 以上。取浓度为1ng/mL的标准溶液连续进样6针，6种亚硝胺峰面积重复性均在5%以下。加标实验 中 ，以10 ng/g 与 20 ng/g 为加标浓度，四种回收溶剂6种亚硝胺平均回收率在97.43%~108.87%之间 。该方法灵敏度高、重复性好，可以 为监 控 药物生 产 中使用的回收溶剂中的亚硝胺类遗传 毒 性杂质提供可靠的检测 方 法。 岛津应用云