GC-MS/MS法定量伐尼克兰原料药中的伐尼克兰亚硝基原料药相关杂质（VNDSRI）

▪             使用Shimadzu GCMS- TQ8040 NX和液体自动进样器AOC-20i+s Plus成功地对伐尼克兰原料药中的VNDSRI进行了低水平定量▪             相关系数（R2）大于0.999▪             六份LOQ标准品进样以及加标进样的重复性（RSD%）小于10%在LOQ水平下进行了加标回收率的准确度研究，其结果符合90%-110%的可接受标准。岛津SHIMADZU News 气相色谱质谱仪 GCMS-TQ1M8040 NX， AOCTM-20i+s Plus GC-MS/MS 法定量伐尼克兰原料药中的伐尼克兰亚硝基原料药 相关杂质 (VNDSRI) Nitish Suryawa n shi、Rahu l Dwived i 、Sanket C h iplun k ar、Prashant Hase、Du r vesh Sawant、 Aseem Wagle、Dheeraj H andique、J i t endra Kelkar 和 Pratap Rasam 06-SAIP-GC-033-CN S him adzu Analytic a l (I n d i a) Pvt . Ltd. 特点描述 GC-MS/MS 法测定伐尼克兰原料药中的痕量 VNDSRI 简介 伐尼克兰是一种用于治疗烟瘾的处方药。它是一种 a4β2烟碱乙酰胆碱受体亚型 (nACh)的高亲和力部分激动 剂，具有减少烟瘾和戒断症状的能力。据估计，伐尼克兰能 够成功帮助每十一个吸烟者中一个戒烟六个月。伐尼克兰被 列入世界卫生组织的基本药物标准清单，是一种非专利药物。 伐尼克兰亚硝基原料药相关杂质 (VNDSRI)也称为N-亚硝基伐尼克兰。(图-1)美国食品药品监督管理局(USFDA)已经确定，在一些伐尼克兰成品药样品中，这种杂质的含量 高于 FDA 可接受的摄入 量 限值。 为了确保酒石酸伐尼克兰制剂和原料药的安全性和质 量 ， USFDA 开发并验证了一种确定是否存在 VNDSRI的方法。 图 1： VNDSRI的结构 毒性/规定/方法：根据终生暴露量，认为摄入VNDSRI 低于37 ng/天的可接受摄入量限值对人体是合理安全的。如果人们长期暴露于高于可接受摄入量限值的 VNDSRI， 可 能会增加癌症风险，但一个人连续70年每天服用含有等于 或低于可接受摄入量限值的 VNDSRI的药物，预计不会增加 癌症风险。 FDA 的专家已经评估了在高达 185 ng/天 (92.5ppm) 的临时可接受摄入量水平下暴露于 VNDSRI 的风险，并且已经确定，与终生暴露于37 ng/天(18.5 ppm) 水平 的 VNDSRI 相比，其带来的额外癌症风险极低。 N-亚硝基伐尼克兰是一种固体，在 760 mmHg压力下 的沸点为400.6±40.0℃。由于这种高沸点特性，LC-MS/MS 是首选的分析方法。USFDA 公布了一种测定伐尼克兰片 剂中 VNDSRI 的 HRMS 方法。 本文尝试开发一种应用，该应用通过使用液-液萃取技 术进行 VNDSRI 的选择性萃取，从而将高沸点原料药基质降 至最低。同样，借助耐高温色谱柱和高级的气相色谱功能，可以去除不需要的痕 量 杂质，从而降低残留的可能性。本应 用介绍了使用 GCMS-TQ8040 NX 和 AOC-20i+s Plus 系统测 定伐尼克兰原料药中 VNDSRI 的 GC -MS/MS 方法。 (图2) 图2： G CM S -T Q T M8040 NX 和 AOC T M-20i+s Pl u s 系统 实验 在适当的稀释剂中制备 VNDSRI标准品，使用扫描模式 进行定性分析。定性后，执行前体离子选择和 MRM 优化等 步骤。该步骤有助于获得优化的 MRM 及其优化的碰撞能量 (CE)，这对于 GC -MS/MS 定量非常重要。生成了具有最 佳 MRM 及其 CE 的 GC-MS/MS方法，并用于分析。 对于定量，绘制了 VNDSRI在2.0至10.0 ppm 范围内 的三点标准曲线。用于分析的条件如表1所示。检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为 0.5 ppm 和2.0 ppm。 LOQ的信噪 比和RSD%如表2所示。 (上述所有浓度均为相对于样品) 方法 表 1：分析条件 GCMS 系统 ： GCMS-TQ8040 NX 和 AOC-20i+s Plus 色谱柱 适当固定相和尺寸的毛细管气相色谱柱 进样模式 不分流 (Topaz 衬管货号23336) 流量控制模式 恒流 进样器端口温度 310℃ 载气 氦气 柱流量 1.5mL 进样量 2.0 pL 温度程序 40℃保持0分钟；以15℃/分钟的速度 加热至310℃，保持3分钟 电离模式 电子电离(EI) 接口温度 310°C 离子源温度 250°C 采集模式 MRM MRM 和 CE CE 18 181.00>127.10； CE 8 181.00> 154.10； CE 22 181.00>145.20 样品分析 线性标准品制备： 向三个单独的 50 mL离心管中加入2.0 g NaCl ， 向相同 的离心管中加入20 mL 在 HPLC级水中制备的0.002、0.005和0.01 ppm标准品和 20mL 二氯甲烷 (DCM)， 在混合器 上摇动离心管15 min， 以4500 rpm 离心 10 min， 分离下 层有机层并将其进样到 GC-MS/MS 中。 样品制备： 称取 20.0 mg 伐尼克兰原料药和2.0 gNaCl， 置于50mL离心管中，转移 20 mL HPLC 级水和 20 mL DCM 到离心 管中，在混合器上摇动离心管15 min， 以4500 rpm 离心 10 m i n， 分离下层有机层并将其进样到 GC-MS/MS 中。 加标样品制备： 称取 20.0 mg 伐尼克兰原料药和 2.0克NaCl，置于50mL离心管中，转移 20 mL 在 HPLC级水中制备的2 ppb VNDSRI标准品和 20mL DCM 到离心管中，在混合器上摇动 离心管15 m i n， 以4500 r p m 离心10 mi n ， 分离下层有机 层并将其进样到 GC-MS/MS 中。 结果和讨论 图3描述了 VNDSRI的标准曲线、线性标准品叠加图和 LOQ标准品叠加图 图 3： VND S R I 的标准曲线、线性标准品叠加图和 LOQ 溶液色谱图 GCMS-TQ 与 AOC是岛津制作所在日本和/或其他国家的商标。 LOQ 水平下的 VNDSRI和稀释剂空白的叠加图显示无残 留(图4) 图 4：不同时间间 隔 的 V N DSRI标准品和稀释剂 空 白的叠加图 线性范围、根据 LOQ 的信噪比和 RSD% 确定的LOQ如 表2所示，而加标的结果如表3所示。 表 2： V ND S RI 的验证结果总结 线性范围 (ppm) LOQ r2 浓度 RSD% RSD% S/N* (pm) (n=6) (加标法) 2.0 to10.0 0.999 2.0 5.7 8.7 95 *=峰至峰 表示的结果为相对于样品 表 3： LOQ水平下的样品加标研究(所示结果为相对于样品) VNDSRI 样品量 加标量 加标样品检测值 % (ppm) (ppm) (ppm) 准确度 2.14 2.0 4.2 105 结论 ·使用 S h imad z u GCMS-TQ8040 NX 和液体自动进样器 AOC -20i+s Plus 成功地对伐尼克兰原料药中的 VNDSRI 进行了低水平定量 相关系数(R)大于0.999 ·六份LOQ标准品进样以及加标进样的重复性(RSD%)小于10% 在 L OQ 水平下进行了加标回收率的准确度研究，其结果 符合90%-110%的可接受标准。 岛津企业管理(中国)有限公司 岛津(香港)有限公司 免责声明： *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 如有变动，恕不另行通知。