LC-MS检测血浆中抗癌药紫杉醇的浓度

使用岛津小型单四极杆质谱仪LCMS-2050，建立了血浆中抗癌药紫杉醇测定方法。使用内标、标准品及质控品进行了方法的线性、准确度及精密度的考察。结果显示该方法线性良好，校准曲线相关系数大于0.999，质控品测定准确度结果与理论值接近，回收率在102%~108%之间，RSD在1.0%~1.7%之间，该方法前处理简便，分析速度快，灵敏度高，专属性强，可用于紫杉醇治疗药物监测。SSL-CA22-549Excellence in Science Excellence in ScienceLCMS-032 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD. -Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cnTel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MS 检测血浆中抗癌药紫杉醇的浓度 LCMS-032 摘要：使用岛津小型单四极杆质谱仪建立了血浆中抗癌药紫杉醇测定方法。使用内标、标准品及质控品进行了方法的线性、准确度及精密度的考察。结果显示该方法线性良好，校准曲线相关系数大于0.999，质控品测定准确度结果与理论值接近，回收率在102%~108%之间， RSD 在 1.0%~1.7%之间，该方法前处理简便，分析速度快，灵敏度高，专属性强、，2可用于紫杉醇治疗药物监测。 关键词：小型单四极杆质谱仪抗癌药紫杉醇 治疗药物监测 技术特点： 小使用小型单四极杆质谱仪结合检测试剂盒，建立紫杉醇血药浓度测定方法。 *方法快速高效，分析时间仅需 4min。 紫杉醇是从短叶紫杉树皮中提取的一种天然生物碱，其抗肿瘤活性发现于20世纪70年代，于1992年首次通过了美国FDA认证。在化学结构上紫杉醇是紫杉烷环的二萜类化合物，通过促进微管蛋白装配和抑制微管解聚来发挥抗肿瘤作用。紫杉醇是发现的第一个能与微管蛋白聚合体相互作用的药物，即通过与微管紧密地结合，使它们稳定而起作用，同时发现紫杉醇对多种实体瘤细胞显示出良好的作用。紫杉醇在临床上已经广泛用于乳腺癌、卵巢癌和部分头颈癌和肺癌的治疗。但研究表明，紫杉醇有骨髓抑制不良反应，监测紫杉醇血 药浓度可预测化疗毒性及疗效，对提高患者用药的安全性和有效性具有重要意义。目前常用的血药浓度监测方法包括高效液相色谱法(HPLC)、免疫试剂盒测试法、高效液相色谱-质谱联用分析法(LC-MS/MS)等，而使用 LC-MS 法测定紫杉醇的报道较少。 本文使用岛津小型单四极杆质谱仪 LCMS-2050，建立了血浆中抗癌药紫杉醇测定方法，该方法前处理简便，分析速度快，灵敏度高，专属性强，，可用于紫杉醇治疗药物监测。 1.1仪器 本实验使用单四极杆质谱LCMS-2050 系统。具体配置为： 系统控制器： CBM-40 在线脱气机：：DGU-405 输液泵：LC-40D XS×2柱温箱：CTO-40C质谱 自动进样器：SIL-40C XS 仪： LCMS-2050 色谱工作站：Labsolutions Ver.5.114 1.2分析条件 液相色谱条件 色 谱 柱： Shim-pack GIST C18 (50 mm×2.1mml.D.，2um)； P/N： 227-30001-02；岛津(上海)实验器材有限公司 流 动 相： A 相为0.1%甲酸水溶液(含2mmol/L乙酸铵)；B相为0.1%甲酸甲醇溶液 进样体积： 2uL 温品： 40°C流速： 0.4 mL/min 柱洗针 液：：甲醇/水=1：1(v：v)洗 脱方式：梯度洗脱，B相起始浓度为70%，时间程序如表1所示。 表1梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 1.00 泵 B.Conc 70 2.00 泵 B.Conc 95 2.50 泵 B.Conc 95 2.60 泵 B.Conc 70 4.00 控制器 Stop 质谱条件 离子化模式： ES+ 雾化气流速：2.0 L/min 接口电压：33kV 干燥气流速：5.0L/min 脱溶剂温度：450°℃ 加热气流速：7.0L/min DL温 度：150°C 扫描模式：选择离子监测 (SIM) MRM参 数 见表2 表2SIM 参数 编号 中文名 英文名 CAS号 SIM 离子 1 紫杉醇 Paclitaxel 33069-62-4 854.2 2 紫杉醇内标 Paclitaxel-IS 一 859.2 1.3标准品及样品制备 使用紫杉醇测定试剂盒(液相色谱-串联质谱法，江苏豪思生物科技有限公司)按照试剂盒说明书进行实验。试剂盒包含紫杉醇标准品 L1~L7， 低中高浓度质控品 LQC， MQC， HQC及蛋白沉淀剂(蛋白沉淀剂中含内标)。 基质匹配校准曲线制备：取试剂盒中紫杉醇校准样品L1~L7各10 uL， 加入90uL空白血浆，涡旋混匀1min， 得基质校准溶液，浓度分别为20 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL、1000 ng/mL、2000 ng/mL、4000ng/mL、8000 ng/mL。 基质匹配质控品溶液制备：取低中高浓度质控品 LQC， MQC， HQC各10uL， 加入90 uL空白血浆，涡旋混匀1 min， 得基质匹配质控品溶液，浓度分别为38.90 ng/mL， 407.67 ng/mL， 3886.67 ng/mL。 标准品、质控品及样品前处理： ■结果讨论 2.1 SIM 色谱图 Paclitaxel (20 ng/mL) Paclitaxel-IS 图1 校准曲线最低点谱图 2.2线性测定结果 对标准品按1.2中的分析条件进行分析，内标法制作校准曲线。紫杉醇在 20 ng/mL~8000 ng/mL 校准曲线浓度范围内线性相关系数大于0.999，准确度在98.0%~104.7%之间，满足测定需求。 2.3准确度及精密度测定结果 按1.3中的前处理方法对低中高浓度质控品进行前处理，每个浓度质控品重复制备6份，按1.2中的分析条件对质控品进行分析，质控品的准确度结果如表3所示，结果显示质控品测定准确度结果与理论值接近，回收率在102%~108%之间， RSD在 1.0%~1.7%之间，满足临床测定需求。 表3 质控准确度考察结果(n=6， 浓度单位ng/mL) 质控 项目 数值 LQC 理论浓度 38.90 测定浓度 41.98 质控范围 31.12~46.68 质控准确度% 108 RSD% 1.7 理论浓度 407.67 MQC 测定浓度 413.85 质控范围 346.52~468.82 质控准确度% 102 RSD% 1.5 理论浓度 3886.67 HQC 测定浓度 3999.58 质控范围 3303.67~4469.67 质控准确度% 103 RSD% 1.0 结论 使用岛津小型单四极杆质谱仪 LCMS-2050， 建立了血浆中抗癌药紫杉醇测定方法。使用内标、标准品及质控品进行了方法的线性、准确度及精密度的考察。结果显示该方法线性良好，校准曲线相关系数大于0.999，质控品测定准确度结果与理论值接近，回收率在 102%~108%之间， RSD 在1.0%~1.7%之间，该方法前处理简便，分析速度快，灵敏度高，专属性强，可用于紫杉醇治疗药物监测。 岛津应用云