啤酒花中酸和酸检测方案(液相色谱仪)

Newshttp：//www.shimadzu.com.cn第一版发行行：2021年3月400-650-0439 ApplicationNews 高效液相色谱分析仪 NexeraTM XR 啤酒花中α酸和β酸的快速分析 01-00025-CN 森田梓 对用户的好处 一次进样，5分钟内同时分析啤酒花中的α酸和β酸。 采用 Shim-pack VeloxTM 核壳色谱柱，可在低系统压力下进行分析。 使用相同的仪器配置，除α酸和β酸之外，还可同时分析异α-酸。 表1制备标准溶液的试剂 简介 啤酒原料中的啤酒花含有α酸(律草酮类)、3酸(蛇麻酮类)。α酸在酿造工序中经异构化，转化为异α酸(异律草酮类)，是啤酒中的苦味组分。据报道，β酸虽然与啤酒的苦味程度关系不大，但会影响苦味的平衡。异α酸在啤酒以外的应用也备受关注，因为其具有预防阿尔茨海默病和改善认知功能退化的效果。 α酸及β酸通常采用 HPLC 进行分析，分析时间常为30分钟左右。 本文参考 EBC (欧洲啤酒酿造协会)7.7及 ASBC (美国酿造化学家协会) Hops-14，介绍了一种通过高效液相色谱仪 NexeraXR快速同时分析啤酒花中α酸和β酸的应用案例。此外，还介绍了在啤酒花提取液中添加异α酸进行同时分析的案例。 a酸、β酸标准溶液的分析 啤酒花中所含的a酸、β酸的结构式如图1所示。α酸、β酸分别存在3个同系物。“国际校准提取物4”(从ASBC或Labor Veritas 购入)用于配制标准溶液，其组成如表1所示。标准溶液配制过程如下：取0.5g溶于甲醇，定容至100 mL， 取出10 mL， 定容至50 mL， 使用 0.22 um孔径滤膜过滤即得。标准溶液的色谱图如图2所示。由于用于制备标准溶液的试剂本身包含多个同系物，故此处分别对α酸、β酸进行了分组。表2为分析条件。此外，本方法分析过程中系统压力最大约为26 MPa。采用核壳型技术的 Shim-pack Velox 色谱柱作为分析柱，即便使用容易使色谱柱压力升高的甲醇，仍可以低系统压力进行分析。 图1α酸、β酸的结构式 试剂名称 成分 国际校准提取物4 类葎草酮10.98% N+近葎草酮31.60% 总α酸42.58% 类蛇麻酮 13.02% N+聚蛇麻酮13.52% 总β酸26.54% 表2分析条件 系统 ： Nexera XR 色谱柱 ： Shim-pack Velox C18 (50 mm × 3.0 mml.D.， 1.8pm) 流动相A ： 10 mmol/L(钠)磷酸盐缓冲液 (pH2.6) +0.2 mmol/L ETDA·2Na aq. 流动相B ： Methanol 流速 ： 0.7 mL/min 时间程序 ：B浓度80%(0 min) -90 % (3 min)-80 % (3.01-5 min) 柱温 ：40°℃ 进样量 ：2uL 检测 ： UV 314 nm (SPD-M40)，标准池 样品瓶 ：岛津样品瓶， LC， 1.5 mL 透明玻璃 *1 P/N ：227-32008-01，*2 P/N：227-34001-01 流动相A：将磷酸二氢钠二水合物5 mmol (0.78g) 和磷酸(85%，14.7 mol/L) 5 mmol (0.34 mL) 和 EDTA ·2Na 0.074 g 溶解在1L的去离子水中。 图2标准溶液的色谱图 啤酒花中α酸及β酸的分析 对2种市售啤酒花颗粒进行了溶剂提取和分析。预处理方法如图3所示，色谱图如图4和5所示。 图3预处理方法 图4啤酒花A的色谱图 图5啤酒花B的色谱图 图6样品含量计算公式 按照图3所示的预处理流程平行处理6次样品，按照图6的计算公式计算样品含量。在振摇步骤前加标，加标浓度为标准溶液浓度的1/10。结果如表3所示。样品含量和加标回收率为6次平行实验的平均值。 Nexera、 Shim-pack Velox 是岛津制作所株式会社在日本及其他国家的商标。 表1制备标准溶液的试剂 样品含量(%) 样品含量的相对标准偏差(%RSD) 加标回收率(%) 加标回收率的相对标准偏差(%RSD) 样品 α酸 β酸 a酸 日酸 α酸 β酸 a酸 酸 啤酒花A 5.1 14.3 1.4 1.2 98 90 1.1 1.0 啤酒花B 9.5 24.0 1.4 1.3 102 97 2.4 2.4 异α酸、α酸、β酸的同时分析 在啤酒花A萃取液(按图3预处理流程处理)中添加异α酸 200 mg/L，上机分析。异α酸标准溶液的配制请参考应用报告L590。参照表2的条件，采用双波长模式，检测波长除314nm外，增加270 nm。梯度时间程序变更为 B Conc.60%(0 min)-100%(3min)-60%(3.01-5 min)。色谱图如图7和图8所示。异α酸的加标回收率为99.7%，方法准确度好。 mAU_ 500UV 314nm 250- 0- 500- 250 500- 250- 0 500- min 250- 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 min 图8啤酒花A的色谱图(添加异a-酸) 结论 本文介绍了采用 Nexera XR 快速同时分析啤酒花中α酸和β酸的应用案例。参考 EBC 和 ASBC，从啤酒花颗粒中萃取了α酸和β酸，并进行了定量检测。此外，可通过 岛津应用云 变更梯度时间程序和追加检测波长，在分析 α酸及β酸的同时，分析异α-酸。 ( 参考文献 ) ( 1 ) A m er ican S ociety o f Brewing Che m is t s， ASBC M e thods of Analysis， Hops-14 2 ) European B rewery C onvent i on， E BC ANALYTICA， 7. 7 ) ( 免责声明： ) 岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司 ( 用户服务热线电话： 800-810-0439 ) 啤酒原料中的啤酒花含有α酸（律草酮类）、β酸（蛇麻酮类）。α酸在酿造工序中经异构化，转化为异α酸（异律草酮类），是啤酒中的苦味组分。据报道，β酸虽然与啤酒的苦味程度关系不大，但会影响苦味的平衡。异α酸在啤酒以外的应用也备受关注，因为其具有预防阿尔茨海默病和改善认知功能退化的效果。α酸及β酸通常采用HPLC进行分析，分析时间常为30分钟左右。本文参考EBC（欧洲啤酒酿造协会）7.7及ASBC（美国酿造化学家协会）Hops-14，介绍了一种通过高效液相色谱仪Nexera XR快速同时分析啤酒花中α酸和β酸的应用案例。此外，还介绍了在啤酒花提取液中添加异α酸进行同时分析的案例。