白葡萄球菌粉中蛋白质含量检测方案(定氮仪)

K-272-202101 凯氏定氮仪测定白葡萄球菌粉中的蛋白质含量 1前言 白葡萄球菌粉是经现代生物工程技术深层培养、精制而成的。为黄褐色粉末；有似干酵母臭，无味。由非致病性表皮葡萄球菌(白色葡萄球菌)液体培养而得的灭活干燥菌体制成。本品及相关制剂作为止咳药，适用于慢性支气管炎等呼吸道疾病引起的咳嗽、痰多。本实验参照《中国药典2020年版第四部0731蛋白质含量测定第一法凯氏定氮法》对白葡萄球菌粉中的蛋白质含量进行测定。 2仪器与试剂 2.1仪器 K1160全自动凯氏定氮仪，分析天平。 2.2试剂 20g/L 硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂 ， 400g/L氢氧化钠， 0.02mol/L硫酸或盐酸标准滴定液。 3实验方法 3.1样品制备 非蛋白氮供试品溶液的制备：精密量取供试品适量(2020版药典中规定如供试品为冻干制剂或固体粉末时，应复溶后量取，且蛋白质含量不高于 0.2g。由于本样品复溶困难，即即取 0.3~0.4g样品。。)，置20mL容量瓶中，加水10mL，10%钨酸钠溶液2mL，0.33moL/L硫酸溶液2mL， 加水至刻度，摇匀，静置30分钟，过滤，弃去初滤液(约3~5mL)，取续滤液作为非蛋白氮供试溶液。 3.2取羊 总氮供试品称取 0.05g(2020版药典中规定如供试品为冻干制剂或固体粉末时，应用0.9%氯化钠溶液定量稀释成每1mL中含哈量约 1mg的溶液，然后量取 1mL 进行测定。由于本样品复溶困难，即称取0.05g样品。)，非蛋白氮供试品量取 2mL 非蛋白氮溶液加入消化管中，各加入3g硫酸钾与0.2硫酸铜水，再沿瓶壁滴加硫酸10ml。 3.3消解 设定消解参数 表1消解参数设置 阶段 温度/℃ 保持/min 1 250 30 2 420 60 备注：第一阶段不盖排废罩，排出水分。 3.4测试 定氮仪参数设置如下表。 表2定氮仪参数设置 硼酸 稀释水 碱液 蒸馏量 蒸汽流量 蛋白系数 滴定酸浓度 20mL 50mL 40mL 5min 100% 6.25 0.0200mol/L 4结果与讨论 4.1实验结果 表3白葡萄球菌粉中的蛋白质含量测试结果 样品名称 取样质量g 氮含量% 平均值 蛋白质含量% 白葡萄 总氮 0.04759 6.489 6.518 29.556 0.04760 6.546 球菌粉 非蛋白 氮 0.3474 1.812 1.789 1.759 4.2结仑 测试结果显示本次测试的白葡萄球菌粉中的蛋白质含量为 29.556%. ( 参考文献 ) [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].四部.北京：中国医药科技出版社，2020：附录0731蛋白质含量测定第一法凯氏定氮法 注意事项 1)该样品为粉末样品，因此依据药典在样品制备时应制备成合适浓度的溶液进行测试，如样品复溶困难可直接称取相应重量样品进行测试。 2)本实验中蛋白质含量=(总氮含量-非蛋白氮含量)*6.25。 -- -- 1 前言白葡萄球菌粉是经现代生物工程技术深层培养、精制而成的。为黄褐色粉末；有似干酵母臭，无味。由非致病性表皮葡萄球菌（白色葡萄球菌）液体培养而得的灭活干燥菌体制成。本品及相关制剂作为止咳药，适用于慢性支气管炎等呼吸道疾病引起的咳嗽、痰多。本实验参照《中国药典 2020年版 第四部 0731 蛋白质含量测定 第一法 凯氏定氮法》对白葡萄球菌粉中的蛋白质含量进行测定。2 仪器与试剂2.1仪器K1160全自动凯氏定氮仪，分析天平 。                  2.2试剂20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，400g/L氢氧化钠，0.02mol/L硫酸或盐酸标准滴定液。