定灭活大肠杆菌粉疫苗中蛋白质检测方案(定氮仪)

IGAS WOQIING悟空仪器K-271-202101 K-271-202101 凯氏定氮仪测定灭活大肠杆菌粉疫苗中的蛋白质含量 1前言 致病性大肠杆菌是人和多种动物(猪、鸡等)的致病菌之一。疫苗免疫是控制大肠杆菌病的主要方法。从动物体分离或实验室保存鉴定的大肠杆菌菌株，经扩增培养，配制成适当浓度，用甲醛灭活，使大肠杆菌失去毒力但又保持免疫原性，制成灭活疫苗。在疫苗中添加白油佐剂，有利于增强疫苗的免疫效果。本实验参照《中国药典2020年版第四部0731蛋白质含量测定第一法凯氏定氮法》对大肠杆菌粉疫苗中的蛋白质含量进行测定。 2仪器与试剂 2.1仪器 K1160全自动凯氏定氮仪，分析天平。 2.2试剂 20g/L 硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂 ， 400g/L 氢氧化钠， 0.02mol/L硫酸或盐酸标准滴定液. 3实验方法 3.1样品制备 非蛋白氮供试品溶液的制备：精密量取供试品适量(2020版药典中规定如供试品为冻干制剂或固体粉末时，应复溶后量取，且蛋白质含量不高于 0.2g。由于本样品复溶困难，即称取0.3~0.4g样品。。)，置20mL容量瓶中，加水10mL， 10%钨酸钠溶液2mL， 0.33moL/L硫酸溶液2mL， 加水至刻度，摇匀，静置30分钟，过滤，弃去初滤液(约3~5mL)，取续滤液作为非蛋白氮供试溶液。 3.2取羊 总氮供试品称取 0.05g(2020版药典中规定如供试品为冻干制剂或固体粉末时，应用0.9%氯化钠溶液定量稀释成每1mL中含哈量约 1mg的溶液，然后量取 1mL 进行测定。由于本样品复溶困难，即称取0.05g样品。)，非蛋白氮供试品量取 2mL 非蛋白氮溶液加入消化管中，各加入3g硫酸钾与0.2硫酸铜水，再沿瓶壁滴加硫酸10ml。 3.3消解 设定消解参数 表1消解参数设置 阶段 温度/℃ 保持/min 1 250 30 2 420 60 备注：第一阶段不盖排废罩，排出水分。 3.4测试 定氮仪参数设置如下表。 表2定氮仪参数设置 硼酸 稀释水 碱液 蒸馏量 蒸汽流量 蛋白系数 滴定酸浓度 20mL 50mL 40mL 5min 100% 6.25 0.0200mol/L 4结果与讨论 4.1实验结果 表3大肠杆菌粉疫苗中的蛋白质含量测试结果 样品名称 取样质量g 氮含量% 平均值% 蛋白质含量% 灭活大肠 杆菌粉 AND200601 总氮 0.05071 10.930 10.937 66.194 0.04968 10.943 非蛋白氮 0.3887 0.3466 0.346 0.3453 4.2结论 测试结果显示本次测试的大肠杆菌粉疫苗粉的蛋白质含量为 66.194%. ( 参考文献 ) [1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].四部.北京：中国医药科技出版社，2020：附录0731蛋白质含量测定第一法凯氏定氮法 注意事项 1)该样品为粉末样品，因此依据药典在样品制备时应制备成合适浓度的溶液进行测试，如样品复溶困难可直接称取相应重量样品进行测试。 2)本实验中蛋白质含量=(总氮含量-非蛋白氮含量)*6.25。 -- -- 1 前言致病性大肠杆菌是人和多种动物（猪、鸡等）的致病菌之一。疫苗免疫是控制大肠杆菌病的主要方法。从动物体分离或实验室保存鉴定的大肠杆菌菌株，经扩增培养，配制成适当浓度，用甲醛灭活，使大肠杆菌失去毒力但又保持免疫原性，制成灭活疫苗。在疫苗中添加白油佐剂，有利于增强疫苗的免疫效果。本实验参照《中国药典 2020年版 第四部 0731 蛋白质含量测定 第一法 凯氏定氮法》对大肠杆菌粉疫苗中的蛋白质含量进行测定。2 仪器与试剂2.1仪器K1160全自动凯氏定氮仪，分析天平 。                  2.2试剂20g/L硼酸溶液，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，400g/L氢氧化钠，0.02mol/L硫酸或盐酸标准滴定液。