几丁糖中蛋白质检测方案(定氮仪)

K-313-201711 海能仪器：：凯氏定氮法测定医用几丁糖中蛋白质含量(凯氏定氮仪) 1前言 医用几丁糖是一种具有良好生物相容性、生物可降解性及生物学活性的医用高分子多糖类物质，可以有效防止术后组织粘连。常规的蛋白质测定方法有凯氏定氮法，分光光度法以及燃烧法，其中以凯氏定氮法应用最为广泛。但传统的玻璃仪器具有操作繁琐，耗时长，危险性高等缺点。本文采用《中国药典》2015年版中中测定法第三法以全自动凯氏定氮仪进行实验，操作简单，测得结果平行性良好。 2仪器与试剂 2.1仪器 K1100F 全自动凯氏定氮仪， SH420F石墨消解仪 2.2试剂 硫酸(分析纯)、硼酸(分析纯)、氢氧化钠(分析纯)、溴甲酚绿-甲基红混合指示剂、催化剂片(3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合均匀压片)、0.1mol/L硫酸标准滴定液等。 3实验方法 3.1取样 称取医用几丁糖样品1.5g(精确至0.1mg))，加催化剂一片(或硫酸钾3g与硫酸铜0.2g)，再加硫酸10mL。同时做空白实验。 3.2消解 利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化完毕后，将消化管取下冷却。消解过程设定消解温度参数如下表： 温度(℃) 时间(min) 1 180 15 2 420 50 3.3上机测试 待消化管内溶液冷却至室温后，将消化管放置于定氮仪上，开始蒸馏滴定。定氮仪设置程序如下： 硼酸 稀释水 碱液 蒸馏量 蒸汽流量 25mL 30mL 35mL 5min 100% 4结果与讨论 4.1实验结果：仪器自动滴定并计算，计算公式如下： 1.401×Cx(V-V)氮含量：N蛋白质含量：：IP%=N%×6.25W式中：C-标准酸摩尔浓度(mol/L) W-样品质量(g) Vo-空白样滴定标准酸消耗量(mL) V-样品滴定标准酸消耗量(mL) 6.25-样品蛋白系数 编号 取样量(g) 氮含量(%) 蛋白质含量(%) 平均值(%) RSD(%) 1 1.6049 0.6304 3.9400 3.966 0.58 2 2.0140 0.6371 3.9819 3 1.7097 0.6363 3.9769 4.2实验结论 通过以上测得数据可知，利用全自动凯氏定氮仪测定医用几丁糖中的蛋白质含量平行性良好，且具有操作简单，安全性高，节省人力等优点。 ( 参考文献 ) ( 《中国药典》2015年版第四版0704氮测定法第三法 ) 1前言医用几丁糖是一种具有良好生物相容性、生物可降解性及生物学活性的医用高分子多糖类物质，可以有效防止术后组织粘连。常规的蛋白质测定方法有凯氏定氮法，分光光度法以及燃烧法，其中以凯氏定氮法应用最为广泛。但传统的玻璃仪器具有操作繁琐，耗时长，危险性高等缺点。本文采用《中国药典》2015年版中氮测定法第三法以全自动凯氏定氮仪进行实验，操作简单，测得结果平行性良好。2 仪器与试剂2.1仪器K1100F全自动凯氏定氮仪，SH420F石墨消解仪2.2试剂硫酸（分析纯）、硼酸（分析纯）、氢氧化钠（分析纯）、溴甲酚绿-甲基红混合指示剂、催化剂片（3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合均匀压片）、0.1mol/L硫酸标准滴定液等。