中药材中150种农药残留检测方案(液质联用仪)

LC-MS/MS法同时测定中药材中150种农药残留 应用中心 前言 2020年版《中国药典》修订工作正在火热进行中，新修订的指导标准也在陆续的发布中。2019年8月27日，2341《农药残留测定法》已经公示，内容包括农药残留测定方法使用气相色谱法(通则0521)和质谱法(通则0431)测定药材、饮片及制剂中部分农药残留量。与2015年版《中国药典》相比，新增了液相色谱质谱联用法测定中药材中523种农药残留量。 本文选择通则中150种典型农药，采用谱育科技EXPEC-5210三重四极杆串联质谱仪，参照《农药残留测定法》征求意见稿中液相色谱质谱联用仪测定农残的色谱条件、仪器参数和农药推荐离子对，以及依照通则的前处理方法，建立了中药材中150种新增典型农药残留量的测定方法。本方法重复性好，灵敏度高，完全满足2020版《中国药典》对药材、饮片及制剂中部分农药残留量的测定要求。 实验部分 仪器设备： ULC 510超高效液相色谱仪(具体配有二元超高压输液泵、超高压自动进样器(含冷却功能)、柱温箱)、EXPEC 5210三重四极杆串联质谱仪杆。 标准品和试剂： 农标准品：150种农药均购自上海安谱，置于-20℃冰箱保存。 试剂：甲醇和水为色谱级；甲酸为色谱级，纯度98%；甲酸铵和冰醋酸为色谱级，纯度99%。 样品前处理 取供试品，粉碎成粉末(过三号筛)取约3g，精密称定，置50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15ml，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15ml与内标溶液100ul，涡旋使混匀，置振荡器剧烈震荡(500次/分钟)5分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末(4：1) 7.5g，立即摇散，在置振荡器上剧烈震荡(500次/分钟)3分钟，于冰浴中冷却10分钟， 离心(4000转/分钟)5分钟，取上清液9ml，置已预先装有净化材料的分散固相萃取管[无水硫酸镁900mg， N-丙基乙二胺 (PSA) 300mg，十八烷基硅烷键合硅胶300mg， 硅胶300mg，石墨化炭黑90mg]中，涡旋使充分混匀，在置振荡器上居烈震荡(500次/分钟)5分钟使净化完全，离心(4000转/钟钟)5分钟，精密吸取上清液5ml，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约0.4ml， 加40%甲醇溶液(含10mmol/L甲酸铵)定容至1ml，涡旋混匀，用微孔滤膜(0.22um)滤过，取续滤液，取得。 仪器分析条件 应用简报： 液相色谱条件： 质谱条件： 编号：LC-MSMS 2019-009 表1液相色谱参数表 表212三重四级杆质谱参数表 电离模式 流动相B：0.05%甲酸的甲醇溶液(含10mmol/L甲酸铵) 毛细管高压 4.8kV 时间 (min) 流动相A 流动相B 梯度程序 5.5 真空接口温度 110℃ 去溶剂气温度 400℃ 13.5 13.6 雾化气流量 1.6L/min 15 柱温 35℃ 流速 0.4ml/min 反吹气流量 2L/min 进样量 10ul 自动进样 器温度 4℃ 去溶剂气流量 6L/min 平衡时间 1-2min 总色谱分 析时间 15min 碰撞气流量 0.32L/min 正离子模式 (ESI) 表3部分目标物MRM参数和检出限参考值表 EXPEC TECHNOLOGY 中文名 母离子 子离子 检出限 (mg/kg) 编号 中文名 母离子 子离子 检出限 (mg/kg) 啶虫脒 223.5 126.0 90.0 0.05 55 二氧威 224.1 167.1 123.2 0.005 2 乙草胺 270.1 224.1 148.1 0.005 56 乙拌磷 275.0 89.0 61.0 0. 3 活化酯 211.0 136.0 139.9 0.005 57 乙拌磷砜 307.0 261.0 153.0 0.1 4 苯草醚 265.0 248.0 182.1 0.005 58 灭菌磷 299.9 148.0 243.9 0.005 5 甲草胺 270.1 238.1 162.1 0.005 59 氟硫草定 402.1 354.0 271.9 0.005 6 涕灭威砜 223.1 166.1 148.0 0.005 60 敌草隆 233.0 160.0 72.0 0.005 7 灭害威 209.1 152.1137.1 0.005 61 敌瘟磷 311.0 172.9 282.9 0.005 199.1 甲氨基阿维 157.8 8 莎稗磷 368.1 125.0 0.005 62 菌素苯甲酸 盐 886.3 302.1 0.005 9 莠去通 212.1 127.9 141.7 0.005 63 氟环唑 330.1 121.0 123.0 0.005 174.1 204.9 10 莠去津 216.1 104.0 0.005 64 乙环唑 328.1 204.9 0.005 11 益棉磷 346.0 289.0 261.0 0.05 65 磺噻隆 264.7 207.9 114.1 0.005 12 保棉磷 318.0 160.1 132.0 0.05 66 乙硫苯威 226.1 106.9 164.1 0.005 13 叠氮津 226.1 198.0 124.7 0.005 67 乙硫磷 385.0 199.0 142.9 0.005 14 苯霜灵 326.2 294.2 208.1 0.005 68 乙氧呋草黄 287.1 259.1 121.1 0.005 15 噁虫威 224.2 108.9 167.0 0.005 69 灭线磷 243.1 173.0 201.0 0.005 16 麦锈灵 323.9 230.9 105.0 0.005 70 乙嘧硫磷 293.1 265.0 125.0 0.005 17 地散磷 398.1 313.9 218.0 0.005 71 苯线磷 304.1 217.0 234.0 0.005 18 啶酰菌胺 343.0 307.1 140.0 0.005 72 苯线磷砜 336.1 308.1 266.0 0.005 19 除草定 261.1 204.9 187.9 0.005 73 喹螨醚 307.2 161.1 147.1 0.005 20 噻嗪酮 306.2 201.1 116.1 0.005 74 腈苯唑 337.1 125.0 70.0 0.005 116.1 70.0 接上表3 应用简报： 编号： EXPEC TECHNOLOGY 编号 中文名 母离子 子离子 检出限 (mg/kg) 编号 中文名 母离子 子离子 检出限 (mg/kg) 108 虫螨畏 241.0 209.0 125.0 0.1 130 稻丰散 321.0 275.0 247.0 0.005 109 甲胺磷 142.0 94.0 79.0 0.005 131 伏杀硫磷 368.0 322.0 182.0 0.05 110 杀扑磷 303.0 145.0 85.0 0.05 132 亚胺硫磷 318.0 160.0 133.0 0.05 111 灭多威 1163.1 106.0 88.0 0.005 133 磷胺 300.1 227.0 174.1 0.005 112 溴谷隆 259.0 169.9 148.1 0.005 134 辛硫磷 299.1 153.1 129.0 0.05 113 速灭威 166.0 109.1 94.0 0.05 135 啶氧菌酯 368. 205.1 145.1 0.005 114 甲氧隆 229.1 156.2 192.1 0.005 136 增效醚 356.2 1177.1 1119.1 0.005 115 速灭磷 225.1 193.0 127.0 0.005 137 抗蚜威 1239. 182.1 137.1 0.05 116 庚酰草胺 240.1 85.0 92.8 0.005 138 嘧啶磷 334.1 306.1 198.1 0.005 117 绿谷隆 215.1 148.1 126.0 0.005 139 丙草胺 312.0 252.1 132.1 0.005 118 灭草隆 199.1 72.0 126.0 0.005 140 咪鲜胺 376.0 308.0 70.0 0.005 119 腈菌唑 289.1 125.0 70.0 0.005 141 丙溴磷 372.9 344.9 302.9 0.005 120 二溴磷 378.8 127.0 109.0 0.005 142 猛杀威 208.1 109.0 151.0 0.005 121 萘乙酰胺 1186.1 141.1 115.1 0.005 143 扑灭通 226.1 184.1 142.3 0.005 122 草不隆 275.1 114.0 160.0 0.005 144 毒草胺 212. 170.0 94.1 0.005 123 烯啶虫胺 271.1 225.0 189.1 0.005 145 敌稗 218.1 162.1 127.1 0.005 124 氟草敏 304.0 284.0 160.0 0.005 146 炔螨特 368.2 231.2 175.1 0.005 125 氟苯嘧啶 醇 315.1 252.1 243.0 0.005 147 丙环唑 342. 205.0 159.0 0.05 126 氧乐果 214.0 183.0 155.0 0.05 148 残杀威 210.1 168.1 111.0 0.005 127 解草腈 233.2 146.9 189.1 0.05 149 苄草丹 1252. 128.1 91.1 0.005 128 165.0 257.0 图1150种农药MRM图谱 (1.0ng/ml) 线性范围与定量限 本方法采取基质匹配标准曲线内标定量法。150种农药在浓度0.2-100ng/mL范围内线性相关，且线性相关系数(R2)均大于0.99。 在S/N>3和S/N>10的信噪比下，测得150种农药在供试品中检出限和定量限完全能够满足我国标准方法中检出限和定量限的要求。图1是浓度为1ng/ml的150种农药色谱图。 加标回收率和精密度 在空白供试品中分别加入混合对照品(5ug/kg)， 各3份。150种农药在空白基质的加标回收率均在70%-120%之间。 取对照品溶液注入液相色谱质谱仪，连续平行测定6次，计算峰面积RSD。所得150种农药的RSD范围为1-10%之间。 结果与讨论 本文依据2341《农药残留测定法》建立了高抗污染能力、高灵敏度的超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法测定中药材、饮片及制剂中150种农药残留量的分析方法。方法灵敏度、精密度和准确度均满足国内标准要求。 本方案选择通则中150种典型农药，采用谱育科技EXPEC-5210三重四极杆串联质谱仪，参照 《农药残留测定法》征求意见稿中液相色谱质谱联用仪测定农残的色谱条件、仪器参数和农药推 荐离子对，以及依照通则的前处理方法，建立了中药材中150种新增典型农药残留量的测定方法。 本方法重复性好，灵敏度高，完全满足2020版 《中国药典》对药材、饮片及制剂中部分农药残留量的测定要求。