复方鱼腥草合剂中黄芩苷含量测定检测方案(液相色谱仪)

SSL-CA19-153Excellence in Science Excellence in ScienceLC-186 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区宜州路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline： 021-34193996Building B2，No.180 Yizhou Road， Shanghai Nexera LC-40 智能自动化启动功能在快速测定复方鱼腥草合剂中黄芩苷含量中的应用 LC-186 摘要：本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱仪，建立了快速测定复方鱼腥草合剂中黄芩苷含量的方法。数据采集时利用智能自动化启动方式对目标物进行快速测定，取得了良好的精密度。连续6针进样，黄芩苷的保留时间和峰面积的 RSD%分别为0.10%和0.03%。实验结果表明，该方法能快速准确地测定复方鱼腥草合剂中黄芩苷含量，智能自动启动使用 Flow Pilot 功能能够实现快速样品分析中良好的仪器精密度；同时，与SPD-M20A测定结果相比，SPD-M40的三重温控技术使检测结果体现出更佳、更稳定的基线及出色的响应强度。 关键词： Nexera LC-40 高效液相色谱仪自动启动 Flow Pilot 复方鱼腥草合剂黄芩苷 复方鱼腥草合剂为黄棕色至棕色液体，主要处方为鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘和金银花，清热解毒，用于外感风热引起的咽喉疼痛；急性咽炎、扁桃腺炎有风热证候者。其含量测定参照《中国药典》2015年版中规定，使用高效液相色谱法对其有效成分黄芩苷含量进行测定，本品每1mL含黄芩苷 (C21H18011)计，不得少于0.45 mg； 理论塔板数按黄芩苷峰计算 应不低于2000。 本实验使用 Nexera LC-40 夜效液相色谱仪，采用Nexera LC-40 独有的 Flow Pilot 功能智能自动启动，建立了快速测定复方鱼腥草合剂中黄芩苷含量的方法，且黄芩苷对照品连续测定6次，得到了良好的仪器精密度数据。 I实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40 液相色谱仪，包括 SCL-40系统控制器， DGU-405脱气机，LC-40B X3输液泵，SIL-40C X3自动进样器， CTO-40S 柱温箱， SPD-M40检测器， LabSolutions Ver. 5.97 色谱工作站。 图1岛津Nexera LC-40 高效液相色谱仪 1.2分析条件 色谱柱： Shim-Pack GIST (3.0mmI.D.×75 mm L.， 2 um) (P/N227-3002-03，岛津实验器材(上海)有限公司) 流动相： A-0.6%磷酸溶液；B-甲醇 流 速： 1mL/min 柱 温： 40°C 检测波长：：280nm 进样体积： 5pL 洗脱方式：等度洗脱，A相：B相=58：42 (v：v) |样品前处理 参照《国家食品药品监督管理局国家药品标准》WS-10821 (ZD-0821)-2002-2012Z中复方鱼腥草合计测定方法。 对照品溶液制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含20 ug的溶液，即得。 供试品溶液制备：精密量取本品2mL， 置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 结果与讨论 3.1标准溶液色谱图 按照1.2中分析条件，将2中配制的对照品溶液上机分析，黄芩苷色谱图如图2所示。测得理论塔板数为2954，满足《中国药典》中规定的理论塔板数按黄芩苷峰计不低于2000的要求。 mAU 图2黄芩苷对照品溶液色谱图 3.2自动启动功能及 Flow Pilot 功能的应用 采用智能自动启动功能，只需预先设定好启动程序，仪器将根据指令进行排气、流动相置换、预热以及系统平衡，然后根据批处理表设定进行数据采集。同时在批处理采集中，自动执行在线系统适应性检查。 行在线系统适应性检查。 图3自动启动运行过程 启动时，设置 Flow Pilot 功能缓流速缓慢增加到设定流速(假设总流速为1mL/min，设定流量到达时间为2 min；那么流速在1 min 内将从 0 mL 上升0.5mL——-设定总流速的一半，然后等待柱温稳定，稳定后，流速在1-2 min 由 0.5mL上升到1mL——设定的总流速)，而非即时到达，详见图4。这样可以避免柱压在短时间内快速上升，从而起到保护色谱柱，延长色谱柱使用寿命的目的。 图4使用 Flow Pilot功能流速到达过程 3.3在线系统适应性结果 将配制得到的对照品溶液连续进样6次，通过批处理采集设定执行行线系统适应性考察，考察保留时间及峰面积RSD%，设定要求保留时间 RSD%小于1%，峰面积 RSD%小于2%。6次数据采集完成后，自动获得系统适应性评价报告，综合评价为 Pass. 图5在线系统适应性评价结果 黄芩苷的保留时间和峰面积的RSD%分别为0.09%和0.03%，仪器精密度良好。详见图6和表2。 图6黄芩苷对照品溶液6针重复性色谱图 表2黄芩苷对照品溶液重复性结果 保留时间 (min) 峰面积 1 3.008 381，096 2 3.010 381，016 3 3.012 381，370 4 3.014 381，204 5 3.020 381，165 6 3.012 381，227 平均值 3.012 381，180 RSD (%) 0.10 0.03 3.4.样品测定 将某厂家生产的复方鱼腥草合剂作为供试品溶液，上机分析。色谱图如图7所示。连续测定6次，黄黄苷的保留时间和峰面积的 RSD%分别为 0.13%和0.11%，仪器精密度良好。单点外标法定量，计算得到每1mL样品中，含黄芩苷1.257 mg。所测定的复方鱼腥草合剂产品符合国家药品质量标准。 图7黄芩苷供试品溶液色谱图 3.5 SPD-M20A 与 SPD-M40 测定比较 将黄芩苷对照品分别使用 SPD-M20A 和 SPD-M40进行测定，分析条件、色谱柱、样品品度(20ug/mL)与进样量完全一致，得到比对图谱如图8所示。 图8黄芩苷对照品不同检测器测定色谱图比较 SPD-M40 采用独有的三重温控技术，不仅流通池控温，且对光源室和分光计单元光路系统进行温控，有效地保证了基线的稳定性，详见图9。从比对测定得到的数据可以看出， SPD-M40 的基线噪音低于 SPD-M20A，且目标物的响应强度明显高于 SPD-M20A 测定结果，详见表3。 图9 SPD-M40 全新的三重温控技术 表3黄芩苷分析参数对比 (SPD-M40、SPD-M20A) 峰面积 峰高 噪音 S/N SPD-M20A 255716 29172 38.13 765.01 SPD-M40 382880 44562 21.06 2116.01 ■结论 本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱仪，建立了快速测定复方鱼腥草合剂中有效成分黄芩苷含量的方法。在数据采集时采用了仪器智能自动启动的方式(自动排气，自动流速Flow Pilot 功能、柱温、方法平衡)，使用快速液相方法对数据进行采集，同时进行在线系统适用性评价。实验表明， Nexera LC-40 在智能自动启动的条件下使用快速液相条件分析，能自动达到采集方法要求的平衡状态，且在线系统适用性评价综合结果显示仪器精密度良好，黄芩苷对照品的保留时间和峰面积的RSD%分别为0.10%和0.03%。使用此方法对某厂家生产的复方鱼腥草合剂进行分析，每1mL样品中，黄芩苷计为1.257 mg。所测定的产品符合国家药品质量标准，该方法能快速准确地测定复方鱼腥草合剂中黄芩苷含量。 本文中采用了岛津 Nexera LC-40 的 Flow Pilot全新功能，使仪器在启动的过程中，避免由于泵启动快速达到设定流速而造成的柱压骤升(流速按设定程序逐步稳定上升)，从而起到保护色谱柱，延长色谱柱使用寿命的目的。另外，全新的 SPD-M40 检测器采用独有的三重温控功能，表现出了优异的基线噪音与稳定性，同时具备良好的响应强度；适合有高灵敏度和高稳定性检测的需要。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 本文采用岛津Nexera LC-40高效液相色谱仪，建立了快速测定复方鱼腥草合剂中黄芩苷含量的方法。数据采集时利用智能自动化启动方式对目标物进行快速测定，取得了良好的精密度。连续6针进样，黄芩苷的保留时间和峰面积的RSD%分别为0.10%和0.03%。实验结果表明，该方法能快速准确地测定复方鱼腥草合剂中黄芩苷含量，智能自动启动使用Flow Pilot功能能够实现快速样品分析中良好的仪器精密度；同时，与SPD-M20A测定结果相比，SPD-M40的三重温控技术使检测结果体现出更佳、更稳定的基线及出色的响应强度。