中药饮片中黄曲霉毒素检测方案(真菌毒素测定)

悟空仪器WOOKING ALC10 黄曲霉毒素测定仪对中药饮片中黄曲霉毒素的测定应用报告 引用标准中国药典2015版 1.摘要 黄曲霉毒素(aflatoxin， AFT)作为已发现的理化性质最稳定的真菌毒素，具有极强致癌性、致突变性、致畸性，某些中药在种植、储存等过程中易产生黄曲霉毒素，对人体具有毒性，所以对其进行及时、快速、高效地检测和有效分离分析的尤为重要。 目前，国内外尚无特定检测黄曲霉毒素的便捷、高效、专用仪器。基层实验室一般通过液相色谱仪配备柱后光化学衍生装置和通用型荧光检测器来进行黄曲霉毒素的检测，对操作人员的技能要求非常高，仪器的总成本在30万元以上，经济负担严重。对此，我们提出了一种基于超高灵敏度荧光检测器技术的黄曲霉毒素检测专用分析仪 ALC10， 该仪器的推出将填补国内特定检测黄曲霉毒素的技术空白，且检测运行成本低廉，推广应用潜力大。 ALC10黄曲霉毒素测定仪是悟空仪器自主研发的一套集成了液相色谱系统、柱后光化学衍生系统、固定光路的荧光检测模块的系统。在检出限、检测线性等指标均满足国家标准的前提下，同时可以一键式操作即可获得检测结果，大大降低了检测过程对仪器操作人员的技能要求，与传统液相加荧光检测器的方法相比，为企业节约大量的仪器测试、人力成本和时间成本。 本文参考2015版中国药典进行测试。 2.测试条件 2.1仪器： ALC10黄曲霉毒素测定仪； 2.2色谱柱： C18， 5um， 250×4.6mm； 2.3柱温：30℃； 2.4进样体积：5uL， 10pL， 15pL， 20uL， 25pL； 2.5流动相：甲醇：乙腈：水= 40：18：42； 2.6黄曲霉毒素混合标准品来源： Sigma-aldrich；(AFT B1、AFT B2、AFT G1、AFT G2标示浓度分别为1.00pg/mL、0.30ug/mL、0.99pg/mL、0.30ug/mL)。 3. 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合标准品溶液 0.5mL， 置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密密取贮备溶液1mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释 至刻度，即得。(AFT B1、AFT B2、AFT G1、AFT G2 浓度分别为2.00ng/mL、0.60ng/mL、1.98ng/mL、0.60ng/mL) 4.测试过程 分别精密吸取上述混合对照品溶液 5uL、10pL、15pL、20pL、25pL，注入ALC10 黄曲霉毒素测定仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。 5.测试结果 5.1 线性结果 各进样体积混合对照溶液测试结果 进样体积(uL) 5 10 15 20 25 线性方程 相关系数 峰面积counts.s AFT G2 69015.884 138311.662 201998.938 271889.319 337421.908 Y=13407.79406*X+2610.62813 0.99991733 AFT G1 111448.732 226348.770 329675.723 452788.844 565056.374 Y=22673.10719*X-3032.92031 0.99972772 AFTB2 82136.507 164924.851 245297.528 327812.866 404996.465 Y=16172.15906*X+2451.25938 0.99993278 AFTB1 132904.371 263063.127 385895.626 498456.342 621364.656 Y=24246.27688*X+16642.67813 0.99971774 进样体积 ((uL) 5 10 15 20 25 平均 RSD% 保留时间min AFTG2 5.868 5.878 5.887 5.883 5.873 5.8778 0.129233 AFT G1 6.427 6.437 6.445 6.440 6.427 6.4352 0.124510 AFT B2 7.363 7.378 7.383 7.377 7.358 7.3718 0.145281 AFT B1 8.170 8.188 8.195 8.183 8.160 8.1792 0.172341 图 1.各进样体积混合对照溶液叠加图 5.2 最低检出限结果 进样体积 5pL 混合对照品溶液结果 目标物 峰高(counts)(P-P噪声：159.030 counts) 最低检出限(ng/mL) AFT G2 6810.188 3×159.030×2/6810.188=0.140 AFT G1 10429.008 3×159.030×0.6/10429.008=0.027 AFTB2 7272.478 3×159.030×1.98/7272.478=0.130 AFT B1 10692.942 3×159.030×0.6/10692.942=0.027 图2.进样体积 5uL 混合对照品溶液色谱图 5.3 系统适应性结果 进样体积25pL混合对照品溶液结果表 峰序号 保留时间min 峰面积counts.s 峰高 counts 柱效 分离度 对称/拖尾 1 5.873 337421.908 33201.673 7579.871 1.036 2 6.427 565056.374 52873.696 8263.927 2.003 1.026 3 7.358 404996.465 35274.626 9396.569 3.178 1.007 4 8.160 621364.656 50252.938 10057.929 2.549 1.005 图3.进样体积 25pL 混合对照品溶液色谱图 6.结论 应用ALC10黄曲霉毒素测定仪可以高效、快捷、准确的完成药典中规定的黄曲霉毒素测定实验。线性，及保留时间重现性良好；系统充分满足方法对分离度、对称拖尾等系统适应性的要求。 1. 摘要黄曲霉毒素（aflatoxin，AFT）作为已发现的理化性质最稳定的真菌毒素,具有极强致癌性、致突变性、致畸性，某些中药在种植、储存等过程中易产生黄曲霉毒素，对人体具有毒性，所以对其进行及时、快速、高效地检测和有效分离分析的尤为重要。目前，国内外尚无特定检测黄曲霉毒素的便捷、高效、专用仪器。基层实验室一般通过液相色谱仪配备柱后光化学衍生装置和通用型荧光检测器来进行黄曲霉毒素的检测，对操作人员的技能要求非常高，仪器的总成本在30万元以上，经济负担严重。对此，我们提出了一种基于超高灵敏度荧光检测器技术的黄曲霉毒素检测专用分析仪ALC10，该仪器的推出将填补国内特定检测黄曲霉毒素的技术空白，且检测运行成本低廉，推广应用潜力大。ALC10黄曲霉毒素测定仪是悟空仪器自主研发的一套集成了液相色谱系统、柱后光化学衍生系统、固定光路的荧光检测模块的系统。在检出限、检测线性等指标均满足国家标准的前提下，同时可以一键式操作即可获得检测结果，大大降低了检测过程对仪器操作人员的技能要求，与传统液相加荧光检测器的方法相比，为企业节约大量的仪器测试、人力成本和时间成本。本文参考2015版中国药典进行测试。2. 测试条件2.1 仪器：ALC10黄曲霉毒素测定仪；2.2 色谱柱：C18，5μm，250×4.6mm；2.3 柱温：30℃；2.4 进样体积：5μL，10μL，15μL，20μL，25μL；2.5 流动相：甲醇:乙腈:水= 40:18:42；2.6 黄曲霉毒素混合标准品来源：Sigma-aldrich；（AFT B1、AFT B2、AFT G1、AFT G2标示浓度分别为1.00μg/mL、0.30μg/mL、0.99μg/mL、0.30μg/mL）。