药品中基因毒性物质检测方案(气质联用仪)

SSL-CA14-753Excellence in Science Excellence in ScienceGCMS-268 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区宜州路180号华鑫天地二期C801栋咨询电话：021-34193996Hotline： 021-34193996Building C801， No.180 Yizhou Road， Shanghai GCMS法测定药品中3种痕量丁基磺酸酯类基因毒性物质 GCMS-268 摘要：利用岛津GCMS-QP2020气质联用仪，建立了药品中3种痕量丁基磺酸酯类基因毒性物质的分析方法。结果表明， 在5~1000 ug/L 浓度范围内各组分线性良好，线性相关系数R均在0.9995以上，方法检出限均小于0.5 ug/L。对10、50、100 pg/L的3种丁基磺酸酯类混合标准溶液进行重复实验，6次平行进样，峰面积的相对标准偏差在0.37~2.53%。加标浓度为 10 ug/g时，平行试验3次，各组分的回收率在93.7~96.5%之间。该方法前处理简单、分析速度快、灵敏度高，完全满足药品中痕量基因毒物检测方面的需求。 关键词：气相色谱质谱法丁基磺酸酯基因毒性 随着人们对健康的高度关注，用药安全成为大家的共识，其中药品中的基因毒物成为近年来研究的热点。磺酸酯类物质可与 DNA发生烷基化反应，从而可能引发癌症，因此控制药物中该类基因毒性杂质的含量非常重要，欧洲医药评价署(EMEA) 发布了关于基因毒性杂质的最大摄入量为1.5 ug/d。 目前因基因毒性物质的概念广泛，所含种类繁多，为了防止药品中潜在基因毒性物质的风险， EMEA首先实施详细指南控制杂质限量，美国食品和药物管理局 实验部分 1.1仪器 气相色谱质谱联用仪： GCMS-QP2020 1.2分析条件 色谱柱： Intercap1701 MS(30m×0.25mm× 载气控制方式：恒线速度 线速度：39.7 cm/sec (FDA)随后也颁布指南草案，国际药品注册协会会议(ICH) 也对基因毒性杂质做出限量规定。 丁基磺酸酯类物质属于基因毒性物质的一类，在某些药品的生产过程中会成为副产物。如何有效测定并控制在成品中的含量，是药企质量控制的关键。本文建立了液体直接进样法分析药物中三种丁基磺酸酯的气相色谱质谱法，该方法快速、有效，灵敏度能满足对痕量基因毒物分析的需求。· 进样方式：不分流 进样时间：1min 离子源温度：230℃(EI) 接口温度：250℃ 采集模式： SIM法(采集参数见表1) 表13种丁基磺酸酯类化合物的SIM参数 No. 组分 保留时间(min) 定量离子 定性离子 1 丁基磺酸甲酯 8.383 56 97、123 2 丁基磺酸乙酯 8.976 57 83、111 3 丁基磺酸异丙酯 9.100 57 165、139 1.3样品前处理 称取药药0.05g于离心管中，准确加入2mL乙酸乙酯，充分震荡均匀，超声萃取10 min， 过 0.22 um 有机滤膜后直接上 GCMS 分析。 结果与讨论 2.1标准溶液色谱图 混标溶液的 TIC 图谱见图 1， SIM 模式 MC 图 (50 ug/L)如图2所示。 图1三种丁基磺酸酯的TIC图(100 ug/L) 图2.33种磺酸酯标准品的MC图(50pg/L) 2.2标准曲线 各取0.05g的3种丁基磺酸酯单标加入到50 mL的容量瓶中，用乙酸乙酯定容得到1000 ug/mL 的标准储备液。取以上标准储备液逐级稀释至5、10、20、50、100、200、500、1000 ug/L。 利用 SIM 模式采集上述标准溶液。以浓度作为横坐标，峰面积作为纵坐标，绘制3种丁基磺酸酯的外标曲线如图3所示。 丁基磺酸异丙酯 图33种磺酸酯的标准曲线 根据5 ug/L标准溶液数据，计算仪器检出限(3倍信噪比计算)，相关信息如表2所示。 表23种丁基磺酸酯的标准曲线相关系数、检出限 No. 组分名称 相关系数 检出限(ug/L) 1 丁基磺酸甲酯 0.9999 0.50 2 丁基磺酸乙酯 0.9998 0.34 8 T基磺酸异丙酯 0.9997 0.27 2.3重复性结果 对10、50、200 ug/L 的标准样品，重复进样6次，各组分峰面积 RSD% 见上表3. 表33种磺酸酯的重复性结果 No. 组分名称 RSD%(10 pg/L) RSD%(50 ug/L) RSD%(200pg/L) 丁基磺酸甲酯 1.71 0.37 0.54 2 丁基磺酸乙酯 0.74 0.60 0.74 8 丁基磺酸异丙酯 2.63 0.94 0.53 2.4回收率测定 选取市售空白药品，称取该药品0.05 g， 加入50 uL 的10 ug/mL的标准溶液，制得含3种丁基磺酸酯10.0ug/g的加标样品，平行处理3份，样品测定结果以及加标回收率结果见表3. 表4样品测试结果及加标回收率 No. 化合物名称 加标浓度10.0ug/g 平均回收率(%) RSD% 1 丁基磺酸甲酯 93.7 2.36 2 丁基酸乙酯 94.8 3.14 8 丁基磺酸异丙酯 96.5 3.33 2.5实际样品测定 取市售代表性药品称取0.05 g，按照1.3的前处理方式进行处理，其样品色谱图见图4所示，测定结果见表4所示。 表5样品测定结果 图4实际样品测定TIC图 结论 本文利用岛津 GCMS-QP2020气质联用仪对药品中的3种丁基磺酸酯类基因毒性进行分析。在5~1000 ug/L浓度范围内标准曲线线性良好，方法检出限检小于0.50 ug/L，加标回收率在93.7~96.5%之间。该方法准确、稳定性好、灵敏度高，满足检测需求。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center 药品安全性潜在风险研究；丁基磺酸酯类物质属于基因毒性物质的一类，在某些药品的生产过程中会成为副产物。如何有效测定并控制在成品中的含量，是药企质量控制的关键。本文建立了液体直接进样法分析药物中三种丁基磺酸酯的气相色谱质谱法，该方法快速、有效，灵敏度能满足对痕量基因毒物分析的需求