药品中3,4-二氯苯胺检测方案(气质联用仪)

SSL-CA14-607Excellence in Science Excellence in ScienceGCMSMS-128上海市徐汇区宜州路180号华鑫天地地期C801栋 咨询电话：021-34193996 http：//www.shimadzu.com.cn GC-MS/MS 测定药品中基因毒性杂质3，4-二氯苯胺 GCMSMS-128 摘要：利用岛津 GCMS-TQ8050三重四极杆气质联用仪，建立了药品中基因毒性杂质3，4-二氯苯胺的分析方法。结果表明，在5~100 ug/L 浓度范围内3，4-二氯苯胺线性良好，相关系数为 0.9995。对 10 ug/L 的标准溶液连续6针进样，峰面积的相对标准偏差为1.52%。加标浓度2 ug/g时，平行试验5次，平均回收率为 86.8%。该方法前处理简单、重复性好，可为药品中3，4-二氯苯胺的检测提供参考。 关键词：三重四极杆气质联用仪药品3，4-二氯苯胺 基因毒性杂质是指化合物本身直接或间接损伤细胞DNA，产生致突变和致癌的物质。基因毒性物质的特点是在很低的浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，进而导致基因突变并可能促使肿瘤发生。因其毒性较强，对用药的安全性产生了强烈的威胁。 世界各国的法规机构如EMA、ICH、FDA 等都对基因毒性杂质做了明确的规定和要求。目前基因毒性列 实验部分 1.1仪器 气相色谱质谱联用仪： GCMS-TQ8050 1.2分析条件 色谱柱： SH-Rxi-5Sil MS， 30 mx0.25 mm 进样口温度：220℃ 表中有1574种致癌物质。药品制备工艺中往往会存在溶剂残留问题。而这些残留的溶剂中有许多是基因毒性杂质，如3，4-二氯苯胺、1，1，1-三氯乙烷等。 本实验采用岛津 GCMS-TQ8050三重四极杆气质联用仪，建立了测定药品基因毒性杂质3，4-二氯苯胺的分析方法。该方法处理简单、灵敏度高。可以为药品中3，4-二氯苯胺的检测提供参考。 进样量：1pL 载气：氦气 载气控制方式：恒线速度(36.8cm/sec) 离子源温度：230℃ 色谱质谱接口温度：300℃ 检测器电压：调谐电压+0.4Kv 采集模式：MRM(采集参数见表1) 进样方式：不分流(1 min) 1.3样品制备 将药品研磨制成粉末。准确称取0.02g置于试管中，准确加入2mL甲醇/乙酸乙酯(1：1)溶液，旋涡混合2min， 超声萃取 15 min。将该处理液过0.22 um有机滤膜，上机分析。 结果与讨论 2.1标准样品色谱图 表113，4-二氯苯胺MRM参数 峰号 组分名称 英文名称 CAS 号 定量离子 定性离子 定性离子 1 3，4-二氯苯胺 3，4-Dichloroaniline 95-76-1 161.00>99.00(21) 161.00>90.10(18) 161.00>126.00(12) 2.2标准曲线 用甲醇/乙酸乙酯(1：1)溶液，分别配制系列浓度为5、10、20、50、100 ug/L 的3，4-二氯苯胺标准溶液，绘制标准曲线，检出限以3倍的峰峰比计算。峰面积重复性以10 ug/L的标准样品连续进样6次，计算其相对标准偏差(RSD)。3，4-二氯苯胺标准曲线和浓度为 10 ug/L 的3，4-二氯苯胺MRM 质量色谱图如图2所示。3，4-二氯苯胺标准曲线相关系数、最低检出限(LOD)及峰面积的 RSD 值见表2。 图23，4-二氯苯胺的标准曲线及质量色谱图 表23，4-二氯苯胺标准曲线相关系数、最低低出限及峰面积的RSD(%) No. 组分名称 相关系数 检出限(ug/L) RSD(%) 1 3，4-二氯苯胺 0.9995 0.01 1.52 2.3回收率及样品测试 在药品中分别加入3，4-二氯苯胺标准溶液，添加浓度为2 ug/g， 各平行5份。按上述前处理进行加标回收率试验。样品加标回收率结果见表3。 分别对市售的药品进行分析，均未检测出3，4-二氯苯胺。 表33加标回收率结果 No. 组分名称 加标浓度2 ug/g 平均回收率(%) RSD(%) 3，4-二氯苯胺 86.8 2.84 结论 利用岛津公司GCMS-TQ8050三重四极杆气质联用仪建立了药品中基因毒性杂质3，4-二氯苯胺的分析方法。在5~100 ug/L浓度范围内，3，4-二氯苯胺线性良好，相关系数为 0.9995。对浓度为 10 ug/L 的 3，4-二氯苯胺标准溶液，连续6针进样，峰面积相对标准偏差为1.52%。在空白样品中添加3，4-二氯苯胺标准溶液，浓度为2 ug/g，平行试验5次，平均回收率为 86.8%。实验表明，串联质谱的检测方法能够有效地消除基质干扰，减少假阳性的检出率，同时能提高分析的选择性和检测灵敏度。该方法可为药品药3，4-二氯苯胺的检测提供参考。 ( 岛津全球应用技术开发支持中心 ) 世界各国的法规机构如EMA、ICH、FDA等都对基因毒性杂质做了明确的规定和要求。目前基因毒性列表中有1574种致癌物质。药品制备工艺中往往会存在溶剂残留问题。而这些残留的溶剂中有许多是基因毒性杂质。由于药品基质复杂，干扰大，因此采用GC-MS/MS中MRM（多反应监测）方式可以有效排除基质干扰，提高仪器的选择性和灵敏度。方法平均回收率为86.8%。能够有效的监控药品中 3,4-二氯苯胺的残留量。