人血浆中THC 和代谢物检测方案(液相色谱仪)

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检测样品: 司法鉴定
检测项目: THC 和代谢物
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发布时间: 2018-08-24
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安捷伦科技(中国)有限公司

钻石23年

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复杂生物样品的高效提取、净化和分析对法医学实验室极为有益。磷脂 (PPL) 已被确定为血浆的 LC-MS/MS 分析中引起基质效应的主要来源。本应用简报介绍了血浆样品前处理以及血浆中四氢大麻酚(Δ9-THC 或 THC)及其主要代谢物 11-羟基-Δ9-THC (THC-OH) 和 11-nor-9-羧基-Δ9-THC (THC-COOH) 的 LC-MS/MS 分析。样品前处理时采用孔内蛋白质沉淀法 (PPT) 和 Agilent Captiva EMR-Lipid 1 mL 过滤柱直通净化去除 PPL。Captiva EMR-Lipid 过滤柱能够得到更洁净的洗脱液,去除血浆基质中 99% 以上不需要的 PPL,目标分析物的回收率高于 90%,RSD 小于 10%。对 1 ng/mL THC、THC-OH 和 THC-COOH 的分析得到了理想的峰形,并获得了良好的信噪比 (S/N)。在 0.5–100 ng/mL 范围内获得的响应呈线性,R2 高于 0.99。血浆中的定量限 (LOQ) 为 1.0 ng/g 或更低。在 3 天的实验过程中,得到的结果一致。

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Joan Stevens 和 Limian Zhao 安捷伦科技有限公司 应用简报 Agilent法医学分析Trusted Answers 使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 和LC-MS/MS 对人血浆中的 THC和代谢物进行高效定量分析 复杂生物样品的高效提取、净化和分析对法医学实验室极为有益。磷脂(PPL)已被确定为血浆的 LC-MS/MS分析中引起基质效应的主要来源。本应用简报介绍了血浆样品前处理以及血浆中四氢大麻酚(A-THC或 THC) 及其主要代谢物11-羟基-△°-THC(THC-OH) 和 11-nor-9-羧基-^°-THC (THC-COOH) 的 LC-MS/MS 分析。样品前处理时采用孔内蛋白质沉淀法 (PPT) 和 Agilent Captiva EMR-Lipid 1 mL 过滤柱直通净化去除 PPL。 Captiva EMR-Lipid 过滤柱能够得到更洁净的洗脱液,去除血浆基质中99%以上不需要的 PPL, 目标分析物的回收率高于90%, RSD 小于 10%。对1 ng/mL THC、THC-OH 和 THC-COOH 的分析得到了理想的峰形,并获得了良好的信噪比 (S/N)。在0.5-100 ng/mL 范围内获得的响应呈线性,R²高于0.99。血浆中的定量限 (LOQ) 为 1.0 ng/g 或更低。在3天的实验过程中,得到的结果一致。 在法医学实验室的日常样品分析中, LC-MS/MS 分析之前高效的样品前处理是一个重要考虑因素。样品前处理可用于减少系统污染并改善数据完整性、方法选择性和分析灵敏度。血浆中存在的两种主要干扰物质为蛋白质和磷脂(PPL)。 PPL 已被确定为LC-MS/MS 生物分析中引起基质效应的主要来源,因为在电喷雾电离(ESI) 期间所形成的液滴表面上会发生竞争电离。蛋白质易于通过简单的样品前处理方法去(如蛋白质沉淀(PPT))去除,但PPL则难以得到有效去除。 法医学实验室中常用的样品前处理技术包括 PPT、固相萃取(SPE)、液液萃取 (LLE) 和介质液液萃取 (SLE)。每种技术在速度、成本和生成数据的质量方面各有优劣。例如, PPT、LLE和 SLE 无法去除 PPL, 而 SPE 执行起来更耗时且更复杂。然而,在这些技术中, PPT 得到了最广泛的认可。PPT以规定的比例向生物样品中加入有有沉淀溶剂(如乙腈(ACN)或甲醇(MeOH)),可轻松去除蛋白质。随着蛋白质的变性,它们形成的沉淀可通过过滤或离心得以去除。PPL 无法通过 PPT去除,因为这种物质溶于有机沉淀溶剂中,在过滤或离心后仍保留在样品中。 大麻类物质是支持案件调查的法医学实验室中最常见的目标分析物之一。快速、准确地确认并定量生物样品中的A°-THC(THC) 及其主要代谢物11-羟基-A°-THC (THC-0H) 和 11-nor-9-A-羧基-THC (THC-COOH) 至关重要。然而, THC 及其代谢物在样品前处理过程中容易发生非特异性结合。 迫切需要一种样品前处理方法,在减少样品前处理步骤(包括离线 PPT、离心、转移和稀释)的同时实现高效蛋白质和PPL去除,并使目标分析物获得令人满意的回收率。本应用简报介绍了一种在 PPT 之后使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 去除PPL的方法,该方法通过简单的直通净化步骤即可完成,不会引起分析物损失。所得的提取物更洁净,减少了潜在的离子抑制以及色谱柱和质谱仪污染。 依次使用孔内 PPT 和 Captiva EMR-Lipid 1 mL 过滤柱去除PPL,对血浆中的 THC、THC-OH 和 THC-COOH 进行萃取。随后使用 Agilent 6490 三重四极杆液质联用系统进行定量分析。对 EMR-Lipid 过滤柱净化去除 PPL 的效率进行了评估。还测定了 THC 及其代谢物的日间(3日)准确度、精密度和回收率。 有关全血样品的分析,请参见安捷伦应用简报使用 CaptivaEMR-Lipid 和 LC-MS/MS对全血中的 THC 及其代谢物进行高效定量分析。 ( 试剂与化学品 ) ( △°-THC、11-羟基-°-THC、11-nor-9-△°-羧基-THC、 A °-THC-d3、11-羟基-A°-THC-d3 和11-nor-9-羧基-A°-THC-d9 购 自 S igma-Aldrich (S t Louis, MO, USA)。 LC-MS/MS 级甲酸铵 同样购自 Sigma-Aldrich。所有溶剂均为液相色谱级或更高级 别, 均 购自 Bur d ick and Jackson (Muskegon, MI, U SA)。 ) 溶液 ( 在甲醇中配制浓度为10 pg/mL 的 THC、THC-OH 和 THC-COOH 的混标工作溶液。在甲醇中配制浓度为10 pg/mL的 THC-d3、 THC-0H-d3 和 THC-COOH-d9 的元代内标 (IS)工作 溶液。 ) 校准标样和质量控制样品 ( 在预加标质量控制(QC)样品中加入适当浓度的标准工作溶液,平行配制七份。QC样品为低浓度 QC (LQC)、中等浓度QC (MQC) 和高浓度 QC (HQC),分别对应于血浆中1、 1 0、50 ng/mL 的浓度。在每种浓度的 QC样品中 , 添加浓度为50 ng/mL的气代混标溶液(IS)。 ) ( 在经过 Captiva EMR-Lipid 净化的空白基质中,用 THC及其代谢 物的工作溶液后加标, 其 加标浓度分别对应于血浆中1、10、 50 ng/mL的浓度。还加入一份 5 pL 的 1.0 pg/mL IS 溶液。 ) 基质匹配校准曲线由标准工作溶液制得。对经过 CaptivaEMR-Lipid 净化的空白基质进行后加标,加标浓度对应于提取物中0.5、1、5、10、50、100 ng/mL 的浓度。在每种浓度的校准标样中加入5 pL 1.0 ug/mL IS. 设备与仪器 表1列出了用于执行分析的设备与仪器。 表1.样品前处理和分析所用的设备与仪器 组件 部件号 样品前处理 Agilent Captiva EMR-Lipid, 1 mL过滤柱 5190-1002 Agilent Vac Elut SPS 24多管装置,配备可容纳12个75mm试管的收集架 12234041 Eppendorf 移液管和重复移液器(VWR,NJ,USA) 液相色谱系统 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统 G4204A Agilent ZORBAX超高压快速高分离度 (RRHD) Bonus RP 2.1×50 mm, 1.8 pm 色谱柱 857768-901 Agilent 1290 Infinity 系列柱温箱 G1316C Agilent 1290 Infinity 自动进样器 G4226A Agilent 1290 Infinity 在线过滤器, 0.3 pm 5067-6189 样品瓶内插管, 400pL,玻璃,平底, 去活 5183-2086 MS分析用的样品瓶套装,包括带书写签的2mL棕色螺口样品瓶、蓝色螺口盖和PTFE/硅橡胶隔垫 5190-2280 质谱系统 Agilent 6490 三重四极杆液质联用系统 Agilent MassHunter 软件 LC-MS/MS分析 采用 Agilent 1290 Infinity 液相色谱与 Agilent 6490 三重四极杆 质谱的联用系统。表2和表3列出了液相色谱和质谱条件。将 EMR-Lipid 过滤柱净化后的样品洗脱液直接进样分析,无需进一步稀释。在进样之前使用 Agilent 1290 Infinity 自动进样器的在线稀释功能,其中在吸取5uL样品之前吸取 10 pL稀释剂(水),并将整个体积进样至液相色谱系统中。采用在线稀释而非样品瓶中样品稀释,其优势在于样品可100%保留在有机相中。这样避免了分析物发生降解。 表4列出了多反应监测(MRM) 采集参数。为评估 CaptivaEMR-Lipid 对 PPL去除率, 采用表5所示的 MRM 离子对监测11种PPL化合物。 表2.液相色谱条件 参数 值 色谱柱 Agilent ZORBAX 超高压快速高分离度(RRHD) Bonus RP 2.1×50 mm, 1.8 pm 色谱柱 流速 0.5 mL/min 柱温 50°C 自动进样器温度 5°C 进样量 5pL 进样器程序 以默认速度从位置 P2-F1 抽取 10 pL, 以默认速度抽取 5pL样品, 根据方法中的规定清洗针头 流动相 A)5 mM甲酸铵水溶液(含0.1%FA) B)5 mM甲酸铵的甲醇溶液(含0.1%FA) 进样针清洗 1:1:1:1 ACN:MeOH:IPA:H,0(含0.2%FA) 梯度 时间(min) %B 0.0 650.1 65 4.0 95 5.0 95 停止时间 5.10分钟 后运行时间 1.5分钟 表3.质谱条件 参数 值 电离模式 ESI 干燥气温度 120℃ 干燥气流速 20L/min 雾化器压力 50 psi 鞘气温度 325°℃ 毛细管电压 3500V 充电电压 300V Delta电子倍增器电压(EMV) 200 V 极性 正 表 4. THC化合物的 MRM 采集参数 化合物 母离子 定量离子(CE) 定性离子(CE) 保留时间(min) THC-OH 331.23 313.2(12) 193.1(24) 1.70 THC-OH-d3 334.25 316.3(12) 1.70 THC 315.23 193.2(24) 123.0(44) 3.05 THC-d3 318.25 196.1(28) 28 3.04 THC-COOH 345.21 327.3(12) 299.1(20) 2.26 THC-COOH-d9 354.27 336.2 12 2.26 表 5. PPL化合物的 MRM 采集参数 母离子(m/z) 子离子 (m/z) 碰撞能量(eV) 808 184 30 806 184 30 786 184 30 784 184 30 760 184 30 758 184 30 704 184 30 524 184 30 522 184 30 520 184 30 496 184 30 使用 Agilent MassHunter 软件进行仪器控制以及定性和定量数据分析。实验中测定了方法的日间(3日)准确度、精密度和回收率。 样品前处理过程 1. 将500pLACN (含1%甲酸(FA))加入Agilent CaptivaEMR-Lipid 1 mL 过滤柱中 2. 加入100 pL人血浆 3. 在孔内充分混合 4. 抽真空至1.5-3 psi 5. 加入200 pL 的 1:4 H20:ACN 6. 抽真空至整个体积通过过滤柱,然后将压力提高至11-13 psi,使剩余溶剂完全通过过滤柱 7. 在45℃下用氮气吹干,然后复溶于 100 pL MeOH(含0.1%FA)中 8. 将5 pL样品与用于稀释的10 pL水直接进样至 LC系统中进行分析 注:有关全血样品的分析,请参见安捷伦应用简报使用 CaptivaEMR-Lipid 和 LC-MS/MS 对全血中的 THC 及其代谢物进行高效定量分析”。 用 MeOH 进行 PPT所形成的沉淀物比用 ACN 形成的沉淀物更细,因此推荐使用 ACN 最大程度实现 PPT, 并避免在Captiva EMR-Lipid 处理之前发生胶凝。推荐使用1:3至1:5(样品/溶剂)的比例。在加入沉淀溶剂之后加入样品。酸(甲酸)有助于分解蛋白质并减少蛋白质对目标物的结合。 优先使用大口径移液枪头进行主动孔内混合。真空促使液流通过 Captiva EMR-Lipid 过滤柱。推荐使用每3-5秒一滴的受控流速,以实现最佳脂质去除。在样品从过滤柱洗脱后,施加更高的真空度以最大程度提高样品回收率。 高效去除脂质基体 EMR-Lipid 方法简单通用,能够降低基质效应并改善分析物回收率。EMR-Lipid 吸附剂通过体积排阻作用和疏水相互作用选择性捕集脂类(图1)。无支链烃链(脂类)进入吸附剂中,而体积较大的分析物并不进入其中。然后,进入吸附剂中的脂链通过疏水相互作用被捕集。PPL的脂质去除率高于99%,并具有较高的分析物回收率。 体积排阻:无支链烃链(脂类)进入吸附剂中;体积较大的分析物并不进入其中。 吸附剂化学作用:进入吸附剂中的 脂链通过疏水相互作用被捕集。 图1. EMR-Lipid 作用机制:体积排阻和吸附剂化学作用 PPL 是细胞膜的主要成分,大量存在于血浆中。PPL是由磷酸酯和胆碱单元组成的亲水性头部基团以及由长链烷基组成的疏水性尾部构成。 EMR-Lipid 留住具有长碳链的脂肪族化合物,如 PPL、游离脂肪酸和甘油三酯。EMR-Lipid 与具有支链、短碳链或有官能团(如羧酸、磷酸胺、胺、酰胺、羰基或羟基)的化合物不发生相互作用。 尽管图2所示的分析物 THC、THC-OH 和 THC-COOH 包含无支链碳链,但其碳链不够长,无法通过与吸附剂的疏水相互作用被捕集。此外,分析物体积较大的环结构也妨碍了吸附剂对它们的保留。 EMR-Lipid 技术以96孔板或1mL过滤柱形式提供,并包含用于孔内 PPT的溶剂保留滤芯,适用于需要高通量的应用。这一独特的设计最大程度减少了堵塞的发生。 色谱性能 含1 ng/mL THC、THC-OH 和 THC-COOH 的加标血浆的 MRM色谱图(图3)显示了依次使用孔内 PPT 和 EMR-Lipid 过滤柱净化所获得的色谱图。即使在1 ng/mL的浓度下,由于基质效应和干扰的降低,理想峰形为准确积分提供了良好的分离度和信噪比(S/N)。在执行确定损伤的法医学分析时,通常需要对 5 ng/mL 的浓度实现准确检测和定量。 .0H THC-OH 图2.常见的 THC相关分析物结构 PPL去除 PPL 是细胞膜的主要成分,也是引起显著基质效应的主要化合物类别34。甘油磷酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱分别占总血浆PPL 的70%和10%,是基质效应的主要来源。为确定使用Captiva EMR-Lipid 去除血浆中 PPL 的效果,对11种天然存在的 PPL 化合物进行监测。 图4示出99%的PPL从提取的血浆样品中被去除,其中一些可能与目标分析物发生了共洗脱。图4中示出的高丰度 PPL(黑色迹线;仅采用含1%FA 的 ACN 进行 PPT)可能使检测器达到饱和,并可能影响定量分析的质量。此外,高丰度PPL可能随时间推移而污染质谱系统。 图4.采用(红色迹线)和不用(黑色迹线) Agilent Captiva EMR-Lipid 脂质去除产品时,在子离子 m/z 184 处监测到的11种PPL的 MRM 色谱图 定量性能 对 THC 及其代谢物的校准曲线的线性进行了评估。图5表明在测试的六种浓度下 (0.5-100 ng/mL, n=5)观察到良好的线性响应。以0.5-100 ng/mL 浓度范围内的线性,,11/x加权及线性回归拟合,各条曲线的平均决定系数(R)均高于0.99。 图5.校准曲线。A) THC; B)THC-OH; C) THC-COOH。 血浆中的浓度范围为 0.5-100 ng/mL, n=5 分析灵敏度优异,血浆中目标化合物的 LOQ为1.0 ng/g或更低。方法 LOQ 的确定依据是%RSD≤10且 S/N≥10。 以 1、10、50 ng/mL 的标准品浓度加标至血浆中来测定方法重现性,重复测定七次。图6的表中示出 %RSD 介于 1.2至7.6之间,均在可接受范围内。浓度为1、10、50 ng/mL 的THC 及其代谢物 THC-OH 和 THC-COOH 的回收率优异,处于97%至107%的范围内, RSD 小于7.6%(图6)。 CaptivaEMR-Lipid 采用独特的 PPL 去除机制,因此获得了令人满意的回收率。其他技术通常无法区分 PPL 与 THC (LogP = 7.6) 等疏水性化合物。 在3天时间内,1、10、50 ng/mL 浓度下得到的日间方法回收率和精密度始终保持良好,处于98.6%至116.9%的范围内, RSD 小于10%。 m1ng/mL 图6.血浆中的 THC及其代谢物的方法回收率和精密度(%RSD)(第1天) 本应用简报介绍了一种简便而快速的血浆样品前处理工作流程,用于对 THC 及其代谢物进行法医学研究的 LC-MS/MS分析。依次采用孔内 PPT 和 Agilent Captiva EMR-Lipid 1 mL过滤柱净化来提取血浆中的目标分析物。 Captiva EMR-Lipid 能够去除血浆基质中99%以上的PPL,并使目标分析物获得优异的回收率。样品提取物比单独使用 PPT 获得的提取物更洁净,从而减小了基质离子抑制作用,并改善了分析准确度、精密度和重现性。更洁净的提取物还减少了对 LC-MS/MS 系统的污染以及可能由维护带来的停机时间。孔内 PPT 具有减少样品处理和转移的优点。 对 1 ng/mL THC、THC-0H 和 THC-COOH 的分析得到了理想的峰形和良好的 S/N, 该浓度低于确定损伤所需的 5 ng/mL浓度。血浆中处于 0.5-100 ng/mL 范围内的校准曲线呈线性,其中R²高于0.99。获得的三种分析物的 LOQ 为 1.0 ng/g或更低, RSD 小于10%。回收率高达90%或更高。在3天的重复分析过程中,结果保持一致。 Captiva EMR-Lipid 方法可轻松融入现乍工作流程中,无需额外的样品前处理装置或玻璃器皿。在96孔板或1mL过滤柱形式中, Captiva EMR-Lipid 可兼容自动化系统,适用于高通量应用。滤芯设计可轻松高效洗脱样品,不易发生堵塞。 查找当地的安捷伦客户中心: www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线: 800-820-3278,400-820-3278(手机用户) 联系我们: LSCA-China_800@agilent.com 在线询价: www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 用于法医鉴定。 仅限研究使用。不可用于诊断目的。 本文中的信息、说明和指标如有变更,恕不另行通知。 ( ◎安捷伦科技(中国)有限公司,2017 ) ( 参考文献 ) ( 1. Matuszewski, B. K.; Constanzer, M .L.; C havez-Eng, C. M.Strategies for the Assessment o f Matrix Effectin Quantitative Bioanalytical Methods Based on HPL C -MS/MS. Anal. Chem. 2003,75(13),3019-3030 ) ( 2. S tevens,J.; Zhao, L. 使用 Captiva EMR-L i pid 和 LC-MS/MS 对全血中的THC 及其代谢物进行高效定量分析,安捷伦科技公司应用简报,出版号5991-8635ZHCN, 2017 ) ( 3. Little, J. L.; Wempe, M. F;Buchanan, C. M .Liquidchromatography-mass spectrometry/massspectrometry m ethod development for drug metabolismstudies: Examining lipid m a trix ionization effects inplasma. J . Chromatogr. B 2006,833,219 ) ( 4. Ismaiel,O. A.; et al. Monitoring phospholipids forassessment of matrix effects in a liqui d chromatography-tandem mass spectrometry m ethod for hydrocodoneand pseudoephedrine in human plasma. J. Chromatog. B2007,859,84-93 ) ( 5. C hambers,E. ; et a l.Systematic and comprehensivestrategy for reducing matrix effects in LC/MS/MSanalyses. J.Chromatog. B2007,852,22-34 ) ( 6. Zhao, L.; Lucas, D.; Efficiency of B i ological Fluid Ma t rixRemoval Using Agilent Captiva EMR-Lipid Cleanup(使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 净化去除生物体液基质的效率),安捷伦科技公司应用简报,出版号5991-8006EN, 2017 ) 摘要复杂生物样品的高效提取、净化和分析对法医学实验室极为有益。磷脂 (PPL) 已被确定为血浆的 LC-MS/MS 分析中引起基质效应的主要来源。本应用简报介绍了血浆样品前处理以及血浆中四氢大麻酚(Δ9-THC 或 THC)及其主要代谢物 11-羟基-Δ9-THC (THC-OH) 和 11-nor-9-羧基-Δ9-THC (THC-COOH) 的 LC-MS/MS 分析。样品前处理时采用孔内蛋白质沉淀法 (PPT) 和 Agilent Captiva EMR-Lipid 1 mL 过滤柱直通净化去除 PPL。Captiva EMR-Lipid 过滤柱能够得到更洁净的洗脱液,去除血浆基质中 99% 以上不需要的 PPL,目标分析物的回收率高于 90%,RSD 小于 10%。对 1 ng/mL THC、THC-OH 和 THC-COOH 的分析得到了理想的峰形,并获得了良好的信噪比 (S/N)。在 0.5–100 ng/mL 范围内获得的响应呈线性,R2 高于 0.99。血浆中的定量限 (LOQ) 为 1.0 ng/g 或更低。在 3 天的实验过程中,得到的结果一致。前言在法医学实验室的日常样品分析中,LC-MS/MS 分析之前高效的样品前处理是一个重要考虑因素。样品前处理可用于减少系统污染并改善数据完整性、方法选择性和分析灵敏度。血浆中存在的两种主要干扰物质为蛋白质和磷脂 (PPL)。PPL 已被确定为 LC-MS/MS 生物分析中引起基质效应的主要来源,因为在电喷雾电离 (ESI) 期间所形成的液滴表面上会发生竞争电离。蛋白质易于通过简单的样品前处理方法(如蛋白质沉淀(PPT))去除,但 PPL 则难以得到有效去除。法医学实验室中常用的样品前处理技术包括 PPT、固相萃取 (SPE)、液液萃取 (LLE) 和介质液液萃取 (SLE)。每种技术在速度、成本和生成数据的质量方面各有优劣。例如,PPT、LLE 和 SLE 无法去除 PPL,而 SPE 执行起来更耗时且更复杂。然而,在这些技术中,PPT 得到了最广泛的认可。PPT 以规定的比例向生物样品中加入有机沉淀溶剂(如乙腈 (ACN) 或甲醇 (MeOH)),可轻松去除蛋白质。随着蛋白质的变性,它们形成的沉淀可通过过滤或离心得以去除。PPL 无法通过 PPT 去除,因为这种物质溶于有机沉淀溶剂中,在过滤或离心后仍保留在样品中。大麻类物质是支持案件调查的法医学实验室中最常见的目标分析物之一。快速、准确地确认并定量生物样品中的 Δ9-THC (THC) 及其主要代谢物 11-羟基-Δ9-THC (THC-OH) 和 11-nor- 9-Δ9-羧基-THC (THC-COOH) 至关重要。然而,THC 及其代谢物在样品前处理过程中容易发生非特异性结合。迫切需要一种样品前处理方法,在减少样品前处理步骤(包括离线 PPT、离心、转移和稀释)的同时实现高效蛋白质和PPL 去除,并使目标分析物获得令人满意的回收率。本应用简报介绍了一种在 PPT 之后使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 去除 PPL 的方法,该方法通过简单的直通净化步骤即可完成,不会引起分析物损失。所得的提取物更洁净,减少了潜在的离子抑制以及色谱柱和质谱仪污染。依次使用孔内 PPT 和 Captiva EMR-Lipid 1 mL 过滤柱去除 PPL,对血浆中的 THC、THC-OH 和 THC-COOH 进行萃取。随后使用 Agilent 6490 三重四极杆液质联用系统进行定量分析。对 EMR-Lipid 过滤柱净化去除 PPL 的效率进行了评估。还测定了 THC 及其代谢物的日间(3 日)准确度、精密度和回收率。有关全血样品的分析,请参见安捷伦应用简报使用 Captiva EMR-Lipid 和 LC-MS/MS 对全血中的 THC 及其代谢物进行高效定量分析。结论本应用简报介绍了一种简便而快速的血浆样品前处理工作流程,用于对 THC 及其代谢物进行法医学研究的 LC-MS/MS 分析。依次采用孔内 PPT 和 Agilent Captiva EMR-Lipid 1 mL 过滤柱净化来提取血浆中的目标分析物。Captiva EMR-Lipid 能够去除血浆基质中 99% 以上的 PPL,并使目标分析物获得优异的回收率。样品提取物比单独使用 PPT 获得的提取物更洁净,从而减小了基质离子抑制作用,并改善了分析准确度、精密度和重现性。更洁净的提取物还减少了对 LC-MS/MS 系统的污染以及可能由维护带来的停机时间。孔内 PPT 具有减少样品处理和转移的优点。对 1 ng/mL THC、THC-OH 和 THC-COOH 的分析得到了理想的峰形和良好的 S/N,该浓度低于确定损伤所需的 5 ng/mL 浓度。血浆中处于 0.5–100 ng/mL 范围内的校准曲线呈线性,其中 R2 高于 0.99。获得的三种分析物的 LOQ 为 1.0 ng/g或更低,RSD 小于 10%。回收率高达 90% 或更高。在 3 天的重复分析过程中,结果保持一致。Captiva EMR-Lipid 方法可轻松融入现有工作流程中,无需额外的样品前处理装置或玻璃器皿。在 96 孔板或 1 mL 过滤柱形式中,Captiva EMR-Lipid 可兼容自动化系统,适用于高通量应用。滤芯设计可轻松高效洗脱样品,不易发生堵塞。
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安捷伦科技(中国)有限公司为您提供《人血浆中THC 和代谢物检测方案(液相色谱仪)》,该方案主要用于司法鉴定中THC 和代谢物检测,参考标准--,《人血浆中THC 和代谢物检测方案(液相色谱仪)》用到的仪器有Agilent 1260 Infinity II Prime HPLC 液相色谱系统、Agilent 6470 三重四极杆液质联用系统、Agilent 1290 Infinity II Multisampler