血液中乙醇检测方案(气相色谱仪)

利用双色谱柱/双 FID 以及 AgilentIntuvo 9000 气相色谱仪测定血醇 应用简报 作者 摘要 Rebecca Veeneman 博士 安捷伦科技公司 2850 Centerville Rd. Wilmington， DE 19808 本应用简报展示了在配备 Agilent 7697A 顶空进样器的 Agilent Intuvo 9000气相色谱仪上对血醇组分的双色谱柱/双检测器分离与检测。简化的惰性流路集成有进样口分流功能，能够对各种浓度的乙醇进行精密、准确的定量分析和保留时间确认。 Agilent Technologies 前言 血醇浓度测定即血液样品中乙醇含量的测定，在测定过程中通常采用顶空进样。事实上，血醇测定是顶空气相色谱(HS-GC) 最常见的应用之一。显然，在当事人被指控醉酒驾驶时，执法机关实验室会经常用到 HS-GC。准确测定血液样品中的乙醇含量很有必要，因为这一参数直接反映了当事人的醉酒水平。鉴于美国的血醇浓度阈值为 0.08%(80mg/dL)，报告结果可能会导致出现严重的法律后果。 双色谱柱/双检测器方法可用于乙醇及其他目标化合物的鉴定与定量分析。用两根不同固定相的色谱柱，可使样品中的分析物表现出不同的保留行为。通过比较两根色谱柱上的保留时间，可实现准确的化合物鉴定。双检测器有助于根据两条校准曲线来测定目标分析物的浓度，并可用作定量确认。 本应用简报介绍了一种配备 AgilentIntuvo 9000 气相色谱仪和 Agilent7697A顶空进样器的双色谱柱/双检测器系统。 Intuvo 9000气相色谱仪采用简化的进样口分流流路，可实现精密、准确的样品分流。本文展示了该双色谱柱系统的准确校准和高精度。 实验部分 用水配制两份工作标准溶液。第一份溶液的乙醇浓度为 800 mg/dL(0.8%w/v)，，甲醇、丙酮和异丙醇浓度各为 400 mg/dL (0.4% w/v)。第二份溶液的乙醇浓度为500 mg/dL (0.5%w/v)， 甲醇、丙酮和异丙醇浓度各为250 mg/dL (0.25% w/v)。将工作标准溶液用水稀释至乙醇最终浓度分别为200、100、80、50、10 mg/dL (0.2%、0.1%、0.08%、0.05%、0.01%w/v)。 用水配制浓度为0.3%(v/v)的正丙醇内标溶液。乙醇对照品购自 Cerilliant(Round Rock， TX)。 在20mL 顶空样品瓶中加入450uL内标和 50 uL校准品对对照品，制得顶空样品。 仪器 Agilent Intuvo 9000气相色谱仪，配备分流/不分流进样口和双 FID。采用 Agilent 7697 顶空进样器进样。仪器参数列于表1中。 表1.用于 BAC 双 FID 应用的仪器条件 结果与讨论 图1显示了 Intuvo 9000 气相色谱仪上的DB-ALC1 和 DB-ALC2 得到的色谱图。获得的峰形非常出色，并观察到丙酮和异丙醇洗脱顺序的预期变化。预计乙醇和甲醇的保留时间不变，它们的色谱峰保留时间仅有3.6秒的差异，可实现乙醇的准确鉴定。 在 HS-GC-FID/FID 系统上运行了七种浓度的校准标样。图2显示了所得乙醇、甲醇、丙酮和异丙醇的校准曲线。图中列出了乙醇的线性回归方程和校准曲线相关系数。所有四种分析物的校准曲线均表现出优异的线性，它们的R值均高于0.9992。乙醇的分析灵敏度(校准曲线的斜率)在两对色谱柱/检测器上的差异在5%以内，表明进样口后分流准确且检测结果一致。 时间 (min) 图1.利用 DB-ALC1 色谱柱(A)和 DB-ALC2 色谱柱(B)得到的0.05%校准品表现出非常出色的峰形，且丙酮和异丙醇的洗脱顺序发生了预期变化 图2.在两对色谱柱/检测器上得到的乙醇、丙酮、异丙醇和甲醇的校准曲线均表现出优异的线性，两条通道所得到的乙醇校准结果具有良好的一致性 在校准后，用乙醇对照品进行准确度评估。虽然图1中显示了峰面积校准曲线，但还生成了基于响应比的校准曲线。同时采用峰面积校准曲线和响应比校准曲线对乙醇对照品浓度进行计算(表2)。结果表明，乙醇对照品的浓度处于允许误差范围内(目标浓度±6%或±0.004%w/v)3。根据峰面积校准曲线和响应比校准曲线测得的所有乙醇对照品的浓度均处于这些性能标准的范围内。 还对多个样品瓶以及单一样品瓶多次进样的重复性和重现性进行了评估。含有0.05%乙醇对照品的六个不同样品瓶获得的峰面积重复性(RSD) 为1.2%。计算得到的浓度为 0.048% w/v，满足这一浓度下±0.004%w/v的准确度允许误差。从同一样品瓶进样10次所得到的峰面积重复性很差，与顶空样品瓶的预期结果类似， RSD 达15.9%。然而，在使用响应比时，从同一样品瓶进样10次所得到的重复性提高了三倍， RSD 仅为 5.2%。在10次进样中使用响应比计算乙醇对照品的浓度时，所得对照品浓度为0.051%w/v， 同样处于允许误差指标范围内。 表2.根据峰面积校准曲线或响应比校准曲线测定的各种浓度乙醇对照品的结果，均处于允许误差范围内 对照品浓度 峰面积 响应比 (w/v) DB-ALC1 DB-ALC2 DB-ALC1 DB-ALC2 0.40% 0.392% 0.393% 0.400% 0.389% 0.30% 0.300% 0.302% 0.306% 0.298% 0.20% 0.193% 0.194% 0.198% 0.193% 0.10% 0.099% 0.100% 0.101% 0.099% 0.08% 0.080% 0.080% 0.081% 0.079% 0.05% 0.050% 0.050% 0.051% 0.059% 0.02% 0.022% 0.020% 0.022% 0.021% 0.01% 0.013% 0.011% 0.013% 0.011% 结论 本文展示了配备 Agilent 7697A 顶空进样器的 Agilent Intuvo 9000 气相色谱仪的校准曲线线性、准确度和重复性。所评估的四种分析物均获得了优异的线性，由 DB-ALC1 和 DB-ALC2色谱柱/检测器对得到的乙醇校准曲线具有优异的一致性。根据峰面积校准曲线或响应比校准曲线测定的各浓度乙醇对照品的结果均处于允许误差范围内。六个样品瓶重复进样得到了优异的测量重复性。在评估单一顶空样品瓶的大量进样时，建议使用响应比进行测定，这样能够大大改善重复性和测量可信度。在两根色谱柱上得到的乙醇峰形和保留时间均表现出良好的一致性，能够实现可靠的靶向鉴定和定量分析。 ( 参考文献 ) ( 1 . Kolb，B.； L. E. In Static Headspace-Gas Chromatography： Theory andPractice (2nd ed)； Wiley & Sons Inc： Hoboken，NJ， 2006 ) ( 2. Westland， J. L . ； F. D. Comparisonof SPME and static headspaceanalysis of blood alcoholconcentration utilizing two novelchromatographic stationary phases. Forensic Science International 2013，350-e56 ) ( 3. Virginia Department of F orensicScience.Toxicology ProceduresManual.www.dfs.virginia.gov/wp-content/uploads/2016/08/ 220-D100-toxicology- procedures-manual (Accessed July 2，2015) ) www.aqilent.com 仅限研究使用。不可用于诊断目的。 ( 用于法医鉴定。 ) ( 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行 通知。 ) ( 安捷伦科技(中国)有限公司， 2017 ) ( 2017年6月1日，中国出版 ) ( 5991-7217ZHCN ) 摘要本应用简报展示了在配备 Agilent 7697A 顶空进样器的 Agilent Intuvo 9000气相色谱仪上对血醇组分的双色谱柱/双检测器分离与检测。简化的惰性流路集成有进样口分流功能，能够对各种浓度的乙醇进行精密、准确的定量分析和保留时间确认。前言血醇浓度测定即血液样品中乙醇含量的测定，在测定过程中通常采用顶空进样。事实上，血醇测定是顶空气相色谱 (HS-GC) 最常见的应用之一。显然，在当事人被指控醉酒驾驶时，执法机关实验室会经常用到 HS-GC。准确测定血液样品中的乙醇含量很有必要，因为这一参数直接反映了当事人的醉酒水平。鉴于美国的血醇浓度阈值为 0.08% (80 mg/dL)，报告结果可能会导致出现严重的法律后果。双色谱柱/双检测器方法可用于乙醇及其他目标化合物的鉴定与定量分析。用两根不同固定相的色谱柱，可使样品中的分析物表现出不同的保留行为。通过比较两根色谱柱上的保留时间，可实现准确的化合物鉴定。双检测器有助于根据两条校准曲线来测定目标分析物的浓度，并可用作定量确认。本应用简报介绍了一种配备 Agilent Intuvo 9000 气相色谱仪和 Agilent 7697A 顶空进样器的双色谱柱/双检测器系统。Intuvo 9000 气相色谱仪采用简化的进样口分流流路，可实现精密、准确的样品分流。本文展示了该双色谱柱系统的准确校准和高精度。结论本文展示了配备 Agilent 7697A 顶空进样器的 Agilent Intuvo 9000 气相色谱仪的校准曲线线性、准确度和重复性。所评估的四种分析物均获得了优异的线性，由 DB-ALC1 和 DB-ALC2色谱柱/检测器对得到的乙醇校准曲线具有优异的一致性。根据峰面积校准曲线或响应比校准曲线测定的各浓度乙醇对照品的结果均处于允许误差范围内。六个样品瓶重复进样得到了优异的测量重复性。在评估单一顶空样品瓶的大量进样时，建议使用响应比进行测定，这样能够大大改善重复性和测量可信度。在两根色谱柱上得到的乙醇峰形和保留时间均表现出良好的一致性，能够实现可靠的靶向鉴定和定量分析。