疫苗中蛋白质检测方案(定氮仪)

SINEO新仪K-306-201711 K-306-201711 海能仪器：疫苗中蛋白质含量测定产品配置单(凯氏定氮仪) 1.前言 疫苗是指为了预防、控制传染病的发生、流行，用于人体预防接种的疫苗类预防性生物制品。而疫苗中大都会含有大量蛋白质。常规的蛋白质测定方法有凯氏定氮法，分光光度法以及燃烧法，其中以凯氏定氮法应用最为广泛。但传统的玻璃仪器具有操作繁琐，耗时长，危险性高等缺点。下面以禽流感疫苗为例，采用《中国药典》2015年版中氮测定法第三法以全自动凯氏定氮仪进行实验，操作简单，测得结果平行性良好。 2!仪器与试剂 2.1仪器 K1100F 全自动凯氏定氮仪， SH420F石墨消解仪 2.2试剂 硫酸(分析纯)、硼酸(分析纯)、氢氧化钠(分析纯)、溴甲酚绿-甲基红混合指示剂、催化剂片(3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合均匀压片)、0.1mol/L硫酸标准滴定液等。 3实验方法 3.1取样 精确量取2ml样品放入消化管中，并用纯水冲洗消化管壁，防止残留，加一片催化剂片(或硫酸钾3g与硫酸铜0.2g)，再加硫酸10mL。同时做空白实验。 3.2消解 利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化完毕后，将消化管取下冷却至室温。消解过程设定消解温度参数如下表： 温度(℃) 时长(min) 1 200 30 2 420 60 3.3上机测试 待消化管内溶液冷却至室温后，将消化管放置于定氮仪上。开始蒸馏滴定。定氮仪设置程序如下： 硼酸 稀释水 碱液 蒸馏量 蒸汽流量 25mL 30mL 35mL 5min 100% 4结果与讨论 4.1实验结果 仪器自动滴定并计算，计算公式如下： 式中：C-标准酸摩尔浓度(mol/L) V样-样品体积(mL) Vo-空白样滴定标准酸消耗量(mL) V-样品滴定标准酸消耗量(mL) 6.25-样品蛋白系数 编号 样品体积(ml) 氮含量(g/L) 蛋白质含量(g/L) 平均值(g/L) RSD(%) 1 2 197.7351 1235.8444 1230.7271 0.52 2 2 195.7701 1223.5631 3 2 197.2438 1232.7738 4.2实验结论 通过以上测得数据可知，利用全自动凯氏定氮仪测定疫苗中蛋白质含量平行性良好，且具有操作简单，安全性高，节省人力等优点。 -- -- 1 前言疫苗是指为了预防、控制传染病的发生、流行，用于人体预防接种的疫苗类预防性生物制品。而疫苗中大都会含有大量蛋白质。常规的蛋白质测定方法有凯氏定氮法，分光光度法以及燃烧法，其中以凯氏定氮法应用最为广泛。但传统的玻璃仪器具有操作繁琐，耗时长，危险性高等缺点。下面以禽流感疫苗为例，采用《中国药典》2015年版中氮测定法第三法以全自动凯氏定氮仪进行实验，操作简单，测得结果平行性良好。2 仪器与试剂2.1仪器K1100F全自动凯氏定氮仪，SH420F石墨消解仪      2.2试剂硫酸（分析纯）、硼酸（分析纯）、氢氧化钠（分析纯）、溴甲酚绿-甲基红混合指示剂、催化剂片（3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合均匀压片）、0.1mol/L硫酸标准滴定液等。