骨胶原肽中蛋白质检测方案(定氮仪)

K-507-201712 海能仪器：骨胶原肽中蛋白质含量测定产品配置单(凯氏定氮仪) 1前言 鲜骨含有认体需要的多种营养物质，但不易直接食用，利用酶法将骨胶原蛋白水解成骨胶原多肽，有利于人体消化吸收。在《5009.5-2016食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》中蛋白质测定方法有凯氏定氮法，分光光度法以及燃烧法。其中以凯氏定氮法应用最为广泛。凯氏定氮法是将样品中的有机态氮在浓硫酸和催化剂的共同作用下，转化为氨态氮。加碱蒸馏后，用硼酸吸收后，再以盐酸或硫酸标准滴定液进行滴定，具有结果准确等优点。但传统的玻璃仪器具有操作繁琐，耗时长，危险性高等缺点。本文以全自动凯氏定氮仪进行实验，结果准确，操作简单。 2仪器与试剂 2.1仪器 K1160全自动凯氏定氮仪，SH420F石墨消解仪 2.2试剂 硫酸(分析纯)，硼酸(分析纯)，氧化钠(分析纯)，溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，催化剂片(3g硫酸钾和 0.2g硫酸铜混合均匀压片)， 0.1mol/L 盐酸标准滴定液。 3实验方法 3.1取样 取 0.2g左右样品，加催化剂一片(或硫酸钾3g与硫酸铜 0.2g)，再沿瓶壁滴加硫酸10.0ml。 3.2消解 利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化完毕后，将消化管取下冷却至室温。消化过程采用曲线升温模式，设置参数如下： 温度(℃) 时间(min) 1 240 15 2 420 60 3.3 上机测试 待消化管内溶液冷却至室温后，将消化管放置于定氮仪上。定氮仪设置程序如下： 硼酸 稀释水 碱液 蒸馏量 蒸汽流量 25mL 30mL 35mL 5min 100% 4结果与讨论 4.1实验结果 仪器自动滴定并计算，计算公式如下 式中：c-标准酸摩尔浓度(mol/L) W-样品质量(g) V0-空白样滴定标准酸消耗量(mL) V-样品滴定标准酸消耗量(mL)，精确到小数点后四位 编号 取样量(g) 蛋白质含量(%) 平均值(%) RSD(%) 1 0.2030 98.059 98.243 0.31 2 0.2006 98.597 3 0.2028 98.072 4.2结论 通过数据可知，利用全自动凯氏定氮法测定骨胶原肽粉中的蛋白质含量平行性良好，且具有操作简单，安全性高，节省人力等优点。 ( 参考文献 ) [1]GB 5009.5-2016食品安全国家标准食品中蛋白质的测定[S]. 注意事项 样品中蛋白含量较高，取样及消解时应注意减少误差。可以用称量纸包裹住样品投入消化管中，以防止样品粘在消化管上部。实验过程中浓酸浓碱较为危险，请小心操作。 -- -- 1 前言鲜骨含有人体需要的多种营养物质,但不易直接食用,利用酶法将骨胶原蛋白水解成骨胶原多肽，有利于人体消化吸收。在《5009.5-2016 食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》中蛋白质测定方法有凯氏定氮法，分光光度法以及燃烧法。其中以凯氏定氮法应用最为广泛。凯氏定氮法是将样品中的有机态氮在浓硫酸和催化剂的共同作用下，转化为氨态氮。加碱蒸馏后，用硼酸吸收后，再以盐酸或硫酸标准滴定液进行滴定，具有结果准确等优点。但传统的玻璃仪器具有操作繁琐，耗时长，危险性高等缺点。本文以全自动凯氏定氮仪进行实验，结果准确，操作简单。2 仪器与试剂2.1仪器 K1160全自动凯氏定氮仪，SH420F石墨消解仪2.2试剂 硫酸（分析纯），硼酸（分析纯），氧化钠（分析纯），溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，催化剂片（3g硫酸钾和0.2g硫酸铜混合均匀压片），0.1mol/L盐酸标准滴定液。