化学药中特殊物质和基团检测方案

HitachiHighechAS/AAA-008 HitachiHighHechLC Application Sheet在生物药品分析中的应用(肽制剂依降钙素的氨基酸组成分析)AS/AAA-008 LC Application Sheet在生物药品分析中的应用(肽制剂依降钙素的氨基酸组成分析) 依降钙素是以提高降钙素的稳定性为目的而设计的合成多肽(分子量3363.77)。由包含L-2-氨基辛二酸在内的31个氨基酸构成。作为此类肽制剂的一种品质评价方法，可以进行氨基酸组成鉴别。 此次，使用L-8900型日立全自动氨基酸分析仪，以日本药典(*)规定的分析方法(使用3um填充剂的色谱柱)得到了依降钙素的氨基酸组成。本次试验所用依降钙素为市售制剂。 (*)日本药典第16版(2011年4月1日起执行) 【依降钙素的结构式】 【2-氨基辛二酸】 1标准样品测定例 150 【14种氨基酸标准溶液的测定例(各2nmol/10uL)】 <标准分析法测定条件> 分析柱 ：#2620M 4.6 mm I.D. × 80 mm 反应液 ： Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI 除氨柱 ： #2650L 4.6mm l.D. × 40 mm 反应液流速 ：0.2mL/min 流动相 ：按照药典规定的组成配制 反应温度 ：130°C (4种溶液) 检测波长 ： VIS 440 nm，570 nm 流速 ：0.19 mL/min 进样量 ：10pL 柱温 ：50-65°C 色谱柱的选择项目 规定内容 测定结果 14种氨基酸的洗脱顺序 依次为天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、2-氨基辛二酸、亮氨酸、酪氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸 如左侧所示 峰的分离 完全分离(分离度1.5以上) 分离度1.61~13.06 得到了能够满足色谱柱选择要求的结果。另外，虽然药典中没有记载，但是峰面积的相对标准偏差(n=3)为0.02~1.33%，得到了良好的重现性。 Hitachi High-Technologies Corporation ■依降钙素测定例(组成氨基酸的鉴别) 【依降钙素测定例】 <组成氨基酸的鉴别> 成分名 规定值 (相对于Ala的摩尔比) 测定结果 天冬氨酸(Asp) 1.7~2.2 2.0 苏氨酸(Thr) 3.5~4.2 3.9 丝氨酸(Ser) 2.4~3.0 2.7 谷氨酸(Glu) 2.7~3.2 3.0 甘氨酸(Gly) 2.7~3.2 3.1 丙氨酸(Ala) 定为1 定为1 缬氨酸(Val) 1.6~2.2 2.1 2-氨基辛二酸 0.8~1.2 1.1 亮氨酸(Leu) 4.5~5.2 5.0 酪氨酸(Tyr) 0.7~1.2 1.1 赖氨酸(Lys) 1.7~2.2 2.0 组氨酸(His) 0.8~1.2 1.0 精氨酸(Arg) 0.7~1.2 1.0 脯氨酸(Pro) 1.7~2.2 1.9 <样品前处理(水解)> 样品1mg苯酚盐酸溶液(*)1mL 脱气 加热 110℃、24 hr真空干燥以1mL， 0.02 mol/L 的盐酸溶解过滤 Pore Size 0.2 um 氨基酸分析样品(10uL) (*)苯酚盐酸溶液：将0.2g苯酚溶解于10mL， 6 mol/L的盐酸溶液中 其他各氨基酸相对于丙氨酸(Ala)白的摩尔比均在规定范围内，得到了良好的结果。 Page. Page.(@Hitachi High-Technologies Corporation