蟾酥中脂檐毒配基检测方案(液相色谱柱)

中国药典2010年版对应高效液组色谱方法图增库(第一册)引领分析沂技.在北尿谱oaQQ4006165163 中国药典2010版对应高效液相色谱图集 蟾酥分析 蟾酥的高效液相色谱 《中国药典》收载情况 【来源】本品为蟾蜍科动物中华大蟾蜍 Bufo bufo gargarizans cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的干燥分泌物。多于夏、秋二季捕捉蟾蜍，洗净，挤取耳后腺及皮肤腺的白色浆液，加工，干燥。 【功能与主治】解毒，止痛，开窍醒神。用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑神昏，腹痛吐泻。 【含量测定】色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈(50：50)(用磷酸调节PH值为3.2)为流动相；检测波长为296nm； 柱温40℃。理论板数按华蟾酥毒基峰、脂蟾毒配基峰计算应分别不低于4000。 对照品溶液的制备：精密密取取五氧化二磷减压干燥24小时的华蟾酥毒基对照品、脂蟾毒配基对照品各10mg， 分别置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取5mL，各置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1mL中含华蟾酥毒基、脂蟾毒配基各50ug)。 供试品溶液的制备：取本品细粉约25mg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20mL，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法： 分别精密吸取上述两种种照品溶液与供试品溶液容20pL，注入液相色谱仪，测定，即得。 蟾酥药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】《中中药典》中蟾酥的含量测定以华蟾酥毒基、脂蟾毒配基为质量评价依据，木犀草素在InertsilODS-4中的色谱特点为：检测波长在296nm时华蟾酥毒基和酯蟾毒配基吸收最强，色谱图较优；在流动相组成为0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈系统时，流动相的比例对华蟾酥毒基和酯蟾毒配基及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，乙腈比例在45-55%(v/v)之间均可以获得满意的分离度及分析效果，乙腈的比例在50%(v/v)左右时，其分离度最好，优化流动相比例为0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈(45：55)；柱温对蟾酥毒基和酯蟾毒配基的保留也有一定影响，温度越高，保留时间越短，样品在35到45℃均有较好的分析效果，考虑到样品的稳定性及分析时间，本次采用40℃条件进行测定。 蟾酥 ( 样品来源：蟾蜍 科 动物中华大蟾蜍 Bufo bufo gargarizans cantor或黑眶蟾蜍Bufo melunostictus Schneider的干燥分泌物。 产地：河北。 ) 对照品：酯蟾毒配基(上海同田生物技术有限公司，批号：08060731，含量：98%) 供试品溶液的制备：取本品细粉约25mg， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20mL，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 ( 对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷减压干燥24小时的华蟾酥毒基对照品、脂蟾毒配基对照品各10mg，分别置 100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取5mL， 各置10mL量瓶中， 加 甲醇至刻度， 摇匀，即得 (每1mL中含华蟾酥毒基、脂蟾毒配基各50ug)。 ) .中国药典2010年版对应高效液色谱方法图谱库(第一册)引领分析析技.在北尿谱牙oaQQ4006165163 蟾酥 色谱柱： Inertsil ODS-4 (4.6×250mm，5um) 流动相：0.5%磷酸二二钾溶液-乙腈(55：45) 柱温： 40℃ 检测波长：296nm 流速：1.0 mL/min 进样量： 10pL ※此条件同样适用于Inertsil ODS-3(4.6×250 mm，5 pm) 推荐使用条件范围： 仪器配置： 色谱柱： Intersil ODS-4(4.6×250mm，5u m) LC-20ADXR高压泵 流动相：0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈(45~55：55~45) DGU-20A3脱气机 柱温：30~40℃ SPD-M20A二极管列列紫外可见光检测器 检测波皮：296nm CTO-20AC柱温箱 流速：1.0 mL/min CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC 自动进样器 标准样品 实际样品 名称 保留时间(min) 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 华蟾酥毒基 7.202 609807 69925 14454 1.09 脂蟾毒配基 7.711 570641 62913 15412 1.09 华蟾酥毒基标准曲线 脂蟾毒配基标准曲线 重现性数据如下 华蟾酥毒基 No. 标准样品 保留时间 峰面积 实际样品 保留时间 峰面积 1 2 3 7.195 610425 7.276 537253 7.254 538658 7.202 6098077.189 609381 7.262 537070 AverageRSD% 7.195 6098710.09 0.08 7.264 537660 0.15 0.16 脂蟾毒配基 No. 标准样品 保留时间 峰面积 实际样品 保留时间 峰面积 1 2 3 7.729 6969517.733 6968327.751 697418 7.276 537253 7.254 538658 7.262 537070 AverageRSD% 7.737 6970670.15 0.04 7.264 537660 0.15 0.16 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 中国药典word版exe版pdf版及培训资料精华帖http：//www.yaojia.org/forum. php?mod=viewthread&tid=fromuid= 色谱柱lnertsil ODS-4 (4.6 x 250 mm, 5μm)流动相0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈(55:45)柱温40℃检测波长296nm流速1.0 mL/min进样量10μL※此条件同样适用于Inertsil ODS-3 (4.6 x 250 mm, 5μm)