人参皂甙中成分分析检测方案(液质联用仪)

SHIMADZUAPPLICATION NEWS色谱分析NO.LC-009岛津国际贸易(上海)有限公司http：//www.shimadzu.com.cn上海(021)84156804 广州(020)87108613岛津应用技术咨询电话(分析中心)北京(010)85252416/2417/2352 在线自动脱盐LC-MS系统分析人参皂甙 摘要：开发了新型在线自动稀释脱盐LC-MS前处理系统，该系统采用了柱切换技术，可以使用普通的液相色谱条件来进行LC-MS的分析，包括缓冲盐的使用。自动稀释系统可以提高目标化合物的捕集效率，并且可以自动进行脱盐。该系统可以完全由计算机来进行控制，是药物和天然产物中未知样鉴定的有效系统。 HPLC动动样品前处理系统用于提高分析效率已经有许多报道，特别是MS检测器，为了避免污染，经常需要安装一个切换阀来避免污染. 在药物中不纯物分析以及天然产物中未知成分的鉴定分析中，由于磷酸盐具有广泛的pH范围以及在低波长吸收低的特点.已经在许多LC分析方法中使用，但由于磷酸盐不适宜于API高子源. LC-MS需要使用挥发性的缓冲液.因此，当使用MS取代UV检测器时，往往需要优化新的分析条件，鉴于这种情况，我们开发了新的阀切换系统(在线自动稀释脱盐LC-MS前处理系统)1..该系统可以在线白动进行脱盐，同时白动稀释旁路可以提高目标化合物的捕集效率。这样，使用在线自动稀释脱盐LC-MS前处理系统，我们就可以直接接HPLC的分析条件应用到LC-MS中，对目标化合物进行MS分析了。由于HPLC磷酸盐分析条件可以直接用于LC-MS，因此，对于未知物的鉴定来说，该系统是非常有用的系统.本文讨论了提高捕集效率的在线稀释系统，并且进行了人参提取物中未知物的实际分析. HPLC装置 在线自动稀释脱盐LC-MS前处理系统包括脱气机DGU20A5： 泵LC-20AD (3台)： LC-20AB(1台)自动进样器SIL-20AC：高压混合器：柱湿箱CTO-20AC： 流路切换阀FCV-12AH(2个)，紫外检测器SPD-20AV， LC-MS2010EV. 流程图 流程图如图1所示，先采用HPLC对未知样进行分析，对感兴趣的目标峰，可以通过左阀的切换将其引入后面的系统，经过富集及脱盐后，右阀切换，将捕集柱中的样品引入MS检测器进行检测。 图1 系统流路图 分析条件 [分离条件] 分析柱流速：：1 mL/min 流动相：A20mM 磷酸缓冲盐(pH=2.6) B乙腈梯度：Time B.Conc0 3018.00 4018.01 9023.00 9023.01 3028.00 30进样体积：10pL柱Shim-pack VP-ODS (150 mmLx4.6mmid)柱温：40℃检测波长UV-200nm池温：40℃ 引入液：0.1%乙酸水溶液 稀释液：0.1%乙酸水溶液 引入泵流速：0.3mL/min 稀释泵流速：2.7 mL/min [MS 检测器] 样品洗提流速：0.2mL/min 样品洗提溶剂：含有0.1%乙酸的乙腈溶液 MS柱： Shim-pack VP-ODS(150mmLx2.0mmid) MS检测器：Electrospray 捕集效率 样品体积对柱效的影响如图2所示。标样溶液分别由水，甲醇配制， 咖啡因的绝对量均为100ug.当使用强洗脱的溶剂时(如甲醇))，随着进样体积的增加，柱效显著降低，另外，当使用弱洗脱溶剂时{如水)，随着进样体积的增加，柱效没有明显降低。因此，为了提高捕集效率，选择弱洗脱的纯水作为洗脱溶剂。稀释泵用纯水稀释样品环中捕集的样品，稀释倍率为10.即使样品环中的溶剂为纯甲醇，在样品移动过程中，溶剂纯甲醇将被稀释为10%的甲醇.这样可以提高抽集效率， 图2.进样体积对柱效的影响 脱盐效率 对 LCMS入口管流出的溶液进行了收集并分析了离子的残留量，各离子的残留浓度见表1， 使用50mM磷酸盐缓冲液 (pH=2.5)(等于5000 mg/L磷酸根离子)为流动相，结果在流出液中检测到了2.064mg/L磷酸根离子，除盐效率为99.95%， Table 1.各种离子残留浓度 lon Peak Area Concentration(mg/L) F 未检出 ci 77313 0.258 NOz 一 未检出 Br 未检出 NO： 59784 0.404 PO4 140927 2.064 sor 52801 0.197 人参皂甙分析结果 按照上述分析条件，对人参提取液进行了分祈，色谱图见图3.人参皂甙Re、Rg1和Rb1的MS分析结果见图4、图5和图6. 图3.人参提取液色谱图 图4. Re [M+AcO]- 图5.Rg1 [M+AcO]- 图6.Rb1 [M-H]- 结论 新的柱切换并具有稀释功能的在线前处理LCMS系统不仅可以直接使用常规的HPLC条件，而且还可以选择最适合于目标化合物离子化的LCMS流动相条件，因此，该系统是药物和天然产物中未知样鉴定的有效系统。