玄参中哈巴苷和哈巴俄苷检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006 165163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 玄参分析 玄参的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为玄参科植物玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl. 的干燥根。冬季茎叶枯萎时采挖，除去根茎、幼芽、须根及泥沙，晒或烘至半干，堆放3~6天，反复数次至干燥。 【功能与主治】清热凉血，滋阴降火，解毒散结。用于热入营血，温毒发斑，热病伤阴，舌绛烦渴，津伤便秘，骨蒸劳嗽，目赤，咽痛，白喉，瘰疬，痈肿疮毒。 【含量测定】 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙剂为流动相A， 以0.03%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为210nm。理论板数按哈巴俄苷与哈巴苷峰计算均应不低于5000。 时间(分钟) 流动相A(%) 流动相B(%) 0~10 3→10 97→90 10~20 10→33 90→67 20~25 33→50 67→50 25~30 50→80 50→20 30~35 80 20 35~37 80→3 20→97 对照品溶液的制备：取哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品适量，精密称定，加30%甲醇制成每1mL含哈巴苷60 ug、哈巴俄苷20pg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约0.5 g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，称定重量，浸泡1小时，超声处理(功率500W，频率40 kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pL，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含哈巴苷(CH24010)和哈巴俄苷(C4HOm)的总量不得少于0.45%。 玄参 样品来源：本品为玄参科植物玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl. 的干燥根。冬季茎叶枯时时采挖，除去根茎、幼芽、须根及泥沙，晒或烘至半干，堆放3~6天，反复数次至干燥。产地：浙江。 对照品：哈巴苷(上海同田生物技术有限公司，批号200900520，含量：98%)； 哈巴俄苷(上海同田生物技术有限公司，批号2117083-32，含量：98%)。 供试品溶液的制备：取本品取末(过三号筛)0.5112 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL， 密塞，称定重量，浸泡1小时，超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：取哈巴苷对照品、哈巴俄苷对照品适量，精密称定，用甲醇制成储备液，然后加30%甲醇制成每1 mL含哈巴苷60 ug、哈巴俄苷20ug的溶液，即得。 色谱柱： Shim-pack XR-ODS Ⅱ(3.0 mm×75 mm， 2.2 pum) 流动相：按下表进行梯度洗脱： 时间(分钟) 乙腈(%) 0.03%磷酸(%) 0~0.3 3 97 0.3~1.2 3→8 97→92 1.2~1.6 8→20 92→80 1.6~2.3 20→30 80→70 2.3~5 30 70 5~5.2 30→80 70→20 5.2~7.0 80 20 7.0~9.0 80→3 20→97 柱 仪器配置： 检测波长：210nm UFLC-20ADXR 高压泵 采集频率：40 Hz 流速：1.2mL/min 进样量：4pL SPD-M20A二极管阵列紫外可见光半微量检测器CTO-20AC柱温箱CBM-20A系统控制器 对照品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 哈巴苷 1.906 38910 25293 39336 1.12 哈巴俄苷 3.947 67366 28992 70220 1.04 哈巴苷标准曲线 重复性数据如下： 哈巴苷 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 1.906 38978 1.903 46520 2 1.903 39094 1.904 46468 3 1.907 39056 1.903 46454 Average 1.905 39043 1.903 46481 RSD% 0.11 0.15 0.03 0.07 哈巴俄苷标准曲线 哈巴俄苷 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 3.946 67827 3.942 49732 2 3.946 68106 3.944 49819 3 3.943 68055 3.946 49671 Average 3.945 67996 3.944 49741 RSD% 0.04 022 0.05 0.15 色谱柱：Shim-pack XR-ODS II (3.0 mm x 75 mm, 2.2um)流动相：按下表进行梯度洗脱：柱温：40℃检测波长：210 nm采集频率：40 Hz流速：1.2 mL/min进样量：4 ul