茜草中羟基茜草素检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 茜草分析 茜草的高效液相色谱 .药典收载情况 天源】本品为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L. 的干燥根和根茎。 勿能与主治】凉血，祛瘀，止血，通经。用于吐血，衄血，崩漏，外伤出血，瘀阻经闭，关节痹通，跌扑肿痛。 ：含量测定】 色条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液(25：50：25)为流动相；波长为250 nm。理论板数按羟基茜草素、大叶茜草素峰计算均应不低于4000。 品溶液的制备：取羟基茜草素对照品、大叶茜草素对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1mL含大叶茜草素ng、含羟基茜草素40pg的溶液，即得。 专试品溶液的制备：取本品粉末(过二号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL， 密塞，尔定五二，放置过夜，超声处理(功率250W，频率40 kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，密量取续滤液50 mL， 蒸干，残渣加甲醇-25%盐酸(4：1)混合溶液20 mL， 置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，加入二胺3mL，摇匀，转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 多定法：分别精密吸取对照品溶液10pL与供试品溶液20pL， 注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含大叶茜草素(C，H，0)不得少于0.40%，羟基茜草素(CaHO，)不得少于0.10% .茜草药材高效液相色谱方法的建立 、色谱行为描述】 《中国药典》中茜草的含量测定以羟基茜草素、大叶茜草素为质量评价依据，其在Inertsil ODS-3(4.6×250 mm， 5 pm)-色谱特点为：在流动相组成为甲醇-乙腈-0.2%磷酸系统时，流动相的比例对羟基茜草素、大叶茜草素及相邻色谱峰?寸离具有显著的影响，流动相0.2%磷酸的比例在30%左右时，其分离度最好，茜草色谱图中杂质峰较少且与羟基茜草大叶茜草素相比含量很低，因此选择0.2%磷酸比例在29%~31%(v/v)之间可以获得女好的分离度及分析效果；柱温轻基茜草素、大叶茜草素的保留时间及与相邻色谱峰的分离度影响很小。经过考察，在流动相甲醇-乙腈-0.2%磷酸5.为23.3：46.7：30，柱温35℃的色谱条件下能得到满意的分析效果。 茜草 =品来源：本品为茜草科植物茜草Rubia cordifolia L. 的干燥根和根茎。产地：河南。 照品：羟基茜草素(北京大学药学院，含量：97%)，大叶十草素(北京大学药学院，含量： 93%)。 试品溶液的制备：取本品粉末(过二号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，称定三量，放置过夜，超声处理(功率250 W， 频率40kHz)30分钟， 放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50 mL，蒸干， 残渣加甲醇-25%盐酸(4：1)混合溶液20mL，置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，加入三二胺3mL，摇匀， 转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 对照品溶液的制备：取羟基茜草素对照品、大叶茜草素对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1mL含大叶大0.1 mg、含羟基茜草素40pg的溶液，即得。 色谱柱： Inertsil ODS-3(4.6×250 mm， 5 pm) 推荐使用条件范围： 流动相：：甲醇-乙一-0.2%磷酸溶液(23.3：46.7：30)柱温：35℃检测波长：250 nm柱温：35~40℃流 速：：1.0mL/min检测波长：250nm进样量： 10pL流 速：1.0mL/min仪器配置：LC-20ADXR高压泵SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器DGU-20A 脱气机CTO-20AC柱温箱CBM-20A系统控制器 色谱柱： Intersil ODS-3(4.6×250 mm， 5 pm) 流动相；甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液(23~23.7：46~47.3：29-3： SIL-20AC 自动进样器 名称 保留时间 高度 理论塔板 拖尾因子 羟基茜草素 9.622 1086297 84761 13129 1.11 大叶茜草素 41.470 5098673 108989 17854 1.01 羟基茜草素标准曲线 重复性数据如下： 羟基茜草素 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 9.622 1086297 9.592 1254918 2 9.625 1086321 9.595 1257506 3 9.626 1081294 9.641 1253610 Average 9.624 1084637 9.609 1255345 RSD% 0.03 0.27 0.29 0.16 浓度 mg/mL 大叶茜草素标准曲线 大叶茜草素 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 41.470 5098673 42.137 1986084 2 41.687 5105067 42.284 1984360 3 41.900 5100084 42.549 1973688 Average 41.686 5101275 42.323 1981377 RSD% 0.52 0.07 0.50 0.34 浓度 mg/mL *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 流动相：甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液(23.3:46.7:30)柱温：35℃检测波长：250 nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul