三颗针中盐酸小檗碱检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 中国药典2010版对应高效液相色谱图集 三棵针分析 三棵针的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为小檗碱科植物拟猪豪刺Berberis soulieana Schneid.、小黄连刺Berberis wilsonae Hemsl.、细叶小檗Berberis poiretii Schneid. 或匙叶小檗Berberis vernce Schneid. 等同属数种植物的干燥根。春秋二季采挖，出去泥沙和须根，晒干或切片晒干。 【功能与主治】清热燥湿，泻火解毒 【含量测定】 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾(24：76)为流动相；检测波长为265nm。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。 对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含20 mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品本末(过四号筛)约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)60分放，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液溶10pL， 注入液相色谱仪，测定，即得。 2.三棵针药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中三棵针的含量测定以盐酸小檗碱为质量评价依据，盐酸小檗碱在Inertsil ODS-3中的色谱特点为：检测波长在265 nm时盐酸小檗碱吸收较强，色谱图较优；在流动相组成为乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾系统时，流动相的比例对盐酸小檗碱及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，流动相乙腈的比例在24%左右时，其分离度最好，选择乙腈比例在20~30%(v/v)之间均可以获得满意的分离度及分析效果，考虑到分析时间，采用上述色谱柱，优化流动相比例为乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾(24：76)；柱温对盐酸小檗碱的保留也有一定影响，温度越高，保留时间越短，样品在25到45度均有较好的分析效果，考虑到样品的稳定性及分析时间，本次采用35度条件进行测定。 三棵针 样品来源：本品为小檗碱科植物拟猪豪刺Berberis soulieana Schneid. 、小黄连刺Berberis wilsonae Hemsl.、细叶小檗Berberis poiretii Schneid. 或匙叶小檗Berberis vernce Schneid.等同属数种植物的干燥根。产地：湖北 对照品：盐酸小檗碱(上海同田生物技术有限公司，批号：08060363，含量：98%) 供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL， 密塞， 称定重量，超声处理(功率250W， 频率40kHz)60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含20mg的溶液，即得。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163 色谱柱： Inertsil ODS-3(4.6×150 mm， 5 um) 推荐使用条件范围： 流动相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾(24：76) 色谱柱： Intersil ODS-4(4.6×150 mm，5 um) 柱主温：35℃ 流动相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾(20~30：80~70) 检测波长：265 nm 柱温： 25~45℃ 流 速：： 1.0 mL/min 检测波长：265nm 进样量： 10pL 流 速：1.0mL/min 仪器配置： LC-20ADXR高压泵 SPD-M20A二极管列列紫外可见光检测器 CTO-20AC柱温箱 CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC自动进样器 对照品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 盐酸小檗碱 18.084 2935224 67400 4109 1.67 盐酸小檗碱准曲线 重复性数据如下： 盐酸小檗碱 N0. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 18.084 2935224 17.958 7311986 2 18.194 2942290 17.965 7317092 3 18.300 2933891 17.966 7344836 Average 18.193 2937135 17.963 7324638 RSD% 0.59 0.15 0.02 0.24 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6 x 150 mm, 5um)流动相：乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾(24:76)柱温：35℃检测波长：265 nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul