抗体药中抗体、蛋白检测方案(液相色谱柱)

概述 概述 抗体药物的HPLC分析方法-TSKgel@色谱柱应用选择指南一 TOSOH BIOSCIENCE 抗体药物的质量控制与HPLC分析 抗体是一种结构复杂的糖蛋白。即使是天然抗体，其结构也是各不相同。抗体类药物在其生产工艺(培养、分离纯化)或贮存过程中容易导致产品的不均一性，所以在药物研发以及纯化、生产过程中，对抗体药物的定量和定性的分析是非常重要的。 高效液相色谱法 (HPLC)可以对抗体药物以及重组蛋白药物中的不均一性进行有效的分析。比如，分子尺寸排阻色谱法(SEC) 利用分子空间结构的不同，可对多聚体、抗体片段、PEG化蛋白等样品进行有效分析。离子交换(IEC)、疏水相互作用(HIC)、反相(RPC)以及正相 (NPC/HILIC) 色谱法可对抗体中的带电异构体、结构异构体，或者由于糖基化、脱酰胺化和氧化等作用引起的杂质进行高分辨率的分析。 抗体(IgG)的结构 >I尺寸排阻色谱法 抗体 (IgG) 的分子量约为150kDa左右，根据分子量大小来对抗体体聚体、多聚体(三聚体或三聚体以上)以及抗体降解产物进行分离、定量时，可使用TSKgel G3000SWx.或TSKgel SuperSW3000等色谱柱。如要同时分离二聚体、单体及抗体降解产物，则推荐使用分离性能更高的TSKgel SuperSW mAb HR这款色谱柱。如果是候选药物筛选这种需要在短时间内完成大量分析的情况下，则推荐使用TSKgel SuperSW mAbHTP(柱长15 cm)， 可以在5分钟以内完成分离(图2)。为确保抗体药物的安全性，对多聚体的分析检测是非常重要的。 如果现有的SEC色谱柱无法很好地分离出三聚体以上的多聚体时，推荐使用TSKgel UltraSW Aggregate， 这款色谱柱的排阻界限比TSKgelG3000SWx.更高，非常适合用来分析抗体多聚体。使用SEC 法来分离蛋白质等生物大分子样品时，可通过降低流速来提升分离度。 >离子交换色谱法 抗体纯化产物中，即使是分子量相同的组分也可能存在电荷异异体(脱脱胺化、末端氨基酸突变)和糖链构造异构体等杂质。为了分析这些组分可以考虑使用离子交换色谱(IEC)分析柱。对于抗体药物电荷异构体的分析，使用TSKgel CM-STAT或TSKgel SP-STAT色谱柱，可实现高分辨率、快速的分析。近来，结合使用SEC和IEC分析法进行抗体药物的品质管理工作日趋重要。 >疏水相互作用色谱法 疏水相互作用色谱法(HIC)也能够有效分离抗体的结构同分异构体等。再抗体药物中，对于一些由于等电点相同而无法通过离子交换色谱法实现分离的，但表面疏水性有差异的结构同分异构体、二聚体和多聚体等，则可以考虑使用疏水色谱法来实现分离。并且疏水色谱法也可用于抗体的降解产物分析。如果需要使用HIC法进行快速分析时，则推荐使用TSKgel Butyl-NPR色谱柱。 抗体-药物偶联物(Antibody-drug conjugate； ADC)是一类新颖的抗体药物，近年来成为研发的热点， ADC 是将多个小分子药物化学连接到抗体分子的不同位点，结合部位以及结合数量的不同会导致不均一性。然而小分子药物比抗体分子具有更高的疏水性，所以利用HIC法可检测ADC药物的不均一性。 反相色谱法 反相色谱法(RPC)是利用化合物与疏水官能团之间疏水作用的不同而进行分离的色谱模式。 TSKgel Protein C4-300色谱柱可用于分析还原后的抗体重链轻链以及其它的降解产物。 >亲水相互作用色谱法 亲水相互作用色谱法(HILIC)是一种对高亲水性化合物保留、分离的色谱模式。常用于亲水性低分子、核酸、糖类等化合物的分离分析。TSKgel Amide-80和TSKgel NH2-100等色谱柱可用于分析结抗在抗体上的糖链的结构差异性。 亲和色谱法 Protein A层一介以一直以来都被用于单克隆抗体纯化工艺中的捕获阶段。而分析型的Protein A色谱柱可以在研发初期定量细胞培养上清液中的单克隆抗体浓度，便于对稳定克隆细胞株的筛选以及对上游工艺过程更好的监控。 另外，硼酸盐亲和色谱法可用于对糖或者糖蛋白等生物大分子进行分离。 表1.抗体药物HPLC分析方法的主要分离模式及其特长 分离模式 分离原理 特长及用途 色谱柱 尺寸排阻色谱法(SEC) 分子的空间尺寸 适用于抗体的单体与多聚体(二聚体以上)的分离，或者单体与抗体降解产物的分离。有时也可将两根色柱串联起来使用。 TSKgel UP-SW 3000TSKgel SuperSW mAb HTPTSKgel SuperSW mAb HRTSKgel UltraSW AggregateTSKgel G3000SWx.TSKgel SuperSW3000 离子交换色谱法 (IEC) 分子的离子性 根据抗体带电荷的差异来实现带电异构体的分离。此类色谱柱采用了非多孔类填料，可以获得高分辨率、快速的分析。 TSKgel CM-STATTSKgel SP-STAT TSKgel Q-STAT 疏水相互作用色谱法(HIC) 分子的表面疏水性 根据抗体表面的疏水性差异实现分离。特别适用于分离无法通过IEC获得分离的结构同分异构体。 TSKgel Butyl-NPR TSKgel Phenyl-5PW 反相色谱法(RPC) 分子的疏水性 适用于抗体片段的分析 TSKgel Protein C+-300 亲水相互作用色谱(HILIC) 分子的亲水性 适用于分离糖基化的抗体结构同分异构体。 TSKgel Amide-80TSKgel NH2-100 亲和色谱法(AFC) 分子间的特异结合能力(亲和力) 细胞培养液中抗体浓度的定量分析。也适用于对糖化和未糖化的抗体异构体进行分离。 TSKgel Protein A-5PW TSKgel Boronate-5PW 尺寸排阻色谱法 针对抗体药物在生产过程中容易产生的二聚体、多聚体及抗体片段，通常采用尺寸排阻色谱法(SEC)的原理来将其从抗体单体中分离出来。东曹公司的色谱柱产品中用于分析抗体药物的产品如表2所示。 表2.抗体分析用TSKgel尺寸排阻色谱柱产品 U最新上市HPLC色谱柱 抗体分析用常规HPLC色谱柱 色谱柱 UP-SW 3000 UltraSW Aggregate SuperSW mAb HR G3000SWx. 色谱尺寸 4.6 mm I.D. x 15 cm 4.6 mm I.D. x30 cm 7.8 mm I.D. x 30 cm 粒径 2 pm 3 pm 4 pm 5 pm 孔径 25 nm 30 nm 25nm 分离范围(蛋白质) 10k-500 kDa 10k-2.000kDa 10k-500 kDa 应用 抗体的超高速分析 (二聚体/单体) 抗体超高分辨率分析 (二聚体/单体/片段) 抗体高分辨率分析 (多聚体) 抗体高分辨率分析 (二聚体/单体/片段) 适合分离常规的 蛋白样品。 抗体药物的分离分析 色柱 ：A. TSKgel G3000SWx. B. TSKgel SuperSW mAb HR C. TSKgel UltraSW Aggregate尺寸：7.8mmLD.x30 cm流动相：0.2mol/L 磷酸缓冲液(pH6.7)+0.05%NaN3 进样量：10pL 样品：鼠-人嵌合抗体IgG TSKgel SuperSW mAb HR色谱柱分离抗体药物的二聚体和单体的效果优异。同时也可以针对片段进行分离。TSKgel UltraSW Aggregate色谱柱针对抗体药物的三聚体和二聚体的分离效果卓越。对多聚体分离的时间窗口较其他色谱柱更宽。 抗体药物的超高速分析 色谱柱：TSKgel SuperSW mAb HTP (4.6 mm 1.D.x15cm)流动相：0.2mol/L磷酸缓冲液 (pH 6.7)+0.05%NaNs流速 ： 0.5mL/min(上段)、0.35 mL/min(下段)检温进样量 ：10pL 样品：R-人嵌合抗体IgG TSKgel SuperSW mAb HTP色谱柱可在短时间内(3min)将单的单体和二聚体完全分离开。在通用的HPLC条件下无需很高的柱压就可实现快速分析。 色谱柱 ： A) TSKgel UP-SW3000，2 pm (4.6 mm I.D. x15 cm).B)市售UHPLC-SEC 色谱柱 1.7 pm (4.6 mmI.D. x15 cm)流动相 ：100mmol/L磷酸盐冲液 (PH6.7)+100mmoV/L Na2SO4+0.05%NaN3流速 ： 0.35 ml/min温 度：25℃检测器： UV 280 nm进样量 ：5L样品：鼠-人嵌合抗体LgG峰，1.三聚体；2.二聚体；3.单体；4.片段 尺寸排阻色谱柱UHPLC/HPLC系统兼容色谱柱 分析柱 产品编号 产品名称 粒径 色谱柱尺寸 分子量排阻界限 (对蛋白质) 0023449 TSKgel UP-SW3000 2pm 4.6 mmI.D.x15 cm 800 kDa 0023448 TSKgel UP-SW3000 2pm 4.6mm l.D.x15 cm 800 kDa 产品编号 产品名称 色谱柱尺寸 备注 0023450 TSKgel guardcolumn UP-SW 4.6mm l.D.x2cm 出口端配有连接头 0023451 TSKgel guardcolumn UP-SW DC 4.6mm l.D.x2 cm 800 kDa 抗体分析用SW系列色谱柱 分析柱 产品编号 产品名称 色谱柱尺寸 分子量排阻界限 (对蛋白质) 0022854 TSKgel SuperSW mAb HR 7.8mml.D.x30cm 5×10 0022855 TSKgel SuperSW mAb HTP 4.6 mmI.D.×15cm 5×105 0022856 TSKgel UltraSW Aggregate 7.8 mmI.D.×30cm 2.5×10 保护柱 对应分析柱的产品编号 产品编号 产品名称 色谱柱尺寸 (产品编号) 0022857 TSKgel guardcolumn SuperSW mAb 6.0mm I.D.×4 cm 0022854 0022858 TSKgel guardcolumn SuperSW mAb 3.0mm I.D.x2 cm 0022855 0022859 TSKgel guardcolumn UltraSW 6.0 mm I.D.x4cm 0022856 经典款SW系列色谱柱 分析柱 货号 产品名称 粒径 色谱柱尺寸 分子量排阻界限 (对蛋白质) TP/30cm 0018674 TSKgel SuperSW2000 4pm 4.6mm I.D.x 30 cm 1×105 30，000* 0021845 TSKgel SuperSW3000 4pm 1.0 mm I.D.x 30 cm 5×105 18，000** 0021485 TSKgel SuperSW3000 4 pm 2.0 mm I.D.x 30 cm 5×10 25，000** 0018675 TSKgel SuperSW3000 4pm 4.6 mm I.D.x30 cm 5×10 30，000* 0008540 TSKgel G2000SWx. 5pm 7.8 mm I.D.x 30 cm 1×10 20.000 0008541 TSKgel G3000SWxL 5pm 7.8mml.D.x30 cm 5×105 20.000 0008542 TSKgel G4000SWx. 8pm 7.8mm I.D.x 30 cm 7×10°(推算) 16，000 出货状态： 0.1 mol/L的磷酸盐+0.1 mol/L的硫酸钠+0.05%的叠氮钠(pH6.7) ·使用半微量 HPLC系统测得 …使用毛细管液相系统测得 注意事项： 4.6 mm 内径的色谱柱适用于半微量HPLC系统；2.0和1.0mm内径的色谱柱适用于半微量或者毛细管液相系统。 普通液相系统可能无法发挥出SuperSW色谱柱的最佳效果。 货号 产品名称 色谱柱尺寸 出货溶剂 备注 0018762 TSKgel guardcolumn SuperSW 4.6 mm l.D. x 3.5 cm SuperSW系列产品配套用 0008543 TSKgel guardcolumn SWx. 6.0 mm l.D. x 4 cm ★ SWx. 系列产品配套用 0008544 TSKgel topoffgel SWx. 0.05%的叠氮钠溶液 SWx 填补用柱料，1mL装 ·0.1mol/L的磷酸盐 +0.1 mol/L的硫酸钠+0.05%的叠氮钠(pH6.7) 注意事项：货号为0018762的保护柱仅适用于4.6mm内径的TSKgel SuperSW系列分析柱。 离子交换色谱法 单克隆抗体的分离离离子交换色谱法(pH梯度) min min 色谱柱：：TSKgel SP-STAT (4.6 mm I.D.x10 cm)， TSKgel CM-STAT (4.6 mm I.D.x10 cm)淋洗液：A； 10 mmol/L NaCl+20 mmol/L MES+20 mmol/L HEPES (pH 5.4) B； 10 mmol/L NaCl+20 mmol/L MES+20 mmolL HEPES (pH9.0) A →B 30 min 流速： 1.0mL/min UV (280 nm) 样品： 单克隆抗体药物 订购信息 离子交换色谱柱 分析柱 货号 产品名称 粒径 色谱柱尺寸 离子交换容量 出货时离子对 0021961 TSKgel Q-STAT 7pm 4.6 mm I.D.x10.0 cm 270peq/g-drygel Cr 0021960 TSKgel Q-STAT 10 pm 3.0 mm I.D.x 3.5 cm 270peq/g-drygel ci 0021964 TSKgel SP-STAT 7 pm 4.6 mm l.D.x10.0 cm 23peq/g-drygel Na+ 0021963 TSKgel SP-STAT 10 pm 3.0 mm I.D.x 3.5 cm 23peq/g-drygel Na+ 0021966 TSKgel CM-STAT 7 pm 4.6 mm l.D.x10.0 cm 100peq/g-drygel Na+ 0021965 TSKgel CM-STAT 10 pm 3.0 mml.D.x 3.5 cm 100peq/g-drygel Na+ 0013075 TSKgel DEAE-NPR 2.5 ipm 4.6 mm l.D.x 3.5 cm Approx. 0.1 eq/L CI 0018249 TSKgel DNA-NPR 2.5pm 4.6 mm I.D.x 7.5cm Approx.0.1 eq/L 0013076 TSKgel SP-NPR 2.5 pm 4.6 mm1.D.x 3.5 cm Approx.0.1 eq/L Na+ 0021942 TSKgel SP-NPR 2.5 pm 0.3 mm I.D.x 5.0 cm Approx.0.1 eq/L Na+ 出货溶剂：水 对痕量级别的多种蛋白均有很高的回收率 在很宽的pH值范围内化学稳定性好 HIC法分离曲妥珠单抗和ADC药物 单抗药物中被氧化的甲硫氨酸残基的分析 订购信息 疏水色谱柱 > 特点 由于采用了无孔型2.5pm小粒径的填充剂，该款色谱柱针对蛋白质、抗体和酶等生物大分子具有高速(3.5cm柱)、高分辨率(10cm柱)的分离性能 可对离子交换色谱法无法分离的蛋白质结构异构体进行分离 分析柱 货号 产品名称 粒径 色谱柱尺寸 主要特点 0014947 TSKgel Butyl-NPR 2.5 pm 4.6 mm l.D.x3.5 cm 快速分析型 0042168 TSKgel Butyl-NPR 2.5 pm 4.6 mmI.D.x 10 cm 高分辨率型 反相色谱柱Protein C4-300系列 > 特点 单克隆抗体的木瓜蛋白酶酶切产物的分离 色谱柱： TSKgel SuperSW3000 (4.6 mml.D.x30 cm) 流动相：0.2mol/L磷酸缓冲液(pH6.7)+0.05%叠氮钠 速： 0.35 mL/min 检 测：UV (280 nm) 度：25℃ 进样量：5pL 品：单克隆抗体(mAb)的木瓜蛋白酶酶切产物 色谱柱： TSKgel Protein C4-300 (4.6 mml.D.x15 cm) 流动相：A； H2O/CH3CN/TFA=90/10/0.05(v/v/v)B； H2O/CH3CN/TFA=20/80/0.05(v/v/v)梯度：B液0%(0min)→100% (45 min) 温流检 进样量： 100pL 样品：F(ab)2片段，Fab+Fc片段 度：50℃ 速：1.0mL/min 测：UV(215nm) 使用TSKgel Protein C4-300色谱柱对SEC法分离出来的单抗的木瓜蛋白酶酶切产物进一步分析，可检测出多种疏水性各异的组分。 色谱柱： TSKgel Protein C4-300 (4.6 mm I.D.x15 cm) 流动相A： H2O/ACN/TFA=90/10/0.05(v/v/v) 流动相B： H2O/ACN/TFA=20/80/0.05(v/v/v) 1.00 mL /min 栈度0%B (0 min)-100 %B (45min)速测度 UV 215 nm 50℃ 100 pL品： mAb-1(佩单抗)， mAb-2(单抗)都通过DTT还原 ·mAb-1和-2用DTT还原， 切成重链和轻链结构。随后用 TSKgel Protein C+-300进行分离。·mAb-1和-2在疏水性质上有些许差异。 ·mAb-1重链上的一个亲水性变体被观察到。 Time [min] 订购信息 反相色谱柱 分析柱 货号 产品名称 色谱柱尺寸 粒径 0022834 TSKgel guardgel Protein C4 2.0 mm l.D.x 1cm 2.0mm I.D.色谱柱用 0022833 TSKgel guardgel Protein Ca 3.2mml.D.x1.5 cm 4.6 mmI.D.色柱柱用 0019308 2.0 mm I.D.柱芯用保护柱套 一 3pm 0019018 3.2 mm I.D.柱芯用保护柱套 2.0 mm I.D.x15 cm 一 0022827 TSKgel Protein C4-300 4.6 mm I.D.x 5cm 3 pm 0022828 TSKgel Protein C4-300 4.6 mmI.D.x10 cm 3 pm 0022829 TSKgel Protein C4-300 4.6 mmI.D.x15 cm 3 pm ·TSKgel guardgel 为柱芯形式(3根/盒)，必须与保护柱套配套使用。 特点 ●2pm/3pm/5pm粒径硅胶基质填料，键合了氨基甲酰官能团。 独特的分离选择性。极性强的化合物被保留。 与传统氨基柱相比，稳定性大大提高。 可用于亲水性化合物的分离，如寡糖、寡核苷酸、多肽、药代产物。 寡糖的分离 Timo [min) IgG2s的糖链构造异构体的分析 色谱： TSKgel Amide-80 3pm，2.0 mmIDx15cm 流动相A： 200mmol/L酸+三乙胺 pH 7.3 流动相B：乙腈 度： 75%B(0-5min)，75-50%(5-80min，linear)： 0.5mUmin 度：40℃ 测：荧光(ex.315nm，em.380nm) 品：单抗上的PA化寡糖 订购信息 亲水色谱柱 UHPLC/HPLC 系统兼容色谱柱 产品编号 产品名称 粒径 色谱柱尺寸 0023454 TSKgel Amide-80 2pm 2.0 mmI.D.x5cm 0023455 TSKgel Amide-80 2 pm 2.0mm l.D.x10 cm 0023456 TSKgel Amide-80 2 pm 2.0mm I.D.x15 cm 0023457 TSKgel Amide-80 2 pm 3.0 mml.D.x 5 cm 0023458 TSKgel Amide-80 2pm 3.0 mmI.D.x10 cm 0023459 TSKgel Amide-80 2 pm 3.0 mmI.D.x15 cm 产品编号 产品名称 粒径 色谱柱尺寸 0023460 TSKgel guardcolumn Amide-80 2 pm 2.0 mm I.D.x 5 cm 货号 产品名称 粒径 色谱柱尺寸 出货溶剂 0019694 TSKgel Amide-80 5 pm 5 pm 2.0 mmI.D.x 5 cm 乙腈/水=75/25 0019695 TSKgel Amide-80 5 pm 5 pm 2.0 mmI.D.x10 cm 乙腈/水=75/25 0019696 TSKgel Amide-80 5 pm 5 pm 2.0 mm I.D.x15 cm 乙腈/水=75/25 0019697 TSKgel Amide-80 5 pm 5 pm 2.0 mm I.D.x25cm 乙腈/水=75/25 0019532 TSKgel Amide-80 5 pm 5 pm 4.6mmI.D.x 5 cm 乙腈/水=75/25 0019533 TSKgel Amide-80 5 pm 5 pm 4.6 mm I.D.×10 cm 乙腈/水=75/25 0013071 TSKgel Amide-80 5 pm 5 pm 4.6 mmI.D.x25 cm 乙/水=75/25 0021982 TSKgel Amide-80 HR 5 pm 5 pm 4.6 mm l.D.×25 cm 乙腈/水=85/15 分析柱(高分辨率型) 货号 产品名称 粒径 色谱柱尺寸 出货溶剂 0021982 TSKgel Amide-80 HR 5 pm 5pm 4.6mm l.D.x25 cm 乙腈/水=85/15 保护柱和柱套 货号 产品名称 粒径 色谱柱尺寸 对应的色谱柱 0021862 TSKgel guardgel Amide-80 3pm 2.0 mmI.D.x 1 cm 2.0mm内径的分析柱 0021863 TSKgel guardgel Amide-80 3 pm 3.2 mm I.D.x1.5 cm 4.6mm内径的分析柱 0021941 TSKgel guardgel Amide-80 5 pm 2.0mml.D.x1 cm 2.0mm内径的分析主 0019010 TSKgel guardgel Amide-80 5 pm 3.2 mm I.D.x1.5 cm 4.6mm内径的分析柱 Amide-80HR 5pm分析柱 0019308 Cartridge holder (2.0×1用) 二 0019018 Cartridge holder (3.2×1.5用) 一 0019021 TSKgel Guard Amide-80 5 pm 4.6 mmI.D.x1 cm 一体式保护柱 注意事项：TSKgel guardgel是柱芯(一套3支)，并且需要与柱套配合使用。 多孔亲水性聚合物基质填料 免疫球蛋白IgG (粒径： 20 pm、孔径： 100 nm ) ●色谱柱填料为多孔亲水性聚合物基质，表面键合重组Protein A配基 耐受高流速，可实现高通量分析(4.0 mL/min流速下1分钟内完成分析) IgG定量范围宽，适用于不同工艺阶段的单克隆抗体滴度分析 色谱柱使用寿命长。取10 g/L浓度细胞培养液连续进样2000针以上，色谱峰形和校正曲线几乎没有变化。 分析柱 货号 产品名称 粒径 色谱柱尺寸 柱身材质 官能团 0023483 TSKgel Protein A-5PW 20 pm 4.6 mm I.D. x3.5 cm PEEK 重组Protein A 0013066 TSKgel Boronate-5PW 10 pm 7.5 mm I.D.x7.5 cm 不锈钢 3-氨基苯硼酸 TOSOH CORPORATIONBIOSCIENCE DIVISION Address： Shiba-Koen First Bldg. 3-8-2 Shiba， Minato-Ku， Tokyo 105-8623，Japan TEL：+81-3-5427-5180FAX：+81-3-5427-5220 E-mail： hlc@tosoh.co.jp Website： www.separations.asia.tosohbioscience.com TOSOH BIOSCIENCE LLC Address： 3604 Horizon Drive， Suite 100 King of Prussia， PA 19406， USA TEL：+1-484-805-1219 FAX：+1-610-272-3028 E-mail： info.tbl@tosoh.com Website： www.tosohbioscience.com TOSOH BIOSCIENCE GmbH Address： Zettachring 6，70567 Stuttgart， Germany TEL： +49-711-13257-0FAX：+49-711-13257-89E-mail： Info.sep.eu@tosohbioscience.comWebsite： www.tosohbioscience.com TOSOH ASIA PTE. LTD Address： 63 Market Street #10-03 Singapore 048942TEL：+65-6226-5106 FAX： +65-6226-5215 E-mail： Info.tsas@tosoh.com Website： www.separations.asia.tosohbioscience.com 东曹(上海)生物科技有限公司 地址：上海市虹梅路1801号A区凯科国际大厦10楼01室 电话：+86-21-3461-0856 传真：+86-21-3461-0858 电邮： info@tosoh.com.cn 网址： www.separations.asia.tosohbioscience.com HLC、TSK-GEL、TSKgel、BioAssist、EcoSEC、Enantio、Enviropak、TOYOPEARL、TOYOPEARLMegaCap、ToyoScreen、TOYOPEARLPAK 和 TOYOPAK均是 TOSOH公司的注册商标。 未经TOSOH公司书面同意，本产品目录中的内容不得全部或部分使用或复制。 产品目录的内容可能会随时发生更改，恕不另行通知。 TOSOH公司版权所有 抗体是一种结构复杂的糖蛋白。即使是天然抗体，其结构也是各不相同。抗体类药物在其生产工艺（培养、分离纯化）或存储过程中容易导致产品的不均一性，所以在药物研发以及纯化和生产过程中，对抗体药物的定量和定性的分析是非常重要的。 高效液相色谱法（HPLC）可以对抗体药物以及重组蛋白药物中的不均一性进行有效的分析。比如，尺寸排阻色谱法利用分子空间结构的不同，可对多聚体、抗体片段、PEG化蛋白等样品进行有效分离。离子交换、疏水、反相以及正相色谱法可对抗体中的带电异构体、结构异构体，或由于糖基化、托酰胺化和氧化等作用引起的杂质进行高分辨率的分析。 本目录汇总了SEC/IEC/HIC/RPC/HILIC法分析抗体药物的应用实例，同时也涵盖了最新最全的TSK色谱柱产品的选择指南。