蛋白中聚集检测方案

蛋白及其聚集情况的检测 在各个领域，溶液中的蛋白质的绝对表征都是很重要的，也是必须的。例如：在药品和生物技术中，以蛋白质为基础的产品都必须很准确，不存在聚集。多角激光光散射（MALS）是测量溶液中蛋白质分子量的理想方法。这是一种非常灵敏的方法，可以检测到是否有聚集存在，形成了多少聚集体，因为光散射的反应直接正比于被测量样品的重均分子量，是浓度的倍数。 当miniDAWN（或DAWN）用作HPLC的在线检测器时，不用柱子校准，不用参考标样，可直接得到所洗脱蛋白质的分子量，而且是蛋白质在溶液中的分子量。由这些数据可知蛋白质是以单体存在，还是二聚体，或是以一个很高的聚集态存在。 图1是BSA（牛血清蛋白）的miniDAWN和示差信号。HPLC色谱条件是0.05M磷酸和0.1M Nacl溶液。一台Optilab DSP示差干涉仪作为示差检测器。用HP的液相色谱仪，流速定在1.0ml/min. Shodex色谱柱（KW-803和KW-804）。从图可看出，虽然牛血清蛋白BSA样品是“单体”标样，但miniDAWN仍能很清楚地检测到聚集（二聚体和三聚体），这对示差检测器来说几乎是看不到的。 图2是人血清蛋白（HAS）的Debye图，可以很清楚地看出MALS检测器的功能是多么强大，它不但可以测分子量，还可测聚集体的大小。这里选了一个切片，这一切片聚集体的分子量是1.5×106g/mol, 旋转半径是23纳米，而非聚集单体的重均分子量是7.5×104g/mol, 旋转半径在测量极限以下。 图1。牛血清蛋白的聚集情况，聚集态的分子量可以很精确地由miniDAWN测得。 图2。人血清蛋白聚集态的分子量和分子尺寸都可以得到测量，这里它的旋转半径约为53纳米。