膜蛋白中绝对分子量检测方案(激光光散射仪)

DAWN@，ASTRA，OPTILAB@，and the Wyatt Technology logo are registered trademarks of Wyatt Technology Corporation.@ 2009 wyatttechnology corporation 9/24/09 光散射法用于膜蛋白结构研究 膜蛋白和脂质体组成生物膜，生物膜对生命起着重要的作用。为了弄清膜蛋白在组成生物膜中所起的作用及功能，了解膜蛋白的结构非常重要。 膜蛋白通常只溶解在胶束溶液中，因此表征脂质体溶剂中低聚态的膜蛋白相当困难。本文利用多角度激光光散射仪 (MALS)、紫外检测器(UV)与示差折光检测器(DRI)联用技术测定蛋白核、脂质体胶束、蛋白-脂质体复合物分子量以及各组分的含量。 图1是膜蛋白经 SEC 色谱柱分离后的色谱图。其测定系统统成为： DAWN MALS 多角度激光光散射仪、(280nm)紫外检测器、示差折光检测器。 为了保持溶液状态的膜蛋白，必须使含有脂质体膜蛋白在流动相中的浓度比其临界胶束浓度高。因为膜蛋白-脂质体配合物具有与标准球蛋白非常不同的构型，所以它们对色谱柱填料也有非常不同的吸附特性以及洗脱特征曲线。因此，采用传统的色谱柱校准法依据洗脱时间来确定膜蛋白的分子量所得数据可信度极大降低。 而采用 MALS、UV 和 DRI联用技术可测得膜蛋白核、脂质体胶束及蛋白-脂质体复合物的分子量。如图2所示。此图表明蛋白-脂质体复合物中的膜蛋白是以单体状态存在(分子量为62kDa)。 本实验清晰的表明 MALS、UV和 DRI联用技术是一种独特的、功能强大的表征膜蛋白的手段；不仅如此，该方法同样适用于表征蛋白类修饰复合物，如：聚乙二醇 PEG 蛋白、糖基化蛋白等。 This note graciously submitted by David Veesler， Architecture etFonction des Macromolecules Biologiques， Unite Mixte de Rech-erches UMR6098， CNRS， de Provence Universite de laMediterranee， Marseille France. 图1：表示膜蛋白的 MALS(上)、UV(中)以及DRI(下)的色谱图信号