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类固醇激素是一类脂溶性小分子激素，是由胆固醇经一系列酶催化而来，可分为肾上腺皮质激素和性激素两类，在维持机体正常内分泌，调节性功能、机体发展、免疫调节及生育控制方面有明确的作用。人体内类固醇激素的升高或者降低与一些临床疾病，如，先天肾上腺增生、多囊卵巢综合症、内分泌紊乱、肾上腺皮质功能及（3,17和21）羟化酶缺乏症等息息相关。各个类固醇激素作为代谢网络中的节点相互影响，如能详尽表征代谢网络上下游中各激素的含量变化情况，对临床疾病的确诊、机体内分
泌状态的监控等具有种重要意义。
临床传统方法采用放射免疫或ELISA试剂盒方法进行激素检测，可能存在抗原抗体假阳性干扰，低浓度水平激素测定不准确等问题。且临床对于不同激素检测方式不同，多激素全面检测所需血液量较大，增加患者负担。液质联用法具有特异性强，检测灵敏度高，适合高通量测定等优点，因此，建立一种基于液质法的同时准确测定多种类固醇激素的分析方法，对于临床相关疾病的诊断具有重要的指导意义。
本方法基于SCIEX 液相色谱串联质谱系统，采用同位素内标校正法，建立了一次分析，同时准确检测血清中20种类固醇激素的定量方法。
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样品前处理 本实验采用沉淀蛋白结合SPE固相萃取法对血清中20种激素
进行处理，具体步骤如下。
提取：准确量取200 μL样品于1.5 mL塑料离心管中，加入20 μL
同位素内标混合工作溶，200 μL甲醇，涡旋1 min，加入200 μL水，
涡旋1 min，10000 rpm离心5 min，取上层溶液待用。
净化：取SPE柱（Cleanert PEP 96 Well Microplates：2 mg），
依次用200 μL甲醇活化，200 μL水平衡。取提取后上清液350 μL，
加载至SPE柱，弃去滤液；依次用200 μL 10 %乙腈水溶液和200 μL
正己烷进行淋洗，弃去淋洗液；加入30 μL洗脱溶剂进行洗脱，收
集洗脱液，用10 %乙腈水溶液稀释至200 μL，混匀待测。色谱条件 色谱柱：Kinetex® C18（2.6 μm，3.0×100 mm）；
流动相：A为0.5 mM氟化铵水溶液
B为甲醇，洗脱流程如表1；
流速：0.6 mL/min；
柱温：40 ℃；
进样体积：20 μL。质谱条件 电离方式：电喷雾离子源，正负离子同时采集；
检测方式：分时间窗口 (schedule)，多反应监测 (MRM)；
离子源温度 (TEM): 600℃;
雾化气 (Gas1): 60 psi;辅助气 (Gas2): 60 psi；
气帘气 (Gurtain Gas): 35 psi;
电喷雾电压：5500V (+) / -4500V (-)；
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艾杰尔飞诺美为您提供《液相色谱串联质谱法测定血清中20种类固醇激素》，该方案主要用于全血/血清/血浆中生化检验检测，参考标准--，《液相色谱串联质谱法测定血清中20种类固醇激素》用到的仪器有Kinetex® 2.6 µm C18 100 ÅC18(ODS)柱00D-4462-Y0
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