LC-MS/MS测定水产品中安眠酮残留量

本文参考GB 31656.5-2021食品安全国家标准，使用岛津三重四极杆液质联用仪LCMS-8060NX建立了水产品中安眠酮测定的方法。在0.1-100 ng/mL浓度范围内，方法线性良好，线性相关系数R 为0.9994，曲线各浓度点准确度在94.2%-104.4%之间。对样品进行0.2、2.5和25 μg/kg三个浓度加标回收实验，回收率在89.7%-91.9%之间。该方法灵敏度高，准确度高，简单快速，适用于水产品中安眠酮药物的检测。SSL-CA23-106Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-762 LC-MS/MS 测定水产品中安眠酮残留量 LCMSMS-762 摘要：本文使用岛津三重四极杆液质联用仪建立了水产品中安眠酮 测 定的方法。实验结果表明，在0.1-100ng/mL浓度范围内，方法线性良好，线性相关系数R为0.9994，曲线各浓度点准确度在94.2%-104.4%之间。0.4ng/mL 浓度对照品溶液，连续进样6次，保留时间和峰面积的相对标准偏差 (RSD%)分别为 0.12%和1.52%。0.2、2.5和25 ug/kg三个不同浓 度 加标回收率在89.7%-91.9%之间，平 行三份样品的相对标准偏差(RSD%)在 2.14%-3.63%之间。该方法简单，稳定，准确，供相关人员参考。 关键词：：三重四极杆液质联用仪 水产品 安眠酮 技术特点： 必满足 GB 31656.5-2021食品安全国家标准要求，灵敏度更高。 安眠酮，又名甲喹 酮 ，被列入第一类精神药品管控，主要作用于大脑皮层，具有镇静和催眠作用，临 床上用 于失眠、神经 衰 弱及麻醉前给药。此药物的副作用主要 包括头昏嗜睡，皮疹，口、舌、四肢发麻及短暂的精神 失常等，个别患者会有心悸、恶心、呕吐、全 身无力等 症状，过量中毒可引起呼吸抑制，长期使用本品可产生 耐受性和依赖性。 近年来，随着人们生活水平的提高，对水产品的需 求量逐年递增， 一些不法分子在经济利益的驱动下，为 达到保活、保重以及增加捕获量的目的，在水产品养殖、运输 和 捕捞过程中擅自在饲料中非法添加安眠酮 ，导 致 该药物在水产品中残留，给人民群众身体健康带来安全 隐患。我国农业农村部在2020年1月6日发布的农业 农村部公告第250号明确规定，食品动物中禁止使用安 眠酮药物。 目前安眠酮的检测方法主要有 气 相色谱-质谱联用 法、光谱法、液相色谱法和超高效液相色谱-质谱联用 法等。本文参考 GB 31656.5-2021食品安全国家标准，采用岛津三 重 四 极杆液质联用仪，建立了水产品中安眠 酮测定的方法，该方法简单，稳定，灵敏度高，抗假阳 性 能力强，供相关检测人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津在线自动前处理仪 CLAM-2030 和岛津质谱 LCMS -8050， 具体配置如下： 系统控制器：CBM-40脱 气 机：DGU-405输液 泵 LC -40B X3自动进样器：SIL -40C X3柱温 箱：CTO-40S 色谱工作站：LabSolutions Ver. 6.108质谱检测器 号：LCMS-8060NX 1.2分析条件 液相色谱条件： 色谱柱：Shim-pack Velox C18 (100 mm × 2.1 mm l .D.，2.7 um)，P/N：227-32009-03，岛津(上海)实验器材有限公司 流 动 目： A相-0.1%甲酸水溶液；B相-甲醇 流 柱 相 速 温 品：40℃进样器温 度 ：15°℃ ：：0.3 mL/min 进样体积 1uL 洗脱方式： 梯度洗脱，B相初始浓度为50%，时间程 序 见表1。 表 1 梯度洗 脱 时间程序 Time(min) Module Command Value 1.00 Pumps Pump B Conc. 50 2.00 Pumps Pump B Conc. 95 3.00 Pumps Pump B Conc. 95 3.10 Pumps Pump B Conc. 50 6.00 Controller Stop 质谱条件 离子 源：lonFocus (+) DL温 度：250°℃ 接口电压：11kV 加热模块温度：400°℃ 聚焦电压：22kV 接口温 度：400℃ 雾化气流速：3.0 L/min 碰 撞 气：氩气 加热气流速：15.0 L/min 扫 描 模 式：多反应监测(MRM) 干燥气流速：3.0 L/min MRM 参 数：见表2 表2 MRM 参数 序号 名称 CAS 号 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3 Pre Bias(V) 1 安眠酮 72-44-6 251.1 91.2* -17.0 -42.0 -17.0 132.1 -12.0 -26.0 -26.0 2 安眠酮-D7 136765-41-8 258.1 139.1 -13.0 -28.0 -27.0 注：*表 示 定 量 离子 1.3标准品及样品制备 标准中间液：精密量取安眠酮标准溶液适量，用甲醇稀释配制浓度为 200 ng/mL标准中间液。置-18℃以 下避光保存。 内标工作液：精密量取安眠酮-D，标准溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度为200 ng/mL内标工作液。置-18℃以下避光保存。 校准工作曲线：分别精密量取安眠酮标准中间液和内标工作液适量，用50%甲醇溶液稀释制成含同位素 内标物浓度为 4 ng/mL，安眠酮浓度为 0.1 ng/mL、0.4 ng/mL、1.0 ng/mL、5.0 ng/mL、25 ng/ml、50 ng/mL、100 ng/ml 的 系列标准工作液。 样品制备：取试样5g于50mL 离 心管中，加内标工作液50 pL、水3mL， 涡旋 30 s， 加正已烷15mL，振荡提取3 min， 超声 5 min， 4500 r/min 离心7 min， 取正已烷层至25 mL容量瓶；残渣再加正已烷8mL，重复提取一次，合并正 已 烷提取液，并用正已烷稀释定容至刻度，备用。取硅胶固相萃取柱，依次用丙酮5mL、正已烷5 mL活化。量取备用液 10 mL过柱，用20%乙醚一正已烷淋洗液5mL淋洗。用50%乙醚一正 已烷混合溶液8mL洗脱，收 集 洗脱液，40℃氮气吹干。准确加入50%甲醇溶液1mL溶解残余物，用水相针 式滤器过滤至进样小瓶中，上机测定。 结果与讨 论 2.1色谱图 图 1 安眠 酮 标准品溶液 MRM 色谱图 (1.0ng/mL) 2.2校准曲线结果 按照1.3制备0.1、0.4十 、、11.0、5.0、25、50、100 ng/mL 标准系列工作溶液，使用内标法拟合工作曲线，校 准曲线见图2，相关系数R=0.9994。各浓度点线性回归的准确度、信噪比、定量限等结果见表3。曲线各标点 准确 度 在 94.2%-104.4%， 0.1ng/mL标准溶液 的 S/N 为 51.42。 图 2 安眠酮校准曲线 表3 校准曲线结果 Data# 数据文件名 保留时间 面积 浓度 (ng/mL) 标准浓度 精确度% S/H 定量限 1 0.1ppb.lcd 2.555 53，500 0.099 0.1 98.8 51.42 0.02 2 0.4ppb.lcd 2.550 216，703 0.418 0.4 104.4 167.65 0.02 3 1ppb.lcd 2.552 553，264 1.018 1 101.8 517.66 0.02 4 5ppb.lcd 2.558 2，690，525 4.711 5 94.2 2，015.09 0.02 5 25ppb.lcd 2.558 13，641，953 25.551 25 102.2 27，791.86 0.01 6 50ppb.lcd 2.561 27，260，915 50.173 50 100.3 19，851.12 0.03 7 100ppb.lcd 2.559 49，985，970 98.206 100 98.2 56，882.11 0.02 2.3重复性考察 0.4 ng/mL 浓度对照品溶液，连续进样6次，考察保留时间和峰面积的重复性，结果如表4所示。保留时间 和 峰 面积的相对标准偏差(RSD%) 分别为 0.12%和1.52%，方法精密度良好 。 表4 0.4 ng/mL 安眠酮标准溶液连续6针重复性结果 编号 峰面积 保留时间 1 211056 2.559 2 207665 2.553 3 210489 2.553 4 208364 2.552 5 210079 2.552 6 216703 2.550 平均值 210726 2.553 RSD% 1.52 0.12 2.4加标回收率及重复性考察 取鱼肉空白基质，按照1.3前处理方法，对样品进行低、中、高三个浓度水平加标回收率考察。每个浓度平 行制备三份样品，进行 重复 性考察。低、中、高三个加标浓渡分别为 0.2、2.5和25 ug/kg。三水平加标回收率 及重复性结果见表5。 表5回回收率结果(n=3) NO. 0.2 ug/kg 加标回收率(%) 2.5ug/kg 加标回收率二(%) 25 ug/kg 加标回收率(%) 1 92.4 94.8 89.0 2 88.6 91.2 86.8 3 91.2 89.6 93.2 平均值 90.7 91.9 89.7 RSD% 2.14 2.90 3.63 ■结论 本文参考 GB 31656.5-2021食品安全国家标准，使用岛津三 重 四极杆液质联用仪 LCMS-8060NX建立了水产品中 安眠酮测定的方法。在 0.1-100 ng/mL浓度范围内，方法线性良好，线性相关系数R为0.9994，曲线各浓度 点 准确 度在 94.2%-104.4%之间。对样品进行0.2、2.5和25 ug/kg 三个浓度加标回收实验，回收率在 89.7%-91.9% 之间。该方法灵敏度高，准确度高，简单快速，适用于水产品中安眠酮药物的检测。 岛津应用云