LCMS用于血清中万古霉素治疗药物监测应用

使用岛津小型单四极杆质谱仪LCMS-2050，建立了血清中万古霉素测定方法。使用内标、校准品及质控品进行了方法的线性、准确度及精密度的考察。结果显示该方法线性良好，校准曲线相关系数大于0.999，质控品测定准确度结果与理论值接近，回收率在92.5%~101.1%之间，RSD在1.5%~1.8%之间，该方法前处理简便，分析速度快，灵敏度高，专属性强，可用于万古霉素治疗药物监测。SSL-CA23-074Excellence in Science Excellence in ScienceLCMS-040 LCMS 用于血清中万古霉素治疗药物监测应用 LCMS-040 摘要：使用岛津小型单四极杆质谱仪建立了血清中万古霉素测定方法。使用内标、校准品及质控品进行了方 法的线性、准确度及精密度的考察。结果显 示 该方法线性良好，校准曲线相关系数大于0.999，质 控 品测定准 确度结果与理论值接近，回收率在 92.5%~101.1%之间， RSD 在 1.5%~1.8%之间，该方法前处理简便，分析 速度快，灵敏度高，专属性强，可用于万古霉 素 治疗药物监测。 关键词：小型单四极杆质谱仪 义万古霉 素 治疗药物监测 技术特点： 心使用 LCMS结合检测试剂盒，建立了血清中万古霉素测定方法。 ※前处理使用更简便96孔 蛋白沉淀板，提高了前处理效率。 万古霉素 (Vancomycin) 是一种糖肽类抗生素，传统上，万古霉素被用作“最 后 一线药物”。万古霉 素 对葡萄球 菌 属包括金葡 菌 和凝固酶阴性葡 萄 球 菌 中 甲氧西林敏感及耐药株、各种链球菌、肺炎链球菌及 肠球菌属等多数革兰 阳 性菌均有良好抗菌作用，用来 治疗所有抗生素均无效的严重感染。临床万古霉素使 用量的增加会 导 致细菌对其敏感性发生变化，易诱发 产生耐万古霉素的黄金色葡萄球菌，耐万古霉素的肠 球菌 ，后果十分严重。保持万古霉素血药浓度可避免 耐药菌株产生。因万古霉素治疗窗相对较窄 三 、、个体差 异大、且具有明显的肾毒性，因此在临床应用时，应 定时对其血药浓度检测，及时调整剂量，制定合理的 给药方案以实现 个 体化给药，减少不良反应发生率 。国 际上推荐对应用大剂 量 万古霉素并且使用疗程较长的患 者、肾 功能不稳定(如明显恶化或明显改善)的患者、联合使用其它肾毒性药物的患者、儿童及老人等高风险 人群进行治疗药物监 测 。目前临床上万古霉素血药浓度 测定方法主要有免疫法、直接化学发光法、高效液相色 谱法、高效液相色谱-串联质谱法。而使用 LCMS 法测 定万古霉素少有报道。 本文使用岛津小型单四极杆质谱仪 LCMS-2050，建立了血清中万古霉素 测 定方法，该方法前处理简便，分析速 度 快，灵敏度高 ，专属性强，可用 于 万古霉素治 疗药物监测。 1.1仪器 本实验使用单四极杆质谱 LCMS-2050 系统。具体配置为： 系统控 制 器： CBM-40 在线脱气机： DGU-405 输 液 泵 LC -40D XS×2 柱温 箱：CTO-40C 。.自动进样器 SIL -40C XS 质 谱 仪：：LCMS -2050 色谱工作站： Labsolutions Ver .5.114 1.2分析条 件 液相色谱条件 色谱柱：Shim-pack GISS C18 (50 mm×2.1mml.D.，1.9 um)；P/N： 227-30048-01；岛津((上海)实验器材有限公司 流 动相 试剂盒提供 流速：：0.5 mL/min 柱 温 ：40°C 进样量： 2uL 洗脱方式： 梯度洗脱，B相初始浓度为1%，时间程序见表1。 表 1 梯度洗脱时 间 程序 Time(min) Module Command Value 0.50 泵 B.Conc 1 2.00 泵 B.Conc 50 2.50 泵 B.Conc 98 3.00 泵 B.Conc 98 3.10 泵 B.Conc 1 5.00 控制器 Stop 质谱条件 离 子 化模式：E ESI+ 雾化 气 流速：22.0 L/min 接口电压：33kV 干燥气流速：55.0 L/min 脱溶剂 温 度：2250°℃ 加热气流速： 7.0 L/min DL温 度：1150°℃ 扫描模式：选择离子监测 (SIM) MRM 参数：见表2 表2 MRM 参数 编号 中文名 英文名 CAS 号 SIM 离子 1 万古霉素 Vancomycin 1404-90-6 725.1 2 万古霉素内标 Vancomycin-IS 690.9 1.3校准品及样品制备 素测定试剂盒(山东英盛生物技术有限公 司 )参照试剂盒说明书进行实验。试剂盒包含 古霉素校准品、低中高浓度质控品 LQC、MQC、HQC、万古霉素内标、万古 霉 素校准品稀释液、万古霉素提取液、流动相A、流动相B、96孔 蛋白沉淀板。 内标浓缩液制备：取100uL纯水加入到 万 古霉素内标 干 粉小瓶中，超声2 min， 涡旋震荡1 min，冰箱冷冻保存。 内标工作液制备 ：取内标浓缩液，按 1：199 用内标提取液稀释混匀，得内标工作液，现用现配。 高 浓度校准品溶液制备：取1mL纯水加入到万 古 霉素校准品冻干粉小瓶中，溶解混匀。 万 古霉素校准品稀释液制备：取3mL纯水加入到万古霉素校准品稀释液冻 干 粉小瓶中，溶解混匀。 基质匹配校准曲线制备：用校准品稀释液，依此按 1：1等比例稀释校准品溶液，共6个浓度，得基质校准溶液，基质校准曲线浓度分别为 50 ug/mL、25 ug/mL、12.5 ug/mL、6.25 ug/mL、3.125 ug/mL、1.5625 ug/mL。 基质匹配质控品溶液制备：取1mL纯水加入到万古霉素质控品冻 干 粉小瓶中，溶解混匀，低中高浓 度 质控 品浓度分别为 4.72 ug/mL、9.62 ug/mL、37.81 ug/mL。 校准品、质控品及样品溶液制备： ■结果讨论 2.1 SIM 色谱图 图1校准曲线最低 点 谱图 2.2线性测 定 结果 对校准品按1.2中的分析条件进行分析，内标法 制 作校准曲线。万古霉素在1.5625~50 ug/mL浓度范围内 线性相关系数为 0.9992， 准确度在 95.3%~103.6%之间，满足测定 需 求。 2.3准确度及精密度 测 定结果 按1.3中 的前处理方法对低 中 高浓度质控品进行前处理，每个浓度质控品重复制备6份，按1.2中的分析条 件对质控品进行分析，质控品的准确度结果如表3所示，结果显 示 质控品测定准确度结果与理论值接近，回收 率在 92.5%~101.1% 之间， RSD 在 1.5%~1.8%之间，满足临床 测 定需求。 表3质 控准确度 考 察结果(n=6，浓度 单 位 ug/mL) 质控 项目 数值 LQC 理论浓度 4.72 测定浓度 4.69 质控范围 4.013~5.429 质控准确度% 99.4 RSD% 1.8 理论浓度 9.62 MQC 测定浓度 9.73 质控范围 8.179~11.065 质控准确度% 101.1 RSD% 1.5 HQC 理论浓度 37.81 测定浓度 34.98 质控范围 32.140~43.484 质控准确度% 92.5 RSD% 1.6 结论 使用岛津小型单四极杆质谱仪 LCMS-2050， 建立了血 清 中万古霉素测定方法。使用内标、校准品及质控品 进行了方法的线性、准确度及精密度的考察。结果显示该方法线性良好，校准曲线相关系数大于0.999，质控品 测 定准确度结果 与 理论值接近，回收率在92.5%~101.1%之间， RSD 在 1.5%~1.8%之间 ，该方法前处理简便，分析速度快，灵敏度高，专属性强，可用于万古霉素治疗药物监测。 岛津应用云