LCMS检测血浆中多黏菌素B浓度

使用岛津小型单四极杆质谱仪LCMS-2050，建立了血浆中多黏菌素B1及多黏菌素B2测定方法。使用校准品及质控品进行了方法的线性、准确度及精密度的考察。结果显示该方法线性良好，校准曲线相关系数均大于0.999，质控品测定准确度结果与理论值接近，PMB1及PMB2回收率分别在在98.7%~102.8%之间及99.6%~101.3%之间，RSD分别在0.9%~1.0%之间及0.9%~2.2%之间，该方法前处理简便，分析速度快，灵敏度高，专属性强，可用于多粘菌素B治疗药物监测。SSL-CA23-073Excellence in Science Excellence in ScienceLCMS-039 LCMS 检测血浆中多黏菌素B浓度 LCMS-039 摘要：使用岛津小型单四极杆质谱仪建立了血浆中多黏菌素B 测 定方法。使用校准品及质控品进行了方法的 线性、准确度及精密度的考察。结果显示该方法线性良好，校准曲线相关系数大于0.999，质控品测定准确度 结果与理论值接近，多黏 菌 素 B1及多黏菌 素 B2回收率分别在在98.7%~102.8%之间及99.6%~101.3%之间，RSD 分 别 在 0.9%~1.0%之间及 0.9%~2.2%之间，该方法前处理简便，分析速度快，灵敏度高，专属性强，可 用于多黏菌素B治疗药物监测 。 关键词：小型单四极杆质谱仪 义 血浆 多黏菌素B 治疗药物监测 技术特点： 心方法前处理简单，仅需简单蛋白沉淀即可上样分析。 多黏菌 素 B( polymyx i n B， PMB) 是一种由N-端 脂肪酰基链、线性三肽、环状七肽构成的超过 30多种 多肽混合物，由于其化学结构式上的氨基酸种类、构 型 及N-端脂肪酰基链取代基的不同造成PMB中同系 物、异构体较多，临床上多用多黏菌素 B1 (PMB1)和 多黏菌素 B2 (PMB2) 表征其体内药动学特征。多黏菌 素 B对大多数革兰氏阴性菌有抑制作用，其 主 要应用 于绿脓杆菌及其他假单孢菌引起的创面、尿路以及眼、耳、气管等部位感染，也可用于败血症、腹膜炎。但 多粘菌 素 的不合理使用，可 能会造成肾毒性、引起头 晕等副作用。多粘菌素 导 致的 肾毒 性，可导致患者肾 功能下降，并可引起蛋白尿、肾小管尿、氮质血症和 肌酐水 平 升高，这是对肾功能的 主 要损害。并且多粘菌 素在使用过程中可能导致患者头晕、共济失调 、嗜睡和 外周感觉异常。因此，为避免不良反应、提高临床疗效，应尽可能通过治疗药物监测(TDM)控制来指导 PMB的 临 床应用。目前常用的 PMB 血药浓度监测方法 包 括高 效液相色谱法 、毛细管电泳法、高效液相色谱-串联质 谱法等，而使用 LCMS 法测定多黏菌 素 B的报道较少。 使用岛津小型单 四 极杆质谱仪 LCMS-2050， 建立 了血浆中多黏菌素B测定方法，该方法前处理简便，分析速度快，灵敏度高，专属性强，可用于多黏菌素B 治疗药物监测。 1.1仪器 本实验使用单四极杆质谱 LCMS-2050 系统。具体配置为： 系统控制器： CBM-40 在线脱气机：：DGU-405 输 液 泵 LC-40D XS×2 柱温 品 箱 自：CTO-40C 自动进样器 SIL-40C XS 质 谱 仪：：LCMS-2050 色谱工作站： Labsolutions Ver.5.114 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱：Shim-pack GIST 100 mm×2.1 mml .D.， 3 um； P/N： 227-30008-05；岛津(上海)实验器材有限公司 流 7动相 A 相为0.1%甲酸水溶液；B相为0.1%甲酸乙腈溶液 进样体积 只5uL 柱 温 ：45℃流 速 0.4 mL/min 洗 针液：甲醇/水=1：1 (v：v) 洗脱方式： 梯度洗脱，B相起始浓 度 为5%，时 间 程序如表1所示。 表 1 梯度洗脱时 间 程序 Time(min) Module Command Value 0.5 泵 B.Conc 5 3.00 泵 B.Conc 40 3.50 泵 B.Conc 95 4.00 泵 B.Conc 95 4.10 泵 B.Conc 5 6.00 控制器 Stop 质谱条件 离 子 化模式：E ESI+ 雾化 气 流速：22.0 L/min 接口电压：33kV 干燥气流速：55.0 L/min 脱溶剂温度：4450°℃ 加热气流速： 7.0 L/min DL温 度：1150°℃ 扫描模式：选择离子监测 (SIM) MRM 参数：见表2 表2SIM 参数 编号 中文名 英文名 分子式 分子量 CAS 号 SIM 离子 电荷数 1 多黏菌素B1 PMB1 C56H9gN16013 1203.5 4135-11-9 401.8 3 2 多黏菌素 B2 PMB2 C55H96N16O13 1189.5 34503-87-2 397.2 3 1.3校准品及样品制备 基质匹配校准曲线制备：取PMB1及多黏菌素 PMB2校准样品 L1~L6各 10 uL， 加入90 uL空白血浆，涡 旋混匀 l mi n ， 得基质校准溶液，基质校准曲线浓度见表3。 基质匹配质控品溶液制备：取低中高浓度质控品 LQC， MQC， HQC各 10 uL，加入90 uL空白血浆，涡旋 混匀 1 min， 得基质匹配质控品溶液，浓度分别为 0.75 ug/mL， 2.5 ug/mL， 10.0 ug/mL 。 表3校 准曲线浓度表 (ug/mL) 名称 L1 L2 L3 L4 L5 L6 PMB1 0.5 1.0 2.0 5.0 15.0 20.0 PMB2 0.5 1.0 2.0 5.0 15.0 20.0 校准品、质控品及样品前处理： ■结果讨论 2.1 SIM 色谱图 图1PMB1 及 P MB2 谱图 2.2线性测定结果 对校准品按1.2中的分析条件进行分析，外标法制作校准曲线。校准曲线结果见表 4， PMB1 及 PMB2 在校 准曲线浓度范围内线性相关系数大于0.999，准确度分别在98.6%~102.0%及95.0~106.0%之 间，满足测定需求。 表44校准曲线结果 名称 线性范围 (ug/mL) 相关系数 准确度(%) PMB1 0.5~20.0 0.9999 98.6%~102.0% PMB2 0.5~20.0 0.9990 95.0%~106.0% 2.3准确度及精密度 测 定结果 按1.3中 的前处理方法对低 中 高浓度质控品进行前处理，每个浓度质控品重复制备6份，按1.2中的分析条 件对质控品进行分析。质控品的准确度结果如表5所示，结果显 示 质 控 品测定准确度结果与理论值接近， PMB1及 PMB2 回收率分别在在98.7%~102.8%及99.6%~101.3%之间， RSD分别在 0.9%~1.0%及0.9%~2.2%之间，满足临床测定需求。 表5质控准确度考察结果(n =6，浓度单位 ug/mL) 质控 项目 PMB1 PMB2 LQC 理论浓度 0.75 0.75 测定浓度 0.74 0.76 质控准确度% 98.7 101.3 RSD% 0.9 2.2 MQC 理论浓度 2.5 2.5 测定浓度 2.51 2.49 质控准确度% 100.4 99.6 RSD% 0.9 0.9 HQC 理论浓度 10.0 10.0 测定浓度 10.28 10.09 质控准确度% 102.8 100.9 RSD% 1.0 1.2 结论 使用岛津小型单四极杆质谱仪LCMS-2050， 建立了血浆中多黏 菌 素 B1及多黏菌 素 B2测定方法。使用校 准品及质 控 品进行了方法的线性、准确度及精密度的考察。结果显示该方法线性良好，校准曲线相关系数均 大于0.999，质控品测定准确度结果 与 理论值接近， PMB1及 PMB2回收率分别在在98.7%~102.8%之间及 99.6%~101.3%之间， RSD 分别在 0.9%~1.0%之间及0.9%~2.2%之间，该方法前处理简便，分析速度快，灵 敏度高，专属性强，，可用于多粘菌素B治疗药物监测。 岛津应用云