本文建立了一种使用岛津质谱引导型高效液相制备色谱用于药物中多组分的制备分离的方法。以分离制备阿托伐他汀钙片中的有关物质为例,采用反向液相色谱,分别以紫外,质谱以及紫外和质谱同时触发馏分收集,详细说明了不同触发方式的参数设置以及LH-40的制备模拟功能,使用不同的触发方式都可以对目标组分进行准确的收集。多种触发收集模式,满足不同性质的化合物制备需求。
本文采用岛津新型液体处理器LH-40作为进样器和馏分收集器,单四极杆质谱LCMS-2020作为质谱检测单元,以分离制备阿托伐他汀钙片中的有关物质为例,分别以紫外,质谱以及紫外和质谱同时触发馏分收集,详细说明了不同触发方式的参数设置以及LH-40的制备模拟功能,并且对不同参数设定得到的不同结果进行了说明。相对于紫外检测器引导的制备色谱而言,质谱的加入可以很好的弥补紫外检测器不足,两者相辅相成,可以使得收集结果更加的准确、收集方式更加多样化,以适用于不同性质的化合物制备需求。SSL-CA23-098 Excellence in ScienceLCMS-041 Excellence in Science 质谱引导型制备液相用于药物中多组分鉴别 及分离 LCMS-041 摘要:本文建立了一种使用岛津质谱引 导 型高效液相制备色谱用于药物中多组分的制备分离的方法。以分 离 制备阿托伐他汀钙片中的有关物质为例 ,采用反向液相色谱,分别以紫外,质谱以及紫外和质谱 同 时触发馏分 收集,详细说明了不 同 触发方式的参数设置以及 LH-40 的制备模拟功能,使用不同的触发方式都可以对目标 组分进行准确的收集。多种触发收集模式,满足不 同 性质的化合物制备需求。 关键词:LH-40质谱 制备分离 阿托伐他汀钙 技术特点: *详细说明了 LH-40 馏分收集的参数设置。 性确认需要花费大量时 间 ;对于无紫外吸收的样品,则 无法使用紫外触发馏分收集,以上都是紫外检测器对制 备分离应用的制约。质谱检测器的加入可以很好的弥补 紫外检测器的短板,可以更快的对多个色谱峰进行定性 确认;;可以在目标组分没有紫外响应或者响应较弱时使 用质谱触发馏分收集,得到的结果更加准确。 本文采用岛津新型液体处理器 LH-40 作为进样器 和馏分收集器,同时采集紫外和质谱两路信 号 ,提供紫 外和质谱两种检测模式的多种触发馏分收集方式,为相 关仪器提供一种高效、灵敏、可靠的液相制备分离手段。 1.2分析条件 液相条件 色谱柱 InertSustainTM C18 200 mm×4.6 mml.D., 5um 输 液 泵 A 相-20mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸),B相 -乙腈 流速 束: 1.0 mL/min 柱 温: 40℃ 进样体积 只 ::20 pL 检测波长: 254nm 洗脱方式:梯度洗脱,,初始浓度为B相45%,洗脱程序见表1 表 1 梯度洗脱程序 Time Module Command Value 10.00 Pumps Pump B Conc. 45 25.00 Pumps Pump B Conc. 50 30.00 Pumps Pump B Conc. 95 37.00 Pumps Pump B Conc. 95 37.10 Pumps Pump B Conc. 45 45.00 Controller Stop 质谱条件 质 谱 监测类型 : 质量数色谱图(MC) 1.3样品前处理 样品溶液配 制 :取 阿 托伐他汀钙与杂质I、杂质Ⅲ、杂质Ⅲ、杂质Ⅳ、杂质V、杂质ⅥI、杂质ⅧI对照品各约2.5mg, 置50mL量瓶中,加二甲基甲酰胺稀释至刻度,摇匀。 结果讨论 2.1分离条件探索 将 上 述 样 品溶液按1.2中的分析条件进行测定,色谱图如图1所示。阿托伐他汀钙及部分杂质的色谱峰信息 见表2。 图1 样 品 UV 色谱图和离子流色谱图 表2 色谱峰信 息 表 NO. 名称 保留时间 M+H+ M-H- 1 杂质VI 12.3 718.30 716.25 2 杂质Ⅰ 21.0 541.45 539.25 3 杂质Ⅱ 22.1 559.60 557.15 4 阿托伐他汀 23.0 559.40 557.25 5 杂质Ⅲ 23.8 577.30 575.20 6 杂质Ⅳ 30.4 541.40 539.20 7 杂质Ⅵ 32.8 432.05 430.05 8 杂质Ⅴ 34.9 655.50 653.25 2.2馏分收集 2.2.1馏分收 集 的参数设置流程如下: 步骤1.选择合适的触发馏分收集的方式,若需要使用MS 触发收集,需要在“模拟输出”项下选择MS对 应的通道,以及需要监控的质量数。 口仪器参数视图 常规 高级 结 束时间:45.00 min 馏分收集器 输出 分析时间(min) 类型 m/z(1) m/z(2) m/z(3) m/z( 1 0.000-45.000 MC 718.20 577.20 541.20 2 0.000-45.000 TIC 如下图所示,勾选“启用馏分收集器”,根据触发模式在“制备触发器”的开始和结束选项中选择对应的通 道和命令,可 根据 需 要选择:满足单独通道的参数或者同时满足两个通道的参数。 步骤2.编辑馏分收集开始和结束 的 命令,如下图所 示 ,可 以选择根据色谱峰的级别或者斜率触发馏分收 集 开始和结束的命令。 步骤3.如下图所示,可将最终确定的液相条件时采 集 的色谱峰导入,点击步骤2示意图中“模拟”按钮,会在制备模拟结果显示出 当 前条件 下 的收集结果。其中颜色区域是会进行馏分收集的区域。 0.000 0.000 8.333 步骤4.可根据 需 要添加其它条件,以添加锁定区域为例说明。如下图所示,可在时间程序列表中添加处理 命令,包括锁定时间段,更改参数值等命令; 也可以直接在模拟制备结果右侧的时间程序中添加命令,添加后点击步骤2示意图中“应用”按钮,即可 自动生成时 间 程序列表。 设置完所有的参数后,点击步骤2示意图中 “模拟”按钮,在制备模拟结果中 显 示的就是所有命令下的模 拟收 集 结果。 2.2.2 UV 触发馏分收集 选择 Ch2, 使用UV触发馏分收集,“制备触发器”的开始和结束均选择 Ch2。按照级别进行收集,级别参 数设置为 7000 uV,添加了4个锁定的时间段,此处锁定对该时间段内色谱 峰 不进行收 集 ,模拟收 集 结果如步 骤4中所示。按照上述馏分收集参数进行馏分收集,结果如图2所 示 。实际的馏分收集结果与模拟馏分收集结 果一致。 图2UV 触发馏分收集结果 2.2.3 MS 触发馏分收集 选择 Ch1, 使用MS触发馏分收集 ,选择 MS 模拟信号输出 m/z分别为718.20、577.20和541.20。 “制备 触发器”的 开始和结束均选择 Ch1。按照级别进行收集,级别参数设置为 50000 pV,添加 了 4个锁定的时间段。 按照上述馏分收集参数进行馏分收集,结果如图3所示。杂质Ⅲ的模拟信号满足级别要求,但由于保留时 间 在锁定区间内,因而未收集该馏分;根据图4所示,杂质Ⅴ在的质谱图中也能提取到 m/z 541, 因而也对该 杂质进行了馏分收集。 图3 MS触发馏分收集结果 图4 杂质Ⅴ质谱图 2.2.4 UV 和 MS 共同触发馏分收集 选择 Ch1 和 Ch2,使用 MS和UV 联合触发馏分收 集,选择 MS 模拟信号输出 m/z分别为718.20、577.20和655.20。 “制备触发器”的开始选择 Chl AND Ch2 (需要同时满足 MS 和UV条件),制备触发器结束选择 Ch1 OR Ch2 (MS 和 UV 满足其中一个条件)。按照级别进行收集, Ch1级别参数设置为 50000 pV, Ch2级别 参数设置为 7000uV。添加了4个锁定的时间段。 按照上述馏分收集参数进行馏分收集,结果如图5所示。杂质Ⅲ的模拟信 号 满足级别要求,但由于保留时 间在锁定区间内,因而未收集该馏分;其余馏分正常收集。 图5 UV 和 MS 共同触发馏分收集结果 ■结论 本文采用岛津新型液体处理器 LH-40 作为进样器和馏分收集器,单四极杆质谱 LCMS-2020 作为质谱检测单 元,以分离制备阿托伐他汀钙片中的有关物质为例,分别以紫外,质谱以及紫外和质谱同时触发馏分收集,详 细说明了不同触发方式的参数设置以及 LH-40的制备模拟功能,并且对不同参数设定得到的不同结果进行了说 明 。相对于紫外检测器引导的制备色谱而言,质谱的加入可以很好的弥补紫外检测器不足,两者相辅相成,可 以使得收集结果更加的准确、收集方式更加多样化,以适用于不 同 性质的化合物制备需求。 岛津应用云
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