液相色谱法测定通关藤中通关藤苷H含量

通关藤又名乌骨藤，近年来，临床及药理研究证实，通关藤提取物对肝癌、肺癌、食管癌、大肠癌等多种恶性肿瘤有良好的抑制效果。2020版《中华人民共和国药典》中明确规定以干燥样品记，通关藤苷H不得少于0.12%。依据药典方法，福立仪器采用LC5090高效液相色谱仪，搭载蒸发光散射检测器，精准锁定样品中通关藤H含量。部分数据结果如下，下载可查看全文：（1）对照品测定谱图：准确称取通关藤苷H标准物质（纯度98.23%），0.0031g，转移至10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度,经微孔滤膜过滤后待测。对照品溶液（进样量20μL）测定谱图（2）通关藤样品测定谱图：样品中测得通关藤苷H含量0.4527%，符合药典含量要求。FULI文件号： FLYQ-AD-FA-01浙江福立分析仪器股份有限公司 通关藤 一、检测方法： 依据《中国药典》2020年版一部：通关藤。 二、方法提要 样品经研磨过筛后溶解超声过滤，滤液经蒸干后，残渣经溶解并重新定容，摇匀过滤、以配备蒸发光散射检测器的高效液相色谱仪进行测定，根据保留时间初步定性，外标法定量。 三、试剂和材料 3.1乙腈 (CH，CN))：：色谱纯。 3.2甲醇(CH，OH)：色谱纯。 3.3水：娃哈哈纯净水。 3.4通关藤苷H标准物质：纯度98.23%。 四、仪器和装置 4.1高效液相色谱仪：福立 LC5090 高效液相色谱仪，配备 LC5090在线脱气机、LC5090二元高压输液泵、LC5090 自动进样器、LC5090柱温箱、蒸发光散射检测器、GCK3308 全自动空气源。 4.2色谱柱： NuovaSilM C18色谱柱，柱长250mm， 内径4.60mm ， 粒径为 5.0 um。 4.3天平：精度为0.0001g。 4.4一次性注射器。 4.5针头过滤器：0.45 um 有机滤膜。 4.6抽滤瓶。 4.7真空泵。 4.8研磨机。 4.9超声清洗仪。 4.10水浴锅。 4.11筛子。 4.12一般实验室常用仪器和设备。 五、实验 5.1对照品溶液配制 准确称取通关藤苷H标准物质(3.4)0.0031g(精确到0.1mg)，转移至10ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，经微孔滤膜过滤后待测。 5.2样品制备 取本品粉末(过筛)2.5001g，精确至0.0001g， 置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，经微孔滤膜过滤后待测。 5.3分析结果 5.3.1对照品溶液典型谱图及结果果(进样量10uL) 峰序 组分名 保留时间/min 峰高/uAU 峰面积/uAU*S 理论塔板数 拖尾因子 1 通关藤苷H 16.727 15278 5692 13648 0.998 5.3.2对照品溶液典型谱图及结果限(进样量20pL) 峰序 组分名 保留时间/min 峰高/uAU 峰面积/uAU*S 理论塔板数 拖尾因子 1 通关藤苷H 16.768 40968 14792 15067 1.035 5.3.3对照品溶液五针重复性谱图及结果(进样量 20uL) 峰序 组分名 保留时间平均值/min 保留时间RSD/% 面积平均值/uAU*s 面积RSD/% 峰高平均 峰高RSD/% 谱图数 1 通关藤苷H 16.774 0.160 14692 0.435 40850 1.961 5 5.3.3标准曲线 标准曲线的绘制：分别进样对照品溶液 10 uL、20 uL， 进行 HPLC 分析。然后以峰面积的对数值(以10为底)为纵坐标，以目标物质量的对数值(以10为底)为横坐标，绘制标准曲线。 组分[通关藤苷H]： 曲线方程： 1g(Wi) = -5.24183 + 0.725763*1g(Ai) 校正因子：f0=-5.24183， fl=0.725763 相关系数：r~2=1.00000 lg(Wi) [lg(mg)] 5.3.4样品典型谱图及结果 峰序 组分名 保留时间/min 峰高/uAU 峰面积/uAU*S 理论塔板数 拖尾因子 含量/% 1 通关藤苷H 16.911 34138 13369 12566 1.097 0.4527 说明： 《中国药典》2020年版一部规定，通关藤中的通关藤苷H不得少于0.12%。结果表明，实验中所用的通关藤中的通关藤苷H含量为 0.4527%，符合要求。 六、实验结果 方法验证结论：通关藤苷H的精密度、线性相关系数结果汇总如下： 化合物 保留时间(min) 峰面积RSD ((%) 标准曲线线性相关系数 通关藤苷H 16.774 0.44 1.000 由以上实验结果可知，采用福立 LC5090测定重要通关藤中的通关藤苷H，方法稳定可靠，目标物线性范围良好，灵敏度较高，有很好的重现性，能够对样品进行准确定性定量。