采用TSKgel G6000PWXL尺寸排阻色谱柱测定葛仙米水溶性多糖含量

葛仙米属于蓝藻门念珠藻科，是我国传统的可食用蓝藻之一。葛仙米多糖是由葡萄糖、半乳糖和葡萄糖醛酸等多种单糖组成，具有抗肿瘤、抗凝血与抗菌等作用。研究表明葛仙米多糖主要为大分子量多糖，且该多糖部分没有蛋白和核酸的吸收，可采用HPLC-RI方法进行定量分析。这里分享的文献中，作者采用TSKgel G6000PWXL凝胶色谱柱及示差折光检测器（RI）检测建立了一套高效液相色谱快速、准确直接测定葛仙米中大分子量多糖含量的方法。采用 TSKgel G6000PWXL色谱柱测定葛仙米水溶性多糖含量 葛仙米水溶性多糖 (Nostoc sphaeroids kitzing water-soluble polysaccharide) 【基本信息】 葛仙米 (Nostoc sphaeroids kutzing)属于蓝藻门念珠藻科。葛仙米多糖是由葡萄糖、半乳糖和葡萄糖醛酸等多种单糖组成，具有抗肿瘤、抗凝血与抗菌等作用。研究表明葛仙米多糖主要为大分子量多糖，且该多糖部分没有蛋白和核酸的吸收，可采用 HPLC-RI 方法进行定量分析。这里采用 TSKgel G6000PWXL 色谱柱及示差折光检测器(RI)检测建立了一套高效液相色谱快速、准确直接测定葛仙米中大分子量多糖含量的方法。 【分析条件】 色谱柱： TSKgel G6000PWXL (I.D. 7.8 mm×30 cm， 13 um) 流动相：0.05M磷酸二氢钠+0.15M硝酸钠(pH7.0) 流速：0.5mL/min 进样体积：：100uL 柱温：30℃ 检测器：RI 【溶液配制】 样品溶液配制：准确称取葛仙米 100.0 mg，按料液比(W/V， g/mL) 1：500加入超纯水，提取时间5h，提取温度100℃，迅速冷却至室温离心(离心机转速9000g、时间15 min)， 上清液经0.22 u.m 的水相微孔膜过滤，进样分析，测出峰面积，按以下测定方法中公式，计算出葛仙米水溶性多糖的含量。 标准曲线溶液配制：将标准溶液(质量浓度为 10 mg/mL)配制成质量浓度为 10 mg/mL、5mg/ml、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL、0.15625 mg/mL、0.078625 mg/mL在上述色谱条件，进行色谱分析，分别取 100 uL标准溶液进行分析，以进样量浓度与峰面积作标准曲线，得到标准样品线性方程和定量上下限。 【测定方法】 将经过预处理的葛仙米多糖提取液按标准溶液的测定条件测出峰面积。根据线性方程和以下公式算出葛仙米多糖的含量。多糖含量=D/Mx100%，其中，D为根据线性方程算出葛仙米多糖的质量体积比(mg/mL)， M是原料质量体积比(mg/mL)。 图1标准品和样品对比色谱图 图2纯水和样品紫外280nm 检测下对比谱图 【结果与讨论】 以醇沉的葛仙米多糖为标准品，在0.015625-5.0 mg/mL内，峰面积与进样量作标准曲线得到线性方程Y=1995695.548X-170.597，峰面积与样品浓度，线性关系良好(R=0.999)，定量上限为 10 mg/mL、下限为 0.078625 mg/mL。 HPLC 法测定葛仙米多糖与苯酚硫酸法相比，优势在于可以测定特定分子量范围的多糖。该方法可以在大分子多糖无蛋白和核酸干扰的情况下使用，能更加准确地定量。HPLC 法测定大分子多糖和苯酚硫酸法测定总糖这两种方法进行结合更好地表征葛仙米多糖的特征。 ( 【参考资料】 ) ( 1.苏攀峰， 唐 庆九，陈盛，赵立彬， 3 王 玉兰 ， 刘 艳芳，周帅，许剑锋高效液相色谱法测定 葛 仙米水溶性多糖 含量 上海农业 学 报.2020，36(1)：105-110 )