食品中氨基酸检测方案(液相色谱柱)

TSKgelTECHNICALINFORMATIONNo.177 使用亲水作用色谱法(HILIC)分析食品中的氨基酸 Analysis of amino acids in food using hydrophilic interaction chromatography 进行分析：(1)柱后标识：使用离子交换色谱柱分离样品后，使样品与OPA 或茚三酮等衍生剂反应，然后用 UV 或荧光法进行检测；(2)柱前标识：用色谱柱分离预先与衍生剂反应的分析物，然后用UV、荧光或 MS 方法检测；(3)直接分析：用色谱柱分离后，无需衍生化就使用 MS 检测样品。 通过直接法分离利用了反相色谱法或使用离子对试剂的亲水作用色谱法(HILIC)，本报告介绍的是使用 HILIC 法进行直接分析的应用。 除了17种蛋白氨基酸外，还选择牛磺酸(贝壳中含有)、茶氨酸、v-氨基丁酸 (GABA)(包括 氨基酸的 HPLC 分析通常主要采用三种方法 α和β异构体，茶叶中含有)进行分析，总共22种物质。使用 TSKgel NH2-100 3 um氨基柱和甲酸/甲酸铵水溶液和乙腈进行梯度洗脱分离。使用：EESI电离法处理各氨基酸的质子化分子[M+H]，用作检测离子。图1为标准样品的色谱图。在该分析条件下，亮氨酸、异亮氨酸和 GABA (a、β和y异构体)的分离效果令人满意。另外，在该分析条件下制备的各氨基酸校准曲线在5到500 umol/L的浓度范围内都呈现出良好线性。 保留时间(min) 图1.标准氨基酸的SIM 色谱图(各10~500 umol/L) 图2所示为酱油中的氨基酸的分析示例。用水将酱油稀释10倍后，使用流动相A/流动相B(2/8[v/v])继续稀释，然后过滤(醋酸纤维素膜、0.5 pm孔径)，将滤液用作检测样品。. 在本文描述的分析条件下，可以分析从碱性到酸性的各种游离氨基酸。除了含有氨基酸的食品外，该条件还可用于分析茶叶、保健品和其它食品。 表1.分析条件 HPLC MS 色谱柱：TSKgel NH2-100 3 pm (2.0mml.D. x15cm) 仪器： QTRAP (AB SCIEX) 流动相A： 0.2%HCOOH+10 mmol/L HCOONH4 电离： ESI 流动相B： CH3CN 模式： SIM 梯度： B浓度(0 min)90%→(20-27 min)10%一(27.1 min)90% 流速：00.2 mL/min 进样量：5pL 40℃ 柱 温 ：i ： 4 图2酱油中的氨基酸 SIM 色谱图